阿托伐他汀聯(lián)合纈沙坦協(xié)同治療對(duì)糖尿病心肌病大鼠心臟功能的影響

何煦芳 李 勇

(武警海南省邊防總隊(duì)醫(yī)院，海南 ?？?570208)

糖尿病(DM)是臨床常見的代謝性疾病，可在血糖水平持續(xù)升高的基礎(chǔ)上導(dǎo)致糖尿病心肌病(DC)，臨床主要表現(xiàn)為心肌舒張以及收縮功能障礙，晚期可出現(xiàn)心力衰竭〔1〕。目前認(rèn)為，高血糖所引起的血脂水平升高以及心肌重構(gòu)是DM患者發(fā)生心肌病變的重要環(huán)節(jié)，因此，在治療時(shí)應(yīng)同時(shí)兼顧降低血脂和延緩心肌重構(gòu)〔2〕。本實(shí)驗(yàn)采用阿托伐他汀聯(lián)合纈沙坦協(xié)同治療DC大鼠的方法，分析阿托伐他汀聯(lián)合纈沙坦協(xié)同治療對(duì)DC大鼠心臟功能的影響。

1 材料與方法

1.1材料 選擇雄性SD大鼠60只，200～250 g，8～10周齡，購買于大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心(合格證號(hào)：第211107號(hào))。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度22℃～24℃，濕度60%～70%，自然晝夜節(jié)律光照，自由獲得食物和飲水。主要試劑：鏈脲佐菌素(sigma公司,So132021G,015k1279) ；血糖試紙(美國(guó)雅培公司)；阿托伐他汀(輝瑞制藥有限公司)，纈沙坦(北京諾華制藥有限公司)，手術(shù)器械及常規(guī)耗材均由動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2方法

1.2.1分組方法 采用隨機(jī)數(shù)表法將SD大鼠分為正常對(duì)照組、DC對(duì)照組、阿托伐他汀干預(yù)組、纈沙坦干預(yù)組和聯(lián)合干預(yù)組，每組12只。DC對(duì)照組、阿托伐他汀干預(yù)組、纈沙坦干預(yù)組和聯(lián)合干預(yù)組按照模型建立方法進(jìn)行處理，并給予相應(yīng)的藥物干預(yù)；正常對(duì)照組按照常規(guī)方法飼養(yǎng)。

1.2.2模型建立方法 選取70只雄性SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，均為動(dòng)物狀態(tài)良好級(jí)。隨機(jī)抽取12只作為正常對(duì)照組。其余63只一次性腹腔注射鏈脲佐菌素60 mg·kg-1·d-1，誘導(dǎo)DM，3 d后檢測(cè)大鼠尿糖、血糖，尿糖陽性、血糖≥16.7 mmol/L作為DM模型。定期監(jiān)測(cè)體重、血糖，4 w后取4只DM大鼠心肌組織進(jìn)行電鏡檢查，檢測(cè)到肌絲斷裂、線粒體腫脹、大量糖原顆粒沉積、嵴斷裂，則證明DC大鼠模型建模成功。3個(gè)月后共成模48只，死亡大鼠10只。

1.2.3給藥方法 模型建立成功后，DC對(duì)照組給予常規(guī)飼養(yǎng)，阿托伐他汀干預(yù)組給予阿托伐他汀50 mg·kg-1·d-1灌胃，纈沙坦干預(yù)組給予纈沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃，聯(lián)合干預(yù)組給予阿托伐他汀50 mg·kg-1·d-1、纈沙坦10 mg·kg-1·d-1灌胃。連續(xù)干預(yù)8 w。

1.3觀察指標(biāo)

1.3.1血脂代謝指標(biāo) 藥物處理完成后，處死老鼠，斷頭取血，靜置1 h后離心10 min，取血清檢測(cè)血脂代謝情況，包括三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、載脂蛋白(ApoA)-Ⅰ、ApoB。

1.3.2心功能指標(biāo) 藥物處理完成后，10%戊巴比妥腹腔麻醉后，做氣管切開、氣管插管，連接動(dòng)物呼吸機(jī)進(jìn)行輔助呼吸，打開胸腔將心導(dǎo)管插入左心室，連接生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)信號(hào)采集處理系統(tǒng)檢測(cè)左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末期壓力(LVDEP)、左心室內(nèi)壓力最大上升速率(+dp/dtmax)、左心室內(nèi)壓力最大下降速率(-dp/dtmax)。

1.3.3基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)蛋白含量及活性變化 采用鏈霉合素-生物素復(fù)合物(SABC)免疫組化法檢測(cè)DC大鼠心肌組織中MMP-2表達(dá)：取心肌組織制成冰凍切片，經(jīng)滅活、沖洗、加MMP-2與生物素化兔抗羊IgG漂洗、加入SABC試劑，使用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒，于Olympus BX50光學(xué)顯微鏡觀察，采用IBAS2.5圖像系統(tǒng)作半定量分析；采用明膠酶譜法檢測(cè)DC病大鼠心肌MMP-2蛋白活性：取心肌組織25 mg，沖洗后剪碎，加入蛋白質(zhì)勻漿緩沖液2 ml，離心取上清液電泳進(jìn)行圖像分析，采用光密度值(OD)計(jì)算MMP-2活性，取3次平均值。

2 結(jié) 果

2.1五組實(shí)驗(yàn)大鼠血脂水平比較 DM對(duì)照組的HDL、ApoA-Ⅰ水平低于正常對(duì)照組，TG、TC、LDL、ApoB水平高于正常對(duì)照組(均P<0.05)；阿托伐他汀干預(yù)組、纈沙坦干預(yù)組和聯(lián)合干預(yù)組的HDL、ApoA-Ⅰ水平高于DC對(duì)照組，TG、TC、LDL、ApoB水平低于DC對(duì)照組(均P<0.05)；聯(lián)合干預(yù)組的HDL、ApoA-Ⅰ水平高于阿托伐他汀干預(yù)組和纈沙坦干預(yù)組，TG、TC、LDL、ApoB水平低于阿托伐他汀干預(yù)組和纈沙坦干預(yù)組(P<0.05)。見表1。

2.2五組實(shí)驗(yàn)大鼠心功能指標(biāo)比較 DC對(duì)照組LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax低于正常對(duì)照組，LVDEP高于正常對(duì)照組(P<0.05)；阿托伐他汀干預(yù)組、纈沙坦干預(yù)組和聯(lián)合干預(yù)組LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax高于DC對(duì)照組，LVDEP低于DC對(duì)照組(P<0.05)；聯(lián)合干預(yù)組LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax高于阿托伐他汀干預(yù)組和纈沙坦干預(yù)組，LVDEP低于阿托伐他汀干預(yù)組和纈沙坦干預(yù)組(P<0.05)。見表2。

2.3MMP-2蛋白表達(dá) MMP-2蛋白主要表達(dá)在心肌細(xì)胞、細(xì)胞間質(zhì)、少量血管內(nèi)皮細(xì)胞中，正常對(duì)照組顯示心肌細(xì)胞為斜行縱向排列，染色部位與胞質(zhì)中可見棕黃色陽性顆粒；DC組可見較多MMP-2蛋白陽性表達(dá)，阿托伐他汀聯(lián)合纈沙坦治療組MMP-2表達(dá)明顯較高。見圖1。

2.4五組實(shí)驗(yàn)大鼠MMP-2蛋白活性比較 與正常對(duì)照組(0.153±0.02)比較，DC對(duì)照組MMP-2活性明顯增強(qiáng)；與DC對(duì)照組比較，三個(gè)治療組MMP-2活性明顯減弱(阿托伐他汀干預(yù)組：0.198±0.001，纈沙坦干預(yù)組：0.182±0.03，聯(lián)合干預(yù)組：0.174±0.01)；三個(gè)治療組比較，阿托伐他汀聯(lián)合纈沙坦組MMP-2活性明顯減弱(P<0.05)。

表1 五組實(shí)驗(yàn)大鼠的血脂水平比較±s)

表2 五組實(shí)驗(yàn)大鼠心功能指標(biāo)比較±s)

圖1 各組MMP-2蛋白表達(dá)(×200)

3 討 論

2型糖尿病是臨床上最為常見的慢性代謝性疾病，會(huì)引起各類血管性并發(fā)癥的發(fā)生。DM血管相關(guān)并發(fā)癥的發(fā)生機(jī)制極為復(fù)雜，包括物質(zhì)代謝紊亂、內(nèi)皮功能受損、粥樣斑塊形成、局部炎癥反應(yīng)等均參與其中〔3〕。其中，血糖水平持續(xù)升高所引起的脂質(zhì)代謝紊亂是最被認(rèn)可的理論之一，同時(shí)也可較好地解釋其余機(jī)制。DM患者多合并不同程度的脂質(zhì)代謝紊亂，高脂血癥的存在可導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積、內(nèi)皮功能受損，若無法得到及時(shí)的干預(yù)措施，會(huì)逐步發(fā)展為動(dòng)脈粥樣硬化，并引起心臟、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)等靶器官功能的損害〔4〕。

在臨床治療的實(shí)踐中，DM引起的心血管系統(tǒng)疾病十分常見，一方面，血液內(nèi)的高糖狀態(tài)可直接損害心肌細(xì)胞，并誘發(fā)心肌發(fā)生重構(gòu)，影響心臟的舒縮功能；另一方面，由高糖所引起的血脂水平升高可導(dǎo)致冠脈內(nèi)脂質(zhì)沉積、管腔狹窄，進(jìn)而引起心肌缺血性損害〔5〕。若無法采取有效的治療措施，心肌重構(gòu)和心肌缺血會(huì)逐步加重，并引起嚴(yán)重并發(fā)癥的發(fā)生。針對(duì)DC病變的特點(diǎn)，在處理該病時(shí)應(yīng)兼顧血脂水平升高和心肌重構(gòu)，同時(shí)降低血脂水平、延緩心肌重構(gòu)，預(yù)期能取得積極的臨床價(jià)值〔6〕。

纈沙坦是一類血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ACEI)，通過阻斷血管緊張素Ⅱ與其受體(血管緊張素Ⅱ受體Ⅰ)結(jié)合來抑制其血管收縮、促進(jìn)醛固酮釋放的作用，進(jìn)而降低外周阻力、減少水鈉潴留、改善心臟微循環(huán)、延緩心肌重構(gòu)〔7，8〕。阿托伐他汀屬于羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，通過抑制HMG-CoA還原酶的活性來阻斷內(nèi)源性的膽固醇合成，并改善血脂代謝情況〔9〕。

TG、TC水平可以反映整體的脂質(zhì)代謝情況；ApoB是LDL的主要成分，在體內(nèi)促進(jìn)脂質(zhì)在動(dòng)脈內(nèi)膜的沉積過程，屬于心肌病變發(fā)生的危險(xiǎn)因素；ApoA-Ⅰ是HDL的主要成分，在體內(nèi)促進(jìn)脂質(zhì)代謝過程，屬于心肌病變發(fā)生的保護(hù)因素〔10〕。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，阿托伐他汀聯(lián)合纈沙坦能夠更為有效地改善血脂代謝情況。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在建立DC模型后，大鼠的心功能發(fā)生了明顯的損傷，心室收縮能力減弱、舒張末期殘余血量增多。通過單獨(dú)或聯(lián)合給予阿托伐他汀、纈沙坦，可以明顯改善大鼠的心臟功能。這就可以反映出阿托伐他汀聯(lián)合纈沙坦能更為有效

地改善心臟功能，符麗娟等〔11〕報(bào)道坎地沙坦可顯著改善心肌線粒體超微結(jié)構(gòu)，達(dá)到保護(hù)糖尿病心肌結(jié)構(gòu)的目的。心肌重構(gòu)是DM心臟病誘發(fā)心力衰竭的重要誘因，MMP能降解細(xì)胞外基質(zhì)成分，MMP-2可降解明膠層連蛋白、纖維黏連蛋白，也可啟動(dòng)纖維膠原裂解過程〔12〕。本研究提示MMP-2表達(dá)可能與DC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，給予阿托伐他汀、纈沙坦單獨(dú)或聯(lián)合治療后，MMP-2表達(dá)及活性均明顯降低，提示這兩種藥物均可抑制MMP-2的表達(dá)與活性，保護(hù)心臟功能不受破壞。

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