高效液相色譜法測定當藥中獐牙菜苦苷的含量

張衛紅

(河北省石家莊市中醫院藥學部，河北 石家莊 050051)

制劑與質量控制

高效液相色譜法測定當藥中獐牙菜苦苷的含量

張衛紅

(河北省石家莊市中醫院藥學部，河北 石家莊 050051)

色譜法，高壓液相；當藥；獐牙菜苦素

當藥為河北、內蒙古一帶的民間草原，來源于獐牙菜屬植物，主要的有效成分為獐牙菜苦苷，具有清肝利膽、清熱除濕功能，并且抗炎作用強，該屬植物中的多個品種都被臨床廣泛用于治療急慢性黃疸型肝炎、膽囊炎等疾病[1]。現代研究表明，獐牙菜苦苷能有效的保護肝細胞，防止或減輕肝組織損傷，并促進受損細胞修復，并且還能明顯抑制中樞神經系統，具有顯著的鎮痛和鎮靜作用[2-3]。本研究擬采用高效液相色譜(HPLC)法，測定當藥中獐牙菜苦苷的含量，以保證當藥的藥品質量。

1 材 料

1.1 儀器 電子天平：德國賽多利斯BS124S型電子天平；紫外-可見分光度計：尤尼柯(上海)儀器有限公司UV-2102PCS掃描型紫外-可見分光光度計；HPLC儀：美國戴安公司DIONEX P680型。

1.2 藥品及試劑 當藥，購自于安國市中藥材交易大廳，河北省食品藥品檢驗院主任藥師段吉平鑒定為龍膽科植物瘤毛獐牙菜的干燥全草，編號與產地分別為：1、2、3號的產地均為河北省，4、5、6號的產地均為內蒙古自治區；獐牙菜苦苷對照品，購自中國藥品生物制品檢定所，含量81.32%，批號：0785-200203；甲醇，Fisher色譜純；水，蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：CAPCELL PAK-C18(5 μm，4.6 mm×150 mm)；流動相：甲醇-水(20∶80)；流速：1.0 mL/min；檢測波長為238 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：10.0 μL。

2.2 對照品溶液的制備 取獐牙菜苦苷0.020 32 g，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為獐牙菜苦苷濃溶液。取此溶液10 mL，置100 mL容量瓶中，加入甲醇，并稀釋到刻度，混合，搖勻，得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取當藥樣品粉碎后通過50目藥篩，混合均勻，取粉末0.2 g，精密稱量，置200 mL具塞三角瓶中，加甲醇100 mL，密塞，稱質量，超聲處理(功率為300 W，頻率為33 kHz)30 min，放冷，再稱質量，用甲醇補足減失的質量，振搖，濾過，續濾液即為供試品溶液。

2.4 線性關系考察 取獐牙菜苦苷濃溶液10 mL，置200 mL容量瓶中，加入甲醇，并稀釋到刻度，混合，搖勻，作為獐牙菜苦苷稀溶液。取此種稀溶液5.0、10.0 μL和濃溶液5.0、10.0、15.0 μL，分別注入HPLC儀，依法測定，以吸收度為縱坐標，所進對照品量為橫坐標，制作工作曲線，其回歸方程為y=1 135 380 X+22 638 R=0.999 9。結果獐牙菜苦苷的線性范圍是0.082 60～4.958 μg。

2.5 精密度試驗 吸取供試品溶液10.0 μL，連續進樣6次，測定獐牙菜苦苷積分值，計算相對標準差(RSD)=0.56%，實驗證明儀器精密度優良。

2.6 穩定性試驗 分別吸取對照品溶液和供試品溶液10.0 μL，注入HPLC儀12次，每次間隔2 h，測定獐牙菜苦苷峰面積，計算其RSD。結果對照品RSD=0.78%，供試品RSD=0.24%，由此可知，對照品和供試品溶液在24 h內穩定。

2.7 重復性試驗 取1號當藥樣品粉末0.16、0.2、0.24 g各3份，精密稱量，參照2.3項方法制成供試品溶液，依法測定，樣品的平均含量為39.40 mg/g，RSD=1.3%，重復性好。

2.8 加樣回收率試驗 取1號當藥樣品粉末9份，每份約0.2 g，每3份為1組，分別用濃度為0.030 63、0.051 04、0.071 45 mg/mL獐牙菜苦苷甲醇溶液代替甲醇溶劑，各加100 mL，密塞，稱質量，超聲處理(功率為300 W，頻率為33 kHz)30 min，放冷，再稱質量，用甲醇補足減失的質量，振搖，濾過，續濾液即為供試品溶液。依法測定，根據測定值和對照品加入量計算其回收率。結果獐牙菜苦苷的平均回收率為99.9%，RSD=1.4%，符合規定。

2.9 樣品測定 取6個批次的當藥樣品，依法制成供試品溶液，測定峰面積，計算樣品中獐牙菜苦苷的含量，結果見表1，對照品及供試品譜圖見圖1、2。

表1 6批樣品的獐牙菜苦苷含量測定結果

獐牙菜苦苷對照品HPLC圖譜

供試品HPLC圖譜

3 討 論

本研究還采用了另外3個公司的色譜柱，色譜柱型號分別為：Agilent安捷倫HC-C18液相色譜柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)、迪馬Diamonsil色譜柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)、Waters Symmetry C-18液相色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，研究對分離及測定值的影響，結果3種品牌C18色譜柱柱效、分離度均符合要求，并且含量測定值無明顯的區別，所以本法對C18色譜柱品牌沒有特別要求。獐牙菜苦苷具有解痙、鎮痛和鎮靜作用[4]，為當藥的有效成分，用HPLC法測定當藥中獐牙菜苦苷尚未見報道，本研究建立的HPLC檢測方法精密度、重現性好，雜質干擾少，獐牙菜苦苷的峰純度、峰型、分離度均比較理想，樣品穩定性和回收率均較高，是一種理想的測定方法。

[1] 胡若琪，饒嫻宜，盧明義，等.獐牙菜甙對實驗性肝損傷大鼠血漿cAMP含量的影響[J].中藥藥理與臨床，1989，5(4):31-32.

[2] 郭愛華.龍膽科獐牙菜屬藥用植物化學成分和藥理作用的研究進展[J].山西中醫學院學報，2005，6(1):57-59.

[3] 余放爭，董光平.獐牙菜屬中的藥用植物及其藥理和化學研究綜述[J].中國民族民間醫藥雜志，1999，8(4):53-55.

[4] 梁鉅忠，雷偉亞，劉佩.解痙止痛新藥：獐牙菜苦甙[J].新藥與臨床，1985，4(2)：58-59.

(本文編輯：石 康)

張衛紅(1963—)，女，副主任中藥師，學士。從事中藥房管理及中藥鑒別工作。

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1002-2619(2014)05-0740-02

2013-11-14)