豬IL-10 SYBR Green I Real-time PCR檢測方法的建立

朱希旺，杜以軍，李 俊，陳 智，于 江，張玉玉，夏焱春，周明明，王金寶*，吳家強,3*

(1.山東大學 生命科學學院，山東 濟南 250100；2.山東省畜禽疫病防治與繁育重點實驗室，山東 濟南 250100；3.山東省農業科學院 畜牧獸醫研究所,山東 濟南 250100)

科學研究

豬IL-10 SYBR Green I Real-time PCR檢測方法的建立

朱希旺1,2，杜以軍2,3，李 俊2,3，陳 智2,3，于 江2，張玉玉2,3，夏焱春1,2，周明明1,2，王金寶1,2*，吳家強1,2,3*

(1.山東大學 生命科學學院，山東 濟南 250100；2.山東省畜禽疫病防治與繁育重點實驗室，山東 濟南 250100；3.山東省農業科學院 畜牧獸醫研究所,山東 濟南 250100)

白介素-10(IL-10)是一種具有免疫抑制作用的多能細胞因子。能夠引發豬免疫抑制效應的多種病毒在感染宿主時均伴隨有明顯的IL-10上調，其中就包括豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)，然而并不是所有的PRRSV毒株都能上調IL-10。為了詳細探討PRRSV免疫抑制與IL-10上調之間的關系以及PRRSV感染上調IL-10的具體分子機制，本研究針對豬IL-10以及看家基因β-actin的基因序列分別設計一對特異性引物，構建了各自含有IL-10、β-actin引物擴增序列的重組質粒為陽性標準品，建立了以2-△△Ct為基礎的SYBR GreenⅠreal-time PCR檢測方法。該方法線性關系良好；敏感性高，兩種基因的檢測下限均為1×101copies/μL；特異性強，擴增產物形成單一的特異性熔解峰；重復性良好，批內變異系數小于2%，批間變異系數小于3%；目的基因及內參基因的擴增效率較高，分別為92.7%、97.8%。綜上所述，該方法可以用于豬IL-10 mRNA水平的表達分析。

豬；白介素-10；PRRSV；免疫抑制；Real-time PCR

白細胞介素-10(IL-10)是一種具有多種免疫調節作用的細胞因子，其最突出的特點是具有炎癥抑制作用[1]?！?br>