HSD17B1和HSD17B2基因多態性與四川漢族人群肝癌的關聯性研究

劉 博，馬 偉，陳 博，甘 莉，劉冬梅，陳柯宇，張錄順

HSD17B1和HSD17B2基因多態性與四川漢族人群肝癌的關聯性研究

劉 博1，馬 偉1，陳 博2，甘 莉3，劉冬梅3，陳柯宇4，張錄順5

目的探討性激素17β-羥甾類固醇脫氫酶(HSD17B1和HSD17B2)基因單核苷酸多態性與四川地區漢族人群肝癌之間的關系，為肝癌的預防、篩查、治療及預后提供理論依據。方法以136例漢族肝癌患者，200例漢族健康人群為對象，選取HSD17B1rs676387、HSD17B2rs8191246兩個位點作為遺傳標志，采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態技術檢測HSD17B1和HSD17B2基因多態性及其分布頻率。結果與健康人群相比HSD17B1rs676387的T等位基因顯著增加肝癌患病風險(P<0.05)。結論HSD17B1rs676387與四川漢族HCC的發生發展具有相關性，該研究結果有待在多民族、多中心、大樣本研究中進一步證實。

HSD17B1；HSD17B2；肝癌；單核苷酸多態性

17β-羥甾類固醇脫氫酶(17-beta dehydrogenase 1,HSD17B)屬于雌激素代謝酶，它參與調節組織中雄激素和雌激素水平。HSD17B1是NADPH依賴的還原酶，可將雌酮(E1)轉化成活性更強的17B-雌二醇(E2)。HSD17B1基因位于染色體17q12，其基因多態位點rs676387(G/T)與雌激素相關疾病，如乳腺癌、前列腺癌以及子宮肌瘤的相關[1-3]。HSD17B2是NADPH依賴的氧化酶，它能催化高活性的17B-羥類固醇與低活性酮類固醇之間的轉換。HSD17B2基因位于16號染色體長臂的24號1區位點的編碼區，存在一個同義突變位點rs8191246(A/G,Ter388Trp)。目前有研究發現HSD17B2rs8191246與子宮肌瘤和精子缺乏癥有關[3-4]。

基于前人的研究基礎，推測HSD17B1和HSD17B2基因多態性可能與肝癌發生發展有關，但迄今為止，尚未查見相關研究報道。因此，本研究擬采用PCR-RFLP技術進行基因分型，計算基因型頻率和等位基因頻率，探討HSD17B1rs676387和HSD17B2rs8191246基因座多態性與四川漢族人群肝癌發生發展的相關性，為肝癌的篩查和治療提供理論依據。

1 資料和方法

1.1資料收集2008 年10月～2010年10月在四川大學華西醫學院就診的肝癌患者136例(男112例，女24例，平均年齡50歲)，所有病例均經病理學證實。收集病人性別、年齡、家庭肝癌史、乙肝表面抗原的狀態等臨床指標。同期收集對照組200例(四川漢族，男166例，女34例，平均年齡50.3歲)，來自于四川大學華西醫院體檢中心健康人群。對照組人群排除具有個人或家族癌癥史或其他嚴重的疾病史，排除肝炎病毒感染史。本研究經四川大學倫理委員會批準，受試對象均簽署知情同意書。

1.2DNA提取、擴增及分型常規采集5 mL外周靜脈血，經EDTA抗凝，使用全血基因組DNA快速提取試劑盒提取DNA。PCR擴增引物序列及擴增條件參照文獻[3](詳見表1)，總擴增產物經限制性內切酶酶切、聚丙酰胺凝膠電泳、硝酸銀銀染后進行基因型分析。為確保實驗結果的準確性，隨機選取擴增樣本測序。

表1 HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246引物序列、退火溫度及內切酶

1.3統計學方法采用直接計數法計算基因型和等位基因頻率。正常對照組Hardy-Weinberg平衡分析，基因型和等位基因頻率分析均采用χ2檢驗，結果用相對風險度比值比(Odds ratio,OR)及95%可信區間(Confidence interval,CI)表示，P<0.05為差異有統計學意義。統計均使用SPASS 17.0軟件進行。

2 結果

本實驗包括136例HCC患者和200例健康對照人群，兩組年齡和性別構成無統計學差異(P>0.05)。正常組基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，表明納入人群具有群體代表性。HSD17B1rs676387的T等位基因分布與正常對照組存在統計學差異(95%CI=1.47～2.85,P<0.001)，未發現HSD17B2rs8191246等位基因和基因型頻率分布與正常對照組存在統計學差異。遺傳模式分析結果如表3所示，HSD17B1rs676387 T等位基因攜帶者及TT基因型與HCC組顯著相關，HSD17B2rs8191246遺傳模式與正常對照組無統計學差異。

3 討論

HSD17B1廣泛分布于人體的各個組織，包括激素分泌組織如胎盤、卵巢，還包括脂肪、皮膚、乳腺、子宮內膜、肝臟等組織，以參與調節靶器官局部組織E2水平，調整雌激素對靶組織的作用。近年來，越來越多的研究關注于HSD17B1rs676387基因多態性與激素相關疾病的關聯性。Kraft等[1]對來自歐洲、拉丁美洲、美國的8 290例前列腺癌病人和9 367例正常人進行對照研究，結果未發現HSD17B1rs676387與前列腺癌存在相關性。Feigelson等[2]在5 370例乳腺癌和7 480例正常對照中，未發現HSD17B1rs676387與乳腺癌的相關性。同樣，Gaudet等[5]通過對11 074例乳腺癌和13 605例正常對照進行meta分析，結果未發現HSD17B1rs676387與乳腺癌的相關性。在子宮肌瘤患者中，Cong等[3]未發現HSD17B1rs676387與四川漢族婦女子宮肌瘤病存在相關性。然而，Lamp等[6]通過150例子宮內膜異位癥病人和199例正常生育婦女的研究發現，HSD17B1rs676387基因多態性與子宮內膜異位癥患者的生育狀況有關。另外，Dumas等[7]通過回顧性研究發現HSD17B1rs676387多態性顯著增加乳腺密度；由于乳腺密度與乳腺癌密切相關，因此，HSD17B1rs676387也被認為與乳腺癌的發病存在關聯性。近期研究表明，HSD17B1rs676387基因多態性與唐氏綜合癥婦女早期阿爾茲海默病發生有關[8]。本次實驗發現，HSD17B1rs676387 T等位基因及TT基因型增加肝癌發病易感性，該結果提示HSD17B1rs676387參與了四川漢族人群肝癌的發病過程。

HSD17B2是雌二醇的失活轉變為雌激素酮的主要因素。HSD17B2同工酶可抑制肝臟，胎盤和子宮內膜中的性類固醇激素。Elo等[9]對50例前列腺癌病人的研究發現，HSD17B2基因座區域缺失與前列腺癌患者的生育狀況有關。Su等[4]在180例生精缺陷和120例正常男性對照的調查發現，HSD17B2rs8191246等位基因及基因型基因多態性與臺灣男性生精缺陷有關。然而，在子宮肌瘤患者中，Cong等[3]未發現HSD17B2rs8191246與四川漢族婦女子宮肌瘤病的關聯性。本次針對四川漢族人群肝癌的研究，也未發現HSD17B2rs8191246等位基因及基因型與肝癌發展的關聯性。然而，考慮到納入樣本數量的局限性，該結果尚需在大樣本中進一步證實。

總之，本研究首次探討了HSD17B1rs676387和HSD17B2rs8191246基因多態性與四川漢族人群肝癌發病風險的關系，結果發現HSD17B1rs676387等位基因及基因型可增加肝癌的易感性，提示HSD17B1參與了肝癌的發生進程。該結論有待在多民族、多中心、大樣本研究中進一步證實。

表2 HCC和正常對照人群HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246堿基分布

表3 HCC和正常對照人群HSD17B1 rs676387、HSD17B2 rs8191246基因型及遺傳模式分布

[1]Kraft P,Pharoah P,Chanock SJ,et al.Genetic variation in the HSD17B1 gene and risk of prostate cancer[J].PLoS Genet,2005,1(5):68.

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AssociationofHSD17B1andHSD17B2GenePolymorphismswithHepatocellularCarcinomainSichuanHanPopulation

LIU Bo,MA Wei,CHEN Bo,et al

(School of Medical Laboratory Science,Chengdu Medical College,Chengdu 610500,China)

ObjectiveTo investigate the association between the sex hormone 17β- hydroxysteroid dehydrogenase (HSD17B1 and HSD17B2) gene single nucleotide polymorphisms in Sichuan Han population with HCC (Hepatocellular carcinoma).Methods136 cases of HCC and 200 healthy control subjects were enrolled in present study.Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) methods were chosen to genotype theHSD17B1rs676387 andHSD17B2rs8191246 single nucleotide polymorphisms.ResultsThere was statistically significant difference between HCC patientsHSD17B1rs676387 and normal control groups (P<0.05).ConclusionHSD17B1rs676387 polymorphisms increased the susceptibility of HCC in the Sichuan Han population.Those findings should be further confirmed in a large sample of multi-ethnic multi-center study.

HSD17B1；HSD17B2；HCC；single nucleotide polymorphisms

成都醫學院“大學生創新實驗計劃”基金資助項目(CXJS201302)

2014-07-28

1.成都醫學院檢驗醫學院，四川成都 610500 2.成都醫學院康復治療系，四川成都 610500 3.中國人民解放軍成都軍區總醫院，四川成都 610083 4.成都醫學院生物醫學系，四川成都 610500 5.成都醫學院基礎醫學院，四川成都 610500

劉博(1992-)，男，四川廣元人，從事檢驗醫學工作。

張錄順，男，博士，E-mail：zhangls2012@163.com

R735.7

A

1672-688X(2014)03-0164-03