自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療帕金森病的療效

王 旭 張志彬 賈芙蓉 王 平

(解放軍第二零八醫(yī)院神經(jīng)介入科，吉林 長春 130062)

傳統(tǒng)的帕金森病(PD)藥物治療應(yīng)用左旋多巴(L-dopa)效果明顯，但長期應(yīng)用會出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)及精神行為等方面難以控制的副作用，從而限制此藥應(yīng)用。丘腦腹后蒼白球消融術(shù)可有效改善PD 運(yùn)動癥狀，但有一定創(chuàng)傷，且有適應(yīng)證的限制。利用干細(xì)胞移植替代凋亡的多巴胺神經(jīng)元，恢復(fù)多巴胺的神經(jīng)環(huán)路，成為治療該病的理想治療方法〔1〕。本研究應(yīng)用自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)移植進(jìn)行治療PD的臨床效果進(jìn)行分析評價(jià)。

1 資料與方法

1.1研究對象 解放軍二零八醫(yī)院2008年6月至2010年12月收治的26例PD患者，男15例，女11例；年齡45～73〔平均(62.5±2.8)〕歲。病程3～10〔平均(6.2±3.6)〕年；Hoehn-Yahr分級：Ⅰ級7例，Ⅱ級8例，Ⅲ級期7例，Ⅳ級4例。均接受復(fù)方多巴制劑。統(tǒng)一PD評分量表(UPDRS)評分均接受抗PD藥物治療，符合2006年中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會運(yùn)動障礙及PD制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔2〕:(1)運(yùn)動減少。(2)至少符合以下1項(xiàng)：①肌肉僵直,②靜止性震顫,③逐漸進(jìn)展,④發(fā)病后多為持續(xù)性不對稱性受累。(3)Hoehn-Yahr Ⅰ～Ⅳ級。(4)既往無肝腎功能異常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①各種繼發(fā)性PD綜合征及PD疊加綜合征；②有癲癇病史及腫瘤病史；③有其他系統(tǒng)嚴(yán)重病癥者，不能耐受干細(xì)胞移植者；④期望值過高或不切實(shí)際要求者。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞分離器械 骨髓穿刺針、高速低溫離心機(jī)、超凈工作臺、細(xì)胞分離液。寧夏中聯(lián)達(dá)生物有限公司的骨髓、臍帶血處理試劑盒。

1.2.2術(shù)前準(zhǔn)備 術(shù)前常規(guī)查血常規(guī)，肝腎功能，腹彩，胸片，腫瘤標(biāo)志物檢查。術(shù)前3 d給予粒細(xì)胞集落刺激因子進(jìn)行動員，劑量為150 μg，1次/d皮下注射，同時口服拜阿司匹林，當(dāng)白細(xì)胞升至20×109～30×109/L時開始采集骨髓。

1.2.3骨髓血采集與細(xì)胞分離 在無菌局麻下通過髂后骨穿多點(diǎn)抽取自體骨髓血200 ml(枸櫞酸鈉抗凝)，然后在實(shí)驗(yàn)室將骨髓血經(jīng)過去除紅細(xì)胞、離心、提取、清洗、過濾等步驟，獲得干細(xì)胞懸液，采用流式細(xì)胞儀檢測法，進(jìn)行記數(shù)，一般懸液中干細(xì)胞數(shù)可達(dá)到1×108/L～9×108/L。

1.2.4介入移植 在數(shù)字減影血管照影(DSA)下采用Seldinger穿刺技術(shù)行右側(cè)股動脈穿刺插管，將導(dǎo)管超選入小腦上動脈及大腦后動脈，造影，觀察血管情況，將干細(xì)胞懸液10 ml于0.5 h內(nèi)緩慢注入小腦上動脈及大腦后動脈，肝素生理鹽水沖管，拔管，股動脈無菌加壓包扎后回病房，右下肢制動6 h。

1.3療效評定 分別在移植前、移植后1、3個月對患者UPDRS Ⅱ與Ⅲ評分，移植前、移植后1個月分別查肝腎功能。同時觀察移植前后有無發(fā)熱、不適等不良反應(yīng)發(fā)生。進(jìn)行臨床評價(jià)。

2 結(jié) 果

2.1不良事件和副反應(yīng) 細(xì)胞移植26例患者中，于自體BMSCs移植后所有患者無發(fā)熱，3例有輕度胃腸道癥狀，均自行緩解。1個月復(fù)查肝功腎功無異常。

2.2移植前后治療效果的比較 與移植前比較，移植后1、3個月UPDRSⅡ評分及UPDRSⅢ評分均有顯著性下降(P<0.05),尤以治療后3個月為明顯。見表1。

表1 PD患者移植前后治療效果分)

3 討 論

本研究證實(shí)BMSCs治療PD是安全有效的方案。自體BMSCs移植治療PD的機(jī)制可能如下：(1)細(xì)胞替代作用,胚胎間充質(zhì)干細(xì)胞在體外可被誘導(dǎo)分化為nestin 陽性的神經(jīng)干細(xì)胞，移植入PD大鼠模型紋狀體可分化表達(dá)TH+神經(jīng)元，并能夠存活、向病灶側(cè)遷移，從而改善PD癥狀〔3～5〕。(2)神經(jīng)營養(yǎng)和保護(hù)作用，間充質(zhì)干細(xì)胞可分泌多種活性物質(zhì)，如腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、堿性成纖維因子可通過不同機(jī)制減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡，同時為神經(jīng)修復(fù)和功能重建提供微環(huán)境〔6,7〕。

目前，可選擇的BMSCs移植途徑有許多種，主要有靜脈、動脈、腦實(shí)質(zhì)、鞘內(nèi)等，靜脈移植方便，對患者無明顯損傷，但易出現(xiàn)靜脈栓塞可能。腦實(shí)質(zhì)內(nèi)移植一般通過立體定向方法，在頭CT下定位后，頭皮下鉆孔將干細(xì)胞送至腦組織局部，病灶區(qū)干細(xì)胞濃度高，易收到好的療效，但操作為侵入性，不易被接受。鞘內(nèi)移植，通過腰穿將干細(xì)胞移植到腦脊液內(nèi)，也較安全便捷。動脈移植或介入移植，是在股動脈穿刺，動脈導(dǎo)管在DSA下將導(dǎo)管超選入病灶局部，將干細(xì)胞送至病灶局部。此方法對病人幾乎無損傷，干細(xì)胞不通過靜脈途徑，直接在病灶周圍發(fā)揮作用，能使有限的干細(xì)胞發(fā)揮最大的療效，且?guī)缀鯚o栓塞的危險(xiǎn)，療效肯定。自體BMSCs移植取自自體骨髓，無免疫反應(yīng)及倫理道德等問題，只要在骨髓穿刺及干細(xì)胞提取時注意無菌操作，可將感染降到最低，本組患者無一例感染。自體BMSCs治療PD安全可靠，但移植途徑及移植數(shù)量如何選擇，目前尚無定論，遠(yuǎn)期療效如何仍需繼續(xù)觀察。

4 參考文獻(xiàn)

1Kim JH,Auerbach JM,Rodriguez-Gonez JA,etal.Dopamine neurons derived from embryonic stem cells function in an unimd model of Parkinson’s disease〔J〕.Nature,2002;418(6893):50-6.

2中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會運(yùn)動障礙及帕金森病學(xué)組.帕金森病的診斷〔J〕.中華神經(jīng)科雜志，2006;39(6)：408-9.

3Axeil MZ,Zlateva S,Curtis M.A method for rapid derivation and propagation of neural progenitors from human embryonic stem cells〔J〕.J Neurosci Methods,2009;184(2):275-84.

4Jin GZ,Cho SJ,Choi EG,etal.Rat mesenchymal stem cells increase tyrosine hydroxylase expression and dopamine content in wentral mesencephalic cells in vitro〔J〕.Cell Biol Int,2008;32(11)：1433-8.

5Li Y,Chen J,Wang L,etal.Intracerebral transpla ntation of bone marrow stromal cells in a 1-methyl-4-pheny-1,2,3,6-tetrahydropyrdine mouse model of Parkinson's disease〔J〕.Neurosci Lett,2001;316(2):67-70.

6Donaldson AE,Cai J,Yang M,etal. Human amniotic fluid stem cells do not differentiate into dopamine neurons in vitro or after transplantation in viov〔J〕.Stem Cells Dev,2009;18(7):1003-12.

7Mc Coy MK,Martinez TN,Ruhn KA,etal.Autologous transplants of adipose-derived adult stromal(ADAS) cells afford dopaminergic neuroprotection in a model of Parkinson's disease〔J〕.Exp Neurol,2008;210(1):14-29.