HPLC法測定交沙霉素原料藥中主組分的含量

王茉莉，朱建平，張 菁，龐文哲，郭 麗(.河北省藥品檢驗研究院抗生素室，河北 石家莊 0500；2.河北醫科大學第四醫院藥品科，河北 石家莊 0500)

·論著·

HPLC法測定交沙霉素原料藥中主組分的含量

王茉莉1，朱建平1，張 菁1，龐文哲1，郭 麗2*
(1.河北省藥品檢驗研究院抗生素室，河北 石家莊 050011；2.河北醫科大學第四醫院藥品科，河北 石家莊 050011)

目的建立高效液相色譜(high efficiency liquid chromatography，HPLC)法測定交沙霉素原料藥中主組分的含量。方法采用十八烷基鍵合硅膠柱(C18)為固定相，以高氯酸溶液(取高氯酸鈉-水合物119g，加水至1 000 mL，用1mol/L的鹽酸調節pH值為2.5)-乙腈(60∶40)為流動相。柱溫為40℃，檢測波長為231nm，進樣量為20μL。結果交沙霉素主組分在考察的濃度范圍內線性關系良好，線性范圍為0.125 5 ～0.878 5g/L(r=1.000 0)，平均回收率為99.7%。定量限為2.51ng，最低檢出限為0.84ng。結論HPLC可用于交沙霉素原料藥中主組分含量的測定，快速簡便，準確可靠，靈敏度高。

交沙霉素；色譜法，高壓液相；質量控制

交沙霉素為一種大環內酯類抗生素，抗菌譜與紅霉素相似，本品適用于化膿性鏈球菌引起的咽炎及扁桃體炎，敏感菌所致的鼻竇炎、中耳炎、急性支氣管炎及口腔膿腫，肺炎支原體所致的肺炎，敏感細菌引起的皮膚軟組織感染，也可用于對青霉素、紅霉素耐藥的葡萄球菌感染。大環內酯類抗生素因組分較多，主組分的含量高低決定抗生素的性質，因此，在使用過程中一般要控制其主組分的含量。筆者參考相關文獻[1-12]，建立了高效液相色譜(highefficiencyliquidchromatography，HPLC)法測定交沙霉素原料藥中主組分的含量。該方法方便，快捷，準確可靠，能夠更好地控制交沙霉素產品的質量。

1 儀器與材料

Agilent1200高效液相色譜系統(美國安捷倫公司，二極管陣列檢測器)。

交沙霉素標準品由中國食品藥品檢定研究院提供，批號130359-200301，1 006U/mg，含量93.0%(以吉他霉素標定后)。吉他霉素標準品由中國食品藥品檢定研究院提供，批號10357-9901，吉他霉素A5含量40.2%。

交沙霉素樣品由藥廠提供。廣州白云山光華制藥股份有限公司，批號Y042Y01；杭州民生藥業集團有限公司，批號Y037Y01；桂林南藥股份有限公司，批號Y025Y01；安斯泰來制藥(中國)有限公司，批號R066-A001Y01-08051901；R066-A001Y01-08051902。高氯酸鈉-水合物、甲醇為分析純；乙腈為色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件：色譜柱DiamonsilTMC18(4.6mm×250mm，5μm)；流動相高氯酸溶液(取高氯酸鈉-水合物119g，加水至1 000mL，用1mol/L的鹽酸調節pH值為2.5)-乙腈(60∶40)；檢測波長231nm；柱溫40℃；進樣量 20μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 標準品貯備液：精密稱取交沙霉素標準品25mg，置25mL量瓶中，加甲醇5mL使溶解，再用50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為標準品貯備液。

2.2.2 標準品溶液：精密量取標準品貯備液5mL，置10mL量瓶中，用50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為標準品溶液。

2.2.3 樣品溶液：精密稱取本品25mg，置50mL量瓶中，加甲醇5mL使溶解，再用50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為樣品溶液。

2.3 系統適用性試驗：取標準品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，結果主峰與相鄰色譜峰間的分離度>1.5，理論板數>10 000。系統適用性試驗圖譜見圖1。

圖1 系統適用性試驗圖譜(交沙霉素峰與相鄰峰的分離度為6.5)

1.相鄰雜質峰；2.交沙霉素

Figure1HPLCchromatogramofsystemsuitabilitytest(Theresolutionfactorbetweenthepeaksofjosamycinandadjacentimpurityis6.5)

1.Adjacentimpurity；2.Josamycin

2.4 線性關系：分別精密量取交沙霉素標準品貯備液1.25、2.50、3.75、5、6.25、7.50、8.75mL，置于10mL量瓶中，用甲醇及50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。按“2.1”項下色譜條件測定，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，進行線性回歸分析，結果在0.125 5～0.878 5g/L范圍內，供試品濃度與其峰面積呈良好的線性關系。回歸方程為Y=26 962X+34.823 (r=1.000 0)。

2.5 專屬性考察：取本供試品溶液，分別經酸、堿、氧化和高溫破壞后進樣測定，色譜圖見圖2。結果顯示，各降解物之間及主成分峰與相鄰峰之間能有效分離，表明方法專屬性良好。

圖2 破壞試驗的色譜圖

A.未破壞樣品;B.酸破壞;C.堿破壞;D.氧化破壞;E.熱破壞1～5、7～10.有關物質；6.交沙霉素

Figure2Chromatogramsofdestructivetest

A.Undestroyed；B.Aciddestroy；C.Basedestroy；D.Oxidationdestroy；E.Heatdestroy1-5，7-10.Relatedsubstances； 6.Josamycin

2.6 精密度和穩定性試驗：取供試品溶液， 按“2.1”項下色譜條件測定，連續進樣6次，其峰面積的相對標準偏差為0.2%，儀器精密度良好。取供試品溶液，室溫(20℃)條件下放置，分別在1.5、3.0、4.5、10h測定，所檢出的雜質個數未增加，主峰面積的相對標準偏差為0.4%，表明溶液在10h內穩定。

2.7 重復性試驗：按“2.2.3”項下方法平行配制5份溶液，照上述方法進樣測定，記錄色譜峰面積。其主成份含量相對標準偏差為0.1%，方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗：精密稱取已知主組分含量的交沙霉素原料9份，分別精密加入近等量的交沙霉素標準品，照上述方法測定,測得回收率為99.7%。相對標準偏差為0.7%。結果見表1。

表1 回收率試驗結果Table 1 The results of recovery test (n=9)

RSD:relativestandarddeviation

2.9 定量限和檢測限：取逐級稀釋的交沙霉素標準品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，以信噪比S/N=10計算定量限，以信噪比S/N=3時計算最低檢測限。測得定量限為2.51ng，最低檢測限為0.84ng。

2.10 樣品測定：分別精密稱取5批交沙霉素樣品各25mg，置于50mL量瓶中，加甲醇5mL使溶解，再用50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，進樣測定，按外標法計算各樣品中交沙霉素主組分的含量。結果見表2。

表2 樣品的主組分測定結果Table 2 Determination of principal component of josamycin samples

RSD:relative standard deviation

3 討 論

3.1 標定用標準品的選擇：Omura等[13]于1970年經采用紅外光譜法、紫外光譜法和核磁共振法測定了交沙霉素的分子結構及其理化特性，證明盡管兩者是由不同的菌種發酵所得，但交沙霉素與吉他霉素A3的分子結構及其理化特性完全一致，因此交沙霉素即是吉他霉素A3[13]。我們將交沙霉素與吉他霉素A5的分子結構進行了比較，結果表明，交沙霉素的R1與吉他霉素A5的R1完全相同，即均為乙酰基，而R2所連取代基不同，即交沙霉素的R2為異戊酰基，吉他霉素A5的R2為正丁酰基。加之交沙霉素比吉他霉素只是在側鏈上多了一個甲基，因此可以認為交沙霉素與吉他霉素A5紫外吸收響應因子一致。所連取代基的微小差異并不會影響兩者的紫外響應值，采用吉他霉素A5標定交沙霉素完全可行。通過標定得出交沙霉素標準品含量為93.0%。

3.2 檢測波長的選擇：鑒于日本藥局方第十五改正書[14]在交沙霉素項下規定了其色譜純度的檢測波長為231nm；交沙霉素紫外吸收光譜最大吸收λmax為230.5～230.6nm；用二極管陣列檢測器檢測所得的紫外吸收光譜圖，其在231nm波長處的光學純度為99.99%。因此，選定231nm為其檢測波長。

3.3 柱溫的影響：日本藥局方第十五改正書[14]和進口藥品注冊標準JX20020131[15]均規定柱溫為40℃。當柱溫穩定在40℃時，色譜峰的保留時間提前且各峰間分離度良好，峰型對稱性好，柱效較高。故選擇40℃柱溫。

3.4 溶劑的選擇：根據交沙霉素的溶解度性質，其在甲醇、乙醇或乙醚中易溶，在丙酮中溶解，在水中極微溶解。故采用50%的甲醇溶液作為溶劑，且該溶劑對測定方法無干擾。

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(本文編輯：劉斯靜)

HPLCDETERMINATIONONPRINCIPALCOMPONRNTOFCRUDEDRUGJOSAMYCIN

WANGMoli1，ZHUJianping1，ZHANGJing1，PANGWenzhe1，GUOLi2*
(1.DepartmentofAntibiotics,HebeiInstituteforFoodandDrugControl，Shijiazhuang050011，China;2.DepartmentofPharmacy,theFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050011,China)

ObjectiveAhighefficiencyliquidchromatographymethodwasestablishedforthedeterminationofprincipalcomponentcrudedrugjosamycin.MethodsAoctadecylbondedsilicacolumnwasusedasthestationaryphase,withthemobilephaseofmixtureofperchloricacidsolution-acetonitrile(60∶40)atthedetectionwavelengthof231nm.Thecolumntemperaturewas40℃andtheinjectionvolumewas20μL.ResultsTheprincipalcomponentofjosamycinshowedalinearrangewithin0.125 5-0.878 5g/L(r=1.000 0).Theaveragerecoverywas99.7%.Thequantitationanddetectionlimitswere2.51ngand0.84ng,respectively.ConclusionThemethodwasrapid,simple,accurate,sensitive,andsuitableforthedeterminationofprincipalcomponentincrudedrugjosamycin.

josamycin；chromatography,highpressureliquid；qualitycontrol

2014-01-24；

2014-03-05

河北省醫學科學研究重點課題計劃(20120265)

王茉莉(1980-)，女，河北保定人，河北省藥品檢驗研究院主管藥師，理學碩士，從事藥物分析與研究。

R927.2

A

1007-3205(2014)11-1300-04

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.11.018

*通訊作者