p63蛋白和p73蛋白在滋養(yǎng)細(xì)胞疾病中的表達(dá)及其臨床意義

陳燕

(長江大學(xué)荊州臨床醫(yī)學(xué)院 荊州市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 荊州 434020)

滋養(yǎng)細(xì)胞疾病是一組來源于胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞的疾病 ，其發(fā)病原因尚不完全清楚，除與染色體異常有關(guān)外，原癌基因也參與了疾病的進(jìn)展。據(jù)報(bào)道突變型的p53在正常絨毛組織、葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、絨毛膜癌中的表達(dá)隨惡性程度的增高陽性表達(dá)率增高，染色增強(qiáng) ，且p53在侵蝕性葡萄胎、絨毛膜癌中的表達(dá)差異具有顯著性[1]。無轉(zhuǎn)移和低度轉(zhuǎn)移的滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的治愈率幾乎為100%[2]，耐藥和復(fù)發(fā)是其治療中面臨的主要問題，目前還沒有較好的判斷其預(yù)后的指標(biāo)。

人p63和p73基因作為p53家族的新成員分別于1998年和1997年被發(fā)現(xiàn)。p63和p73有2種異構(gòu)體：全長表達(dá)的TA異構(gòu)體和截短的ΔN異構(gòu)體：TA異構(gòu)體具有反式激活區(qū)，可與經(jīng)典p53 DNA結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合并激活p53相關(guān)靶基因誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯和凋亡,而被認(rèn)為是抑癌基因。截短的ΔN異構(gòu)體不具有轉(zhuǎn)錄激活活性，可以抑制全長表達(dá)的異構(gòu)體和p53依賴的靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞的生長，被認(rèn)為是致癌基因[3-4]。50%以上的腫瘤與p53突變失活有關(guān)[5]。p63和p73的羧基端均含有一個(gè)不育基序，可能在細(xì)胞的發(fā)育和分化中起重要作用[3]。有人推測，p53對生長發(fā)育的作用，很可能是通過與p63、p73的相互作用來實(shí)現(xiàn)的。不同于p53的是：p63和p73在組織中很少發(fā)生突變，p63和p73基因編碼的產(chǎn)物，具有明顯的組織特異性[3]，三者位于不同的染色體上。

1 對象與方法

1.1 對象

收集同濟(jì)醫(yī)院2000年至2007年間所有患滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤并行手術(shù)患者的病理標(biāo)本共25例，以12例正常早孕期胎盤組織為對照，用免疫組化SP法，檢測 p63和p73在GTD中的表達(dá)情況。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

p63(4A4+63p02)單克隆鼠抗由Labvision公司提供，P73單克隆鼠抗由 ABCAM公司提供，SP試劑盒及DAB顯色盒采購于中杉金橋公司，蘇木素采購于 sigma公司。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

p63 和p73均為核表達(dá)，陽性染色為細(xì)胞核含黃色均勻顆粒。選染色均勻區(qū)，在400倍視野下計(jì)數(shù)著色細(xì)胞染色程度及陽性細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的百分?jǐn)?shù)，共計(jì)數(shù)5個(gè)視野，取平均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS12.0處理，各組間樣本率差異的比較采用χ2檢驗(yàn)、四格表精確概率法。p63、p73蛋白表達(dá)相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)分析,α= 0. 05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 P63蛋白在細(xì)胞滋養(yǎng)疾病(GTD)表達(dá)情況

圖1 正常胎盤組織可見細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和合體滋養(yǎng)細(xì)胞p63表達(dá)中度陽性 圖2 少數(shù)胎盤組織p63表達(dá)陰性 圖3 在葡萄胎的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中可見p63表達(dá)高度陽性，而在其合體滋養(yǎng)細(xì)胞中均未見表達(dá)

本實(shí)驗(yàn)中p63蛋白在早孕胚胎組、完全性葡萄胎組、侵蝕性葡萄胎組、絨毛膜癌原發(fā)灶組、絨毛膜癌原轉(zhuǎn)移灶組中的陽性表達(dá)率分別為66.7%、100.0%、100.0%、0.0%、100.0%(見表1)。

表1 p63、p73在滋養(yǎng)細(xì)胞疾病中的表達(dá)情況

在侵蝕性葡萄胎中，p63在細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)中度陽性，在少數(shù)合體滋養(yǎng)細(xì)胞中呈弱陽性表達(dá)。p63在絨癌原發(fā)灶中無表達(dá)，在絨癌轉(zhuǎn)移灶的合體滋養(yǎng)細(xì)胞中呈中度陽表達(dá)(見圖4-6)。

圖4 在侵蝕性葡萄胎中，p63在細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中表達(dá)中度陽性，在少數(shù)合體滋養(yǎng)細(xì)胞中呈弱陽性表達(dá) 圖5 p63在絨癌原發(fā)灶中無表達(dá) 圖6 在轉(zhuǎn)移性小腸絨癌中，可見較多合體滋養(yǎng)細(xì)胞p63表達(dá)中度陽性

2.2 p73蛋白在細(xì)胞滋養(yǎng)疾病(GTD)表達(dá)情況

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)p73除在2例正常的胚胎組織和1例葡萄胎中表達(dá)陽性外，余組織均未見表達(dá)(見圖7(a)～(d))，其在正常早孕胚胎組、完全性葡萄胎組、侵蝕性葡萄胎組、絨毛膜癌組中陽性表達(dá)率為16.7%、12.5%、0.0%、0.0%(見表1)。

圖7 p73在正常胎盤組織、完全性葡萄胎、侵蝕性葡萄胎和絨毛膜癌中均無表達(dá)

3 討論

3.1 p63蛋白在細(xì)胞滋養(yǎng)疾病(GTD)表達(dá)研究及臨床意義

在轉(zhuǎn)錄后水平，截短的p63ΔN異構(gòu)體常在能表達(dá)p63家族成員的ΔN異構(gòu)體的組織中檢測到 ，而全長表達(dá)的p63TA異構(gòu)體往往瞬間表達(dá)并很快降解，提示ΔN異構(gòu)體蛋白比TA異構(gòu)體具有更高的穩(wěn)定性[6]。本實(shí)驗(yàn)所用的p63、p73均為鼠單克隆通用性抗體，故推測本實(shí)驗(yàn)檢測到的為ΔNp63異構(gòu)體。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)p63在細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中的陽性表達(dá)率隨腫瘤惡性程度增高而降低，由于免疫組化的方法檢測到的p63為具有致癌作用的ΔNp63異構(gòu)體，不能解釋其在GTD的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中隨腫瘤組織惡性程度增高而降低的情況，提示p63 在滋養(yǎng)細(xì)胞疾病中的表達(dá)與細(xì)胞的分化密切相關(guān)，而可能并沒有參與滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的發(fā)生進(jìn)展。

3.2 p73在GTD中的表達(dá)研究及臨床意義

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)p73在良性病變中低表達(dá)，而在惡性腫瘤表達(dá)陰性，提示滋養(yǎng)細(xì)胞疾病的發(fā)生發(fā)展可能與p73表達(dá)無關(guān)或與p73基因發(fā)生突變、滅活、功能受抑有關(guān)。

3.3 細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和合體滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)趨勢明顯不同

惡性滋養(yǎng)細(xì)胞由妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生而來，它由合體滋養(yǎng)細(xì)胞(ST)、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞(CT)和中間層滋養(yǎng)細(xì)胞(IT)三種類型組成，CT是絨毛上具有生發(fā)功能的滋養(yǎng)細(xì)胞，在絨毛表面，CT直接融合成ST,并失去增殖能力，ST漸凋亡，其細(xì)胞核被排到絨毛外間隙中 ，各種維持妊娠的激素(如HCG,SP-1，HPL)由ST產(chǎn)生[6]。早期絨毛與足月胎盤兩種細(xì)胞比例不同，前者以細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞為主，后者以合體滋養(yǎng)細(xì)胞為主，正常絨毛在妊娠3月以后，滋養(yǎng)細(xì)胞僅剩合體滋養(yǎng)細(xì)胞，而在葡萄胎、侵蝕性葡萄胎和絨毛膜癌中2種細(xì)胞均持續(xù)存在 ，惡性滋養(yǎng)細(xì)胞以合體滋養(yǎng)細(xì)胞為主者多見。北京協(xié)和醫(yī)院1034例惡性滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤中僅3例以細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞為主，此類患者對化療欠敏感，易有先天耐藥細(xì)胞 ，以合體滋養(yǎng)細(xì)胞為主者血HCG高而對化療敏感，但對化療耐藥者療效極差[7]。Ramalho LN等的研究指出絨癌的p63均陰性；水腫性流產(chǎn)、葡萄胎的p63陽性細(xì)胞分布沒有差異[8]。Shih IM等的研究指出根據(jù)免疫組化和RT-PCR，似乎細(xì)胞滋養(yǎng)層表達(dá)ΔNp63異構(gòu)體[3]。

本實(shí)驗(yàn)提示p63在細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和合體滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)趨勢明顯不同。P63可能與合體滋養(yǎng)細(xì)胞惡變有關(guān)，原發(fā)于合體滋養(yǎng)細(xì)胞的滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤可能惡性程度更高。p63在細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞中的明顯表達(dá)差異提示p63蛋白可能作為一種早期預(yù)測滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤預(yù)后進(jìn)展的新指標(biāo)。

3.4 p73與p63在GTD中表達(dá)的相關(guān)性分析

p63在人體組織中呈廣泛而有選擇性分布，在各種上皮組織的發(fā)育、分化和形態(tài)發(fā)生及胚胎形成過程中外胚層的發(fā)育具有重要的意義。p73在人體正常組織中低表達(dá)，在各種上皮組織呈高表達(dá)。P63和p73由于位于不同的染色體上，具有不同的啟動(dòng)子及轉(zhuǎn)錄途徑，故其在GTD中的表達(dá)可無明顯的相關(guān)性。

3.5 化療實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響

本實(shí)驗(yàn)中獲得的侵蝕性葡萄胎和絨毛膜癌均為化療后手術(shù)標(biāo)本，目前還沒有關(guān)于化療對GTD中p63和p73表達(dá)影響的研究，故本實(shí)驗(yàn)得出的結(jié)論不能排除化療的影響。

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