射頻消融對原發性肝癌患者外周血T細胞亞群及NK細胞變化的影響

楊 闖 張永川 李華國 古廣強 萬 祎 劉文平 楊濟明

(綿陽市第三人民醫院肝膽外科，四川 綿陽 621000)

徹底清除病灶，減少癌癥復發率是臨床提高原發性肝癌生存率的關鍵〔1〕。射頻消融(RFA)作為近年來治療原發性肝癌的一項新手段，可以有效消滅影像學上可見的肝內病變，具有療效肯定、組織損傷小、術后并發癥少以及操作簡單等優點，被認為是目前臨床上非手術方法治療肝癌最具潛力的手段之一，臨床應用日益廣泛〔2〕。本研究回顧性分析接受RFA治療的原發性肝癌患者的臨床資料，觀察其治療前后外周血T細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CTL)及自然殺傷(NK)細胞水平的變化。

1 資料和方法

1.1臨床資料 抽選2010年4月至2013年5月在我院和重慶醫科大學附屬第一醫院行RFA治療的45例原發性肝癌患者，診斷均符合2001年全國肝癌學術會議通過的關于原發性肝癌的診斷以及臨床分期標準〔3〕，經影像學檢查、甲胎蛋白(AFP)或者是肝組織活檢進行確診。其中乙肝病毒表面抗原(HBsAg)陽性43例，陰性2例；合并有肝硬化44例；癌癥病灶共49個，直徑2.0～5.0 cm，肝功能child分級：A級40例、B級5例。隨機抽選31例健康體檢者為對照組；其中男20例，女11例，年齡61～85〔平均(71.38±8.16)〕歲。RFA組：男25例，女20例，年齡25～62〔平均(50.15±8.22)〕歲。兩組性別、年齡比較差異無顯著性(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1RFA治療方法 根據患者病變部位分別采取仰臥位或者是俯臥位，在B超引導下向癌癥病灶內插入針形電極，根據病灶大小將內針張開至合適直徑。采用上海邁德S-1500射頻治療儀及配套消融射頻針，將開始輸出功率設置為50 W，第3 min后增加10 W/min，直至90 W最大功率停止，對主病灶及形狀不規則的子病灶予以多靶區減瘤治療，形狀規則的子病灶予以單靶區治療，射頻范圍超過癌癥病灶延伸至正常組織約1.0 cm。術后采用CT檢查是否存在病灶殘余，如有則需在2～3 w內重復RFA治療。

1.2.2檢測方法 T細胞亞群以及NK細胞采用流式細胞術(FCM)全血免疫熒光法進行檢測，流式細胞計數儀選擇采用美國貝克曼公司XL/XL-MCL型，鼠抗人CD3+、CD4+、CD8+、細胞毒性淋巴細胞(CTL)及NK細胞均由美國Beckman-Coulter公司提供，RFA組患者在治療前以及治療1～2 w后抽外周血2 ml進行檢測，監控對照組采1次外周血進行同樣檢測。

2 結 果

2.1RFA治療效果 45例原發性肝癌患者全部完成RFA治療，共57次。隨訪3～10個月，平均(5.45±1.02)個月，其中30例(66.67%)無瘤生存，15例(33.33%)術后3個相繼出現肝內新發病灶，12例進行2次RFA治療。治療過程中患者均伴有明顯出汗、肝區腹痛感，但均可耐受。其中4例出現嘔吐，10例患者體溫升高(>38.50℃)，對癥治療后均恢復。治療后患者肝區疼痛、腹脹、食欲、精神等自覺癥狀明顯改善。

2.2治療前對照組與治療組T細胞亞群及NK細胞水平比較 治療前RFA組患者CD3+、CD4+、CTL、NK、CD4+/CD8+比值均顯著低于健康對照組，CD8+T細胞水平高于對照組(P<0.01)，見表1。

2.3FRA組治療前后T細胞亞群及NK細胞變化比較 治療1、2 w后，CD3+、CD4+、CTL、NK細胞水平、CD4+/CD8+比值明顯高于治療前，CD8+T細胞水平明顯低于治療前(P<0.05)；治療2 w患者CD3+、CD4+、CD8+、CTL、NK細胞水平、CD4+/CD8+比值與治療1 w時比較均無顯著變化(P>0.05)。見表2。

表1 RFA組與對照組治療前T細胞亞群及NK細胞變化比較±s)

表2 RFA組治療前后T細胞亞群及NK細胞變化比較±s,n=45)

3 討 論

機體抗腫瘤免疫反應主要以細胞免疫為主，T細胞亞群以及NK細胞在腫瘤免疫監視中起著中心調控的作用，是重要的抗腫瘤免疫應答細胞。 有研究發現〔4〕，患者AFP與CD4+/CD8+比值、CD4+以及NK細胞呈負相關性，與CD8+呈正相關；肝癌患者外周血CD8+T細胞百分率升高，而CTL細胞百分率下降。機體免疫尤其細胞免疫的下降是原發性肝癌發生、轉移或者是復發的重要原因〔5〕。

T淋巴細胞中以CD4+數量最多，主要分泌白介素(IL)-2和γ-干擾素(INF-γ)，并與NK細胞有著密切的協同功能，具有重要的腫瘤防御作用。CD8+T細胞的作用和CD4+細胞作用相反，對CD4+細胞和NK等殺傷細胞具有顯著的抑制作用，并降低IL-2和INF-γ〔6〕。T細胞亞群中CD4+、CD8+細胞在機體正常情況下處于相對穩定的平衡狀態，機體免疫功能得以維持。而癌癥病人這一比例失去失衡，因此CD4+/CD8+比值發生改變〔7〕。本研究結果提示，原發性肝癌患者治療前存在明顯的細胞免疫功能抑制，大大削弱了機體抗腫瘤能力。

近年來，RFA治療肝癌已得到了臨床的廣泛認可，成為繼手術切除治療或者是介入治療后的第三大新型肝癌治療方法，特別是小肝癌治療，被認為是其有效的根治性治療手段之一〔8〕。RFA治療原發性肝癌是通過向癌癥病灶內置入高頻電磁場電極，電磁波振蕩導致離子碰撞產生熱效應，并且向周圍組織傳導，溫度可高達80℃～100℃，使組織迅速凝固壞死〔9〕。RFA對癌癥病人免疫激活的作用機制可考慮如下：(1)腫瘤細胞被RFA殺死后，組織凝固壞死，使腫瘤細胞的負荷明顯減少，大大降低了免疫抑制因子的產生，最終改善免疫功能〔10〕；(2)腫瘤細胞壞死后產生的分解產物可刺激機體，抗腫瘤的免疫應答產生〔9〕；(3)腫瘤細胞RFA加熱后能合成對機體的免疫系統有刺激作用的熱休克蛋白(HSP)，提高機體免疫〔11〕。本研究表明RFA治療后顯著改善了機體細胞免疫功能，提高了機體抗腫瘤免疫力。

綜上，RFA治療可以通過調節原發性肝癌患者的T細胞亞群水平，升高NK細胞而改善患者的免疫抑制狀態。

4 參考文獻

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