胃癌組織中高爾基體磷酸化蛋白的表達及臨床意義

謝若騰 黃榮富 莊雪瑜

(福建醫科大學附屬第二醫院檢驗科，福建 泉州 362000)

高爾基體磷酸化蛋白3(GOLPH3)是一種位于高爾基體反面的基質蛋白，其主要功能是參與細胞內蛋白質的轉運與分選，并且可以通過對雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信號通路的調控，影響多種實體腫瘤細胞的生長和分化〔1〕。雖然其具體機制尚不明確，但已有證據證明GOLPH3在細胞癌變中的囊泡轉運和糖基化中起重要作用〔2〕。因此mTOR這一信號通路的調節可以通過組織中GOLPH3的水平來反映，檢測GOLPH3在組織的表達水平可以預測腫瘤的預后。已有研究表明，GOLPH3在腎癌、乳腺癌、卵巢癌、食管癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中都有過表達〔3～9〕，且與其預后相關，但迄今為止，尚未有報道GOLPH3在人胃癌組織中的表達及臨床意義。本研究擬探討人胃癌組織中GOLPH3的表達及臨床意義。

1 材料與方法

1.1標本來源 收集2009年5月至2012年7月在我院接受手術切除、并經病理證實為胃癌的組織標本，所有病例均未行術前化療或放療。入組病例共40例，年齡33～67歲，中位年齡56歲。癌旁組織定義為距離腫瘤組織超過2 cm以上的胃黏膜組織。取所有胃癌患者的癌組織和相應的癌旁組織，立即加入少許液氮，然后移至經DEPC水處理過的EP管，放入-20℃冰箱保存，供提取RNA備用。

1.2材料試劑 miRcute miRNA提取分離試劑盒、第一鏈合成試劑盒、熒光定量檢測試劑盒及GOLPH3、miRNA檢測引物等均由天根公司提供，7500Real-PCR儀購自Applied Biosystems公司，DU800型分光光度計購自Beckman公司。

1.3方法

1.3.1總RNA 的提取及逆轉錄 組織標本在液氮中研磨后，首先按Trizol試劑說明書抽提總RNA，cDNA的獲取用逆轉錄試劑盒。

1.3.2Real-time PCR檢測胃癌及癌旁組織中GOLPH3的表達 提取總RNA，參照AMV逆轉錄試劑盒說明進行逆轉錄，在20 μl體系中加2 μg總RNA進行cDNA的合成。Real-time PCR采用2×SYBR Green PCR Master Mix，引物濃度0.4 nmol/L，取適量cDNA作為模板，15 μl體系進行擴增。每個待測樣本設置3個平行樣。合成用于特異擴增GOLPH3的前后引物，以GAPDH作為內參，PCR反應在實時定量PCR反應儀上進行。

1.4統計學方法 應用SPSS16.0軟件，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1GOLPH3在胃癌及癌旁組織中的表達 40例胃癌標本中有34例GOLPH3相對于癌旁組織表達升高，6例相對于癌旁組織表達降低。胃癌組織中GOLPH3 mRNA表達總體水平(7.634±1.476)明顯高于相應的癌旁組織(1.113±0.458)(P<0.001)。

2.2GOLPH3表達水平與胃癌臨床病理特征關系 GOLPH3的表達水平與腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和TNM分期相關(均P<0.05)。見表1。

表1 GOLPH3表達水平與胃癌臨床病理特征的關系(n)

3 討 論

近10余年來，腫瘤的影像診斷、放化療及手術技能等取得了很大的進步。盡管如此，腫瘤患者的預后及生活質量卻未有太多的改善。傳統的治療方案效果不甚理想，人們開始把研究重點轉移到腫瘤細胞分子方面，致力于開發腫瘤靶向藥物或者腫瘤疫苗。已有研究證明GOLPH3在多種腫瘤組織高表達，說明GOLPH3的高表達參與了腫瘤的發生和發展，GOLPH3有望成為腫瘤治療的一個新靶點。

GOLPH3是定位于高爾基體上的一個新的致癌基因，它與多種惡性腫瘤的發生發展、增殖、分化及凋亡有關。與其他癌基因不同的是它同時還參與調節癌細胞對抗腫瘤藥物的敏感性。《自然》雜志上2009年6月發表了一篇關于GOLPH3在癌癥中信號通路的研究進展，該研究在整個基因組范圍內對多種實體腫瘤進行篩選，發現GOLPH3可能是一個新的致癌基因〔10〕。該研究采用基因敲除的方法，并且通過外源性增強基因的表達進行體內、外實驗發現GOLPH3能與TOR信號通路上的靶位相互作用，促進正常細胞的異常生長和增殖；同時GOLPH3參與調控mTOR的信號通路，從而調節腫瘤細胞對雷帕霉素的敏感性。因此GOLPH3被推測有可能作為抗腫瘤藥物的有效靶點。GOLPH3參與細胞癌變的機制可能是通過調控mTOR的信號通路，影響受體循環和糖基化作用位點及蛋白質轉運等，從而影響細胞的正常生理代謝如生長、增值及凋亡，最終導致癌細胞的產生〔11,12〕。本研究發現GOLPH3在胃癌組織呈高表達，且與腫瘤的惡性程度有關，表明GOLPH3可能在胃癌的發生發展起重要作用，而且與胃癌的預后有關。

本研究尚有一些不足之處：(1)本研究為單中心、回顧性研究，病例數相對較少；(2)雖然收集胃癌組織和相應的癌旁組織，但并未包含正常健康個體的胃組織作進一步對照；(3)病例數較少，未作相應的預后生存分析。另外，本實驗未能進一步從蛋白水平分析GOLPH3的表達差異，后續的研究將會完善補充這一點。

4 參考文獻

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