PDCD5與P53在非小細胞肺癌患者血清中的表達及意義

李海燕 劉 紅

(鄭州大學第五附屬醫院，河南 鄭州 450052)

腫瘤的發生不僅與其高速的細胞增殖率有關，也與其細胞死亡速率高有關。PDCD5 mRNA在人體很多組織都有表達，在胚胎組織中的分布小于成年組織。PDCD5定位于細胞核內，考慮是具有重要功能的管家基因，其氨基酸序列相對保守，在物種間具有穩定性，是具有重要生物學功能的基因。將凋亡誘導因素引入細胞中，方可誘發細胞凋亡，考慮其是凋亡促進劑，而非誘導劑，并可正調控caspase-3，參與細胞凋亡的正調控。體外實驗表明，PDCD5編碼的蛋白主要分布于細胞內，在多種腫瘤細胞中均有異常表達。非小細胞肺癌(NSCLC)患者血清中是否有表達尚不清楚。而野生型P53(正常型P53基因)，是目前研究較多的重要的抑癌基因，具有明顯的抑制細胞凋亡的作用。本實驗擬了解NSCLC患者血清中PDCD5及P53蛋白表達水平及意義。

1 資料與方法

1.1研究對象 選擇鄭州大學第一附屬醫院2010年9月至2011年9月在我科住院患者200例，肺部良性疾病80例(肺炎23例，支氣管炎17例，結核性胸膜炎4例，支氣管哮喘急性發作期16例，肺間質纖維化20例)，男44例，女36例，32～81歲，平均46歲；肺部腫瘤患者均經病理證實，共120例，其中鱗癌62例，腺癌58例，臨床分期為I～Ⅱ期40例，Ⅲ～Ⅳ80例，男66例，女54例，年齡42～77歲，平均54歲。

1.2試劑與儀器 PDCD5及P53雙抗體夾心酶聯試劑盒酶聯免疫吸附法(EUSA)試劑盒由Biosolomen公司提供的進口分裝試劑盒，內含標準品、標準品稀釋液、酶標包被板、鏈霉親和素-HRP，30倍濃縮洗滌液，生物素標記的抗-PDCD5及-P53抗體、顯色素、終止液、封板膜、密封袋。Model 450酶標儀為美國Bio-RAD公司生產。

1.3方法 血樣采集:所有被檢測者及肺部良性疾病者，均抽取清晨空腹血2 ml，血樣室溫自然凝固20 min，離心1 000 r/min，離心20 min，收集上清液，-80℃凍存待測。樣本檢測：根據PDCD5及P53所用ELISA試劑盒進行操作，設立空白孔、標準品孔、樣本反應孔，各孔按要求配置好，然后按要求加樣，然后蓋上封板膜，37℃溫育60 min，后配置洗滌液，洗滌，拍干，加入顯色劑顯色，終止顯色，測定吸光度OD值，描繪標準曲線，計算對應樣品濃度。

2 結 果

按肺部良性及惡性病變，分為肺癌未化療組、肺部良性病變組，肺癌未化療組患者血清PDCD5蛋白平均值與肺部良性病變組比較差異具有統計學意義(168.22±146.42 vs 255.67±194.84，t=-2.731,P<0.05)。肺癌未化療患者血清P53蛋白平均值與肺部良性病變組比較差異具有統計學意義(349.09±426.34 vs 919.73±902.09，t=-2.481,P<0.05)。

肺癌患者中，男性患者血清PDCD5蛋白平均值與女性患者比較差異具有統計學意義(t=-2.640,P<0.05)。

將肺癌患者分為吸煙組、不吸煙組，肺鱗癌、肺腺癌組，肺癌化療前患者、肺癌化療后患者，肺癌肺癌患者I～Ⅱ期、肺癌患者Ⅲ～Ⅳ期，肺癌患者遠處淋巴結轉移、肺癌患者遠處淋巴結未轉移，患者血清中PDCD5、P53含量均無統計學意義(P>0.05)，提示肺癌病理不同類型、肺癌化療、肺癌分期、肺癌患者淋巴結轉移情況對PDCD5及P53含量均無影響。見表1。

表1 肺癌患者PDCD5、P53蛋白含量表達比較±s，ng/ml)

3 討 論

PDCD5定位于19q12～13.1由6個外顯子和5個內含子組成。基因全長6 kb,cDNA基因全長約有559 bp，其中25～399有一個編碼125個氨基酸殘基的讀碼框，在25 bp處有一個ATG起始密碼。PDCD5 蛋白相對分子質量為14×104,等電點為5.65，分為三個結構域。外顯子6可能是一個編碼與促凋亡活性密切相關的功能結構域。

P53是抑癌基因，當P53表達增強時，細胞出現3種表型:即無變化、生長停滯在G1期和細胞凋亡。P53可以激活bad基因而誘導細胞凋亡。P53是人類最容易突變的基因，突變型P53被認為是與耐藥相關的一種新的基因〔1〕，野生型P53被認為是與細胞凋亡關系密切的基因，編碼的P53蛋白是一種半衰期短的核內磷酸化蛋白，能和DNA的特定順序結合，調節其周圍基因的轉錄。細胞DNA受到損傷時，P53可使細胞停止于G1/S期，恢復細胞正常結構；若不能恢復，則啟動細胞凋亡程序。而突變型P53功能則相反，可以抑制細胞凋亡，促進增殖。本文中120例NSCLC患者血清中存在P53蛋白表達，較肺部良性疾病組含量明顯減低，且其在肺癌患者血清中有表達。說明其在肺癌的發病機制中有抑制腫瘤生長的作用。

PDCD5可結合活化的Caspase-3,并且純化的PDCD5重組蛋白可明顯延長活化的Caspase-3的體外半衰期，提示PDCD5可能作為Caspase-3正調控分子參與細胞凋亡。本研究中NSCLC患者血清中存在PDCD5蛋白表達，較肺部良性疾病組含量明顯減低，且其在NSCLC患者血清中有表達，說明其在NSCLC的發病機制中有抑制作用，具體機制尚待研究。

PDCD5基因定位于細胞內，在許多腫瘤細胞、自身免疫性疾病及局部損傷組織中的表達明顯下降，其在消化道腫瘤，如胃癌〔2〕、肝癌〔3〕、大腸癌，呼吸系統腫瘤，如肺癌〔4〕，在血液系統疾病中，如急慢性髓性白血病〔5〕、多發性骨髓瘤中表達降低，生殖系統腫瘤中，如卵巢上皮性癌組織中，組織分級越高，PDCD5下調越明顯,在泌尿系統疾病，如腎癌〔6〕中，也可觀察到同樣結果。本文結果說明NSCLC患者血清中PDCD5蛋白表達與臨床分期可能無關。

對于腫瘤患者伴有遠處淋巴結轉移者，在口腔腫瘤組織研究中發現，遠處淋巴結轉移者，PDCD5免疫組化為陰性，而P53表達陽性，考慮PDCD5表達與淋巴結遠處轉移有關〔6〕，但也發現在一些腫瘤中有高表達現象。PDCD5基因上游35 kb處的sNPh1862214與肺癌發病顯著相關，其變異型攜帶者肺癌發病率高，且在淋巴結轉移的肺癌患者中，出現概率更高〔7〕。本研究說明肺癌患者血清中PDCD5蛋白的水平與淋巴結轉移有無可能無關。

本研究中提示患者血清中PDCD5蛋白含量與性別有關。其機制尚不清楚。

體外實驗，PDCD5在宮頸癌、卵巢癌、肝癌等多種腫瘤細胞系中均可促進腫瘤細胞發生凋亡，并對放、化療起協同作用。本研究提示患者血清中PDCD5蛋白含量與化療與否、肺癌不同類型無關。

有報道，在歐洲有吸煙史的人群中，rs1862214單核苷酸多態性(SNP)在程序性細胞死亡5基因(PDCD5)的表達中，與吸煙有關的肺癌發生率及預后具有關聯性〔8〕。本研究提示患者血清中PDCD5蛋白含量與吸煙無關。

研究表明，PDCD5能增強化療藥物對線粒體膜的破壞，可以在不增加化療藥物劑量和毒性反應的情況下提高化療藥物療效，提供了化療藥物與抗癌基因聯合治療腫瘤的模式〔9〕。患者化療時，增加患者體內重組人PDCD5蛋白(rhPDCD5)蛋白的表達水平，可能成為腫瘤治療的新的方向。綜上，肺癌患者血清中PDCD5蛋白可能與抑制腫瘤生長、促進腫瘤細胞凋亡有關，與性別有關。但其對于腫瘤分期、淋巴結轉移、吸煙、肺癌的病理類型、化學治療與否可能無關，其具體的抑制腫瘤的機制，尚待進一步研究，其應用及研究對于肺癌患者治療及其對于肺癌細胞的促進凋亡的作用及其機制，有待進一步研究。

4 參考文獻

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