逍遙散對阿爾茨海默病模型小鼠學習記憶及神經(jīng)遞質(zhì)的影響

王虎平 邢喜平 張雯娟 吳紅彥

(甘肅中醫(yī)學院基礎醫(yī)學院 甘肅省中藥藥理與毒理學重點實驗室 甘肅省中藥新產(chǎn)品創(chuàng)新工程實驗室，甘肅 蘭州 730000)

現(xiàn)代醫(yī)學認為，阿爾茨海默病(AD)發(fā)病可能與基因突變、神經(jīng)遞質(zhì)改變、免疫功能紊亂、神經(jīng)生長因子缺失等諸多因素有關，相應的治療多為膽堿酯酶抑制劑、神經(jīng)營養(yǎng)因子、興奮性氨基酸等對癥給藥，不能從根本上解除患者的病苦。中醫(yī)學認為，AD總屬本虛標實，虛責之于年老體弱、精虧髓空、腦失所養(yǎng)；實責之于氣滯血瘀、痰濁內(nèi)阻、蒙蔽清竅，多以補益心腎，益髓填精，祛濁化痰，開竅醒神為治。本課題組認為，肝主疏泄而暢情志，又主藏血而養(yǎng)神魂，亦主筋而司運動，這恰恰與AD情志及行為的失常密切相關，因此，我們提出了從肝論治AD的科研假說并以調(diào)肝名方逍遙散開展相關干預實驗研究并取得了一定的進展〔1～4〕。本研究以逍遙散干預氫溴酸東莨菪堿致AD小鼠模型，探討逍遙散防治AD的作用及其機制。

1 材料與方法

1.1主要材料 Y型水迷宮由甘肅中醫(yī)學院基礎醫(yī)學實驗中心自制；逍遙散組成各生藥均購于甘肅中醫(yī)學院附屬醫(yī)院；氫溴酸東莨菪堿注射液由上海禾豐制藥有限公司提供，批號：100101；膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)試劑盒、乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒、單胺氧化酶(MAO)試劑盒及考馬斯亮藍蛋白測試盒均為南京建成生物化學試劑有限公司提供，批號：20100522。SPF級KM小鼠50只，體重(20±2)g，雌、雄各半，由甘肅中醫(yī)學院科研實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(甘)2004-0006-0000994。

1.2方法

1.2.1動物分組與給藥 SPF級KM小鼠50只，隨機分為空白組、模型組、逍遙散低、中、高劑量組，每組10只?？瞻捉M與模型組小鼠每天灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g，逍遙散低、中、高劑量組小鼠每天灌胃對應藥物水煎液0.2 ml/10 g。逍遙散方中各藥的劑量均按照2005版《中華人民共和國藥典》中逍遙丸〔5〕劑量換算得到，以藥典中逍遙散原方劑量作為本實驗中劑量，原方1/2劑量為低劑量，原方2倍劑量為高劑量。以人與小鼠體表面積體重比換算得到實驗劑量，即逍遙散低、中、高劑量組小鼠每天灌胃生藥量分別為1.243，2.485，4.970 g/kg。連續(xù)灌胃給藥10 d。

1.2.2模型復制 給藥第6、8、10天，除空白組小鼠于灌胃1 h后腹腔注射生理鹽水0.2 ml/10 g外，其余組小鼠分別于灌胃1 h后腹腔注射氫溴酸東莨菪堿0.02 mg/10 g復制AD模型。

1.2.3Y型水迷宮實驗 給藥第6、8天，各組小鼠分別于腹腔注射20 min后使用Y型水迷宮進行學習能力訓練；給藥第10天，各組小鼠分別于腹腔注射20 min后進行記憶能力測試。水迷宮實驗中，小鼠從入水臂直接游至安全臂停靠臺為正確，進入另一臂為錯誤。學習能力以達到連續(xù)9次正確所需的次數(shù)為指標，超過30次計為30，每次達到安全臺所需的時間為潛伏時間；記憶能力以15次中正確的次數(shù)為指標，并記錄每次的潛伏時間〔6〕。

1.2.4腦組織勻漿AchE、ChAT及MAO活性的測定 第10天記憶能力測試結(jié)束后，處死動物，迅速取出腦組織，以生理鹽水制成10%的腦組織勻漿，用低溫離心機3 000 r/min離心15 min，吸取上清液，按試劑盒要求測定小鼠腦組織勻漿ChAT、AchE及MAO活性。

1.3統(tǒng)計學分析 采用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1逍遙散對AD模型小鼠學習能力及學習潛伏時間的影響 與空白組相比，模型組小鼠學習能力低下、潛伏時間較長(P<0.01)。與模型組相比，逍遙散各劑量組均能提高小鼠學習能力、降低其潛伏時間(P<0.01或P<0.05)，但以高劑量組最為明顯，與低、中劑量組相比有顯著性差異(P<0.05)。見表1。

2.2逍遙散對AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時間的影響 與空白組相比，模型組小鼠記憶能力低下、潛伏時間較長(P<0.01)。與模型組相比，逍遙散各劑量組均能提高小鼠記憶能力、降低潛伏時間(P<0.01或P<0.05)，在數(shù)值上以高劑量組最明顯，但與低、中劑量組相比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表1 逍遙散對AD模型小鼠學習能力及學習潛伏時間的影響

2.3逍遙散對AD模型小鼠腦組織ChAT、AchE及MAO活性的影響 與空白組相比，模型組小鼠腦組織ChAT活性降低，AchE及MAO活性增高(P<0.01)。與模型組相比，逍遙散各劑量組均能提高小鼠腦組織ChAT活性、降低AchE及MAO活性(P<0.01或P<0.05)，但以高劑量組最為明顯，與低、中劑量組相比有顯著性差異(P<0.05)。見表3。

表2 逍遙散對AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時間的影響

表3 逍遙散對AD模型小鼠腦組織勻漿ChAT 、AchE及MAO活性的影響

3 討 論

經(jīng)云：“肝者，將軍之官，謀慮出焉” (《素問·靈蘭秘典論》)，“肝者，罷極之本，魂之居也” (《素問·六節(jié)藏象論》)，性喜調(diào)達主疏泄，藏血而主魂，體陰而用陽，為神魂之居，其華在筋，主司運動，為行為之主，這恰恰與AD的主要表現(xiàn)即精神與行為失常密切相關。據(jù)此，我們提出了AD從肝論治的假說并確立了以“調(diào)肝”為中心的治法開展相關實驗研究。

逍遙散以調(diào)肝為核心，以疏肝、養(yǎng)血、健脾為基礎。方中柴胡、薄荷辛散行走，疏肝理氣，調(diào)氣機，暢情志，啟清竅，醒腦神，悅神魂，怡精神；當歸、白芍陰柔滋補，益陰養(yǎng)血，補陰血，藏肝魂，柔肝體，舒筋脈，又可補肝體，助肝用，協(xié)柴、薄疏肝暢情，還可養(yǎng)血補精，填髓益智；白術、茯苓、煨姜、甘草直入中焦，投脾所好，去脾所惡，健運脾土，陪補后天之本，滋生氣血之源，既可補陰血，強肝體，又可健中土，抑肝木，還可泄?jié)岫?，解蒙蔽。全方雖由疏肝、養(yǎng)血、健脾配伍組成，但三組密切協(xié)作，互為促進，氣血同調(diào)，體用并治，補瀉兼施。如此，肝疏氣行則情暢神安，血充精足則筋柔神怡，邪去蔽解則腦醒神清，具有很好的防治AD的理論基礎。藥理研究表明，逍遙散具有抗自由基氧化、營養(yǎng)保護神經(jīng)元、調(diào)節(jié)免疫、提高多巴胺等神經(jīng)受體含量、抗焦慮及抗抑郁、雌激素樣等作用〔7～12〕，體現(xiàn)了現(xiàn)代醫(yī)學治療AD的多種手段，具有防治AD的藥理學基礎。本研究表明，逍遙散可提高AD模型小鼠學習記憶能力，降低潛伏時間，可提高腦組織勻漿ChAT活性，降低AchE及MAO活性，能較好改善AD模型小鼠學習記憶能力及神經(jīng)遞質(zhì)活性，對AD具有較好的防治作用。至于其深層機制有待進一步探討。

4 參考文獻

1王虎平，吳紅彥.逍遙散及其配伍組方對阿爾茨海默病小鼠學習記憶的影響〔J〕.中國老年學雜志，2013；33(18)：4459-61.

2吳紅彥，王虎平，王彩霞.黑逍遙散對老年性癡呆的防治作用及其機制研究〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2011;22(4)：912-3.

3吳紅彥，王虎平.以肝脾論治老年性癡呆及逍遙散對老年癡呆模型小鼠學習記憶能力、中樞膽堿能神經(jīng)元活性的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2010;16(5)：168-70.

4吳紅彥，王虎平.逍遙散及其拆方對癡呆模型小鼠學習記憶能力及抗氧化能力的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2009;15(10)：102-4.

5中華人民共和國藥典.第一部〔S〕.2005：564.

6陳 勤.抗衰老研究實驗方法學〔M〕.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1996:94.

7呂志平.“肝郁”大鼠的脂質(zhì)過氧化反應及逍遙散的保護作用〔J〕.山東中醫(yī)學院學報，1995;19(3)：199-201.

8徐志偉，敖海清，吳麗麗，等.逍遙散對慢性心理應激損傷大鼠海馬神經(jīng)元的影響〔J〕.中藥藥理與臨床，2005;21(1)：5-9.

9趙益業(yè).肝郁癥的免疫學探討〔J〕.山東中醫(yī)藥大報，1997;21(1)：28-32.

10吳春福，李逢利，劉 雯，等.逍遙散對大鼠腦中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響〔J〕.中藥藥理與臨床，1993；9(2)：8-10.

11王靜怡，石玉瑁，查鵬洲，等.逍遙散的藥理研究〔J〕.中國醫(yī)院藥學志，2002；22(8)：489-90.

12楊玉峰，楊 瑛.加味逍遙散對女性黃褐斑血清性激素水平的影響〔J〕.陜西中醫(yī)學院學報，2000；23(5)：41-2.