卵巢癌患者手術(shù)治療前后血清HMGB1、VEGF水平的變化及臨床意義

智華 馬海燕 陳曉莉

·論著·

卵巢癌患者手術(shù)治療前后血清HMGB1、VEGF水平的變化及臨床意義

智華 馬海燕 陳曉莉

目的研究卵巢癌患者手術(shù)治療前后血清高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平的變化及臨床意義。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測40例卵巢癌、60例卵巢良性腫瘤患者血清HMGB1、VEGF的表達水平，另設(shè)30例健康人作為對照組。結(jié)果卵巢癌組HMGB1、VEGF表達水平與卵巢良性腫瘤組及對照組比較顯著增高(P<0.05)，而卵巢良性腫瘤組和對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。手術(shù)治療后，卵巢癌患者血清HMGB1、VEGF表達水平顯著降低，與治療前比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論HMGB1、VEGF在卵巢癌患者血清的表達水平可為疾病療效判斷和預(yù)后評估提供重要參考價值。

卵巢腫瘤；高遷移率族蛋白B1；血管內(nèi)皮生長因子

研究顯示，卵巢癌的病死率位居婦科惡性腫瘤首位，具有易于播散、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)率高的特點[1]。高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1，HMGB1)是一種廣泛存在于真核細胞內(nèi)、與染色體結(jié)合的非組蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，HMGB1作為一種腫瘤轉(zhuǎn)移促進基因，在多種惡性腫瘤組織表達上調(diào)，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過程[2]。HMGB1與其配基晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor foradvanced glycation end products，RAGE)結(jié)合通過上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達促進血管內(nèi)皮細胞的遷移增殖、新生血管生成和淋巴轉(zhuǎn)移[3]。然而，目前有關(guān)卵巢癌手術(shù)治療前后血清HMGB1、VEGF表達水平變化的研究尚不多見。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測卵巢癌、卵巢良性腫瘤及健康人血清HMGB1、VEGF的表達水平，為闡明卵巢癌的發(fā)病機制及治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北省張家口市第五醫(yī)院2011年4月至2012年10月期間收治的卵巢癌患者40例，均經(jīng)臨床、超聲、CT及病理等方法確診。卵巢癌患者年齡30～72歲，平均年齡45.5歲；其中卵巢漿液性囊腺癌24例，黏液性囊腺癌11例，子宮內(nèi)膜樣腺癌5例；病理分級參照WHO標準，其中高分化14例，低分化16例，中分化10例；臨床分期參照FIGO標準，其中Ⅰ期8例，Ⅱ期9例，Ⅲ期12例，Ⅳ期11例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者12例，無轉(zhuǎn)移者28例。卵巢良性腫瘤60例，患者年齡28～64歲，平均年齡32.5歲。所有患者均排除肝、腎、免疫系統(tǒng)疾病及其他部位腫瘤，術(shù)前均未接受放化療和激素治療，臨床病理資料完整。同時選取我院同期體檢正常的健康人30例作為對照。3組一般資料有均衡性。

1.2 實驗方法

1.2.1 標本采集：抽取卵巢癌患者手術(shù)前后、卵巢良性腫瘤患者和健康人清晨空腹靜脈血5 ml,室溫靜置1 h，4℃ 1 000 r/min離心15 min，取上清凍于-80℃待檢。

1.2.2 ELISA法：采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定HMGB1、VEGF蛋白水平。試劑盒購自上海生物工程有限公司，操作嚴格按照說明書進行。

2 結(jié)果

2.1 3組HMGB1、VEGF表達水平比較 卵巢癌組 HMGB1、VEGF表達水平均顯著高于卵巢良性腫瘤組和對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。卵巢良性腫瘤組和對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組血清HMGB1、VEGF表達水平比較

表1 3組血清HMGB1、VEGF表達水平比較

組別HMGB1(μg/ml)VEGF(pg/ml)卵巢癌組(n=40)238±29499±114卵巢良性腫瘤組(n=60)117±21*163±62*對照組(n=30) 112±19*#155±55*#

注：與卵巢組比較，*P<0.05；與卵巢良性腫瘤組比較，#P<0.05

2.2 HMGB1、VEGF表達與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系 HMGB1、VEGF表達水平與組織學(xué)類型無關(guān)(P>0.05)，而與TNM臨床分期、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 HMGB1、VEGF表達與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系

表2 HMGB1、VEGF表達與卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系

病理特征血清HMGB1(μg/ml)P值血清VEGF(pg/ml)P值組織學(xué)類型 卵巢漿液性囊腺癌(n=24)229±250.096487±1020.104 黏液性囊腺癌(n=11)236±27512±127 子宮內(nèi)膜樣腺癌(n=5)243±31491±120病理分級 高分化(n=14)150±200.008392±800.011 中分化(n=10)199±24451±92 低分化(n=16)243±35506±106臨床分期 Ⅰ～Ⅱ期(n=17)210±220.010441±810.006 Ⅲ～Ⅳ期(n=23)248±36511±114淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(n=28)176±180.009425±810.004 有(n=12)245±38513±118

2.3 肺癌患者血清HMGB1、VEGF表達的相關(guān)性分析 直線相關(guān)分析顯示，卵巢癌患者血清HMGB1、VEGF水平呈正相關(guān)(r=9.315，P<0.05)。

2.4 手術(shù)后患者血清HMGB1、VEGF水平的變化 30例卵巢癌患者手術(shù)后HMGB1、VEGF水平均顯著下降，與治療前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 手術(shù)治療前后HMGB1、VEGF水平比較

表3 手術(shù)治療前后HMGB1、VEGF水平比較

組別HMGB1(μg/ml)術(shù)前術(shù)后6個月VEGF(pg/ml)術(shù)前術(shù)后6個月卵巢癌組(n=42)238±29170±23*499±114268±94*

注：與術(shù)前比較，*P<0.05

3 討論

HMGB1是廣泛存在于真核細胞內(nèi)序列高度保守的DNA結(jié)合蛋白，與染色質(zhì)非特異結(jié)合后參與DNA空間構(gòu)象的構(gòu)建、細胞復(fù)制與分化及基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控等多種生理過程。近年來多項研究證實，HMGB1及其配基晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor foradvanced glycation end products，RAGE)在胃癌、肝癌、結(jié)直腸癌、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌等多種惡性腫瘤組織表達上調(diào)，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[4]。

VEGF是目前已知最有效的促血管、淋巴管生成因子，其介導(dǎo)的新生血管和淋巴管形成在腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。VEGF作為強有絲分裂原刺激內(nèi)皮細胞分泌纖溶酶原激活物及其抑制物，促進細胞分裂、增殖和遷移，導(dǎo)致腫瘤周圍大量新生血管和淋巴管生成。正常情況下VEGF呈低表達狀態(tài)，然而在宮頸癌、喉癌、肝癌等多種腫瘤組織和患者血清中均能檢測到VEGF的表達增高[5,6]。

HMGB1可由單核巨噬細胞和壞死的腫瘤細胞分泌，與細胞外基質(zhì)相互作用并誘導(dǎo)新生血管形成，從而促進腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。本研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者血清存在HMGB1、VEGF的高表達，與卵巢良性腫瘤和健康人比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且與臨床分期、病理分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示HMGB1、VEGF表達上調(diào)促進了卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程，與國內(nèi)外文獻報道[5,6]一致。本研究發(fā)現(xiàn)，隨著卵巢癌臨床分期、病理分級的增高和出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，HMGB1、VEGF表達水平均相應(yīng)上調(diào)，相關(guān)性分析顯示，二者表達呈正相關(guān)(r=9.315，P<0.05)，提示HMGB1與RAGE結(jié)合后可能通過上調(diào)VEGF的表達促進了血管內(nèi)皮細胞的遷移增殖、新生血管生成和淋巴轉(zhuǎn)移。Salahira等[7]研究發(fā)現(xiàn)，重組人HMGB1蛋白能促進口腔鱗狀細胞癌細胞VEGF的表達，從而在體外細胞水平為HMGB1促進腫瘤血管生成提供了實驗依據(jù)。Greenberger等[8]繼而發(fā)現(xiàn)MAPK、NF-κB等信號途徑參與了HMGB1/RAGE對VEGF表達的調(diào)控。Jiang等[9]利用siRNA技術(shù)敲低肝癌HCCLM3細胞HMGB1表達后，NF-κB和VEGF表達均顯著降低。以上研究均提示，HMGB1可能通過促進VEGF等血管生成因子的分泌導(dǎo)致血管新生和腫瘤轉(zhuǎn)移，這可能是HMGB1促進卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制之一。此外，HMGB1促進腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移還可能涉及其他機制：(1)HMGB1與RAGE等細胞膜分子結(jié)合，激活MAPK、P38、JNK及P42/P44等信號途徑，直接造成纖維蛋白溶酶激活級聯(lián)的下游靶點MMP-2和MMP-9的激活，促進細胞外基質(zhì)的降解和腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移；(2)HMGB1參與了類固醇激素等多個與惡性腫瘤相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控過程，這些基因的異常表達造成細胞表型的改變。

綜上所述，卵巢癌患者 HMGB1、VEGF的高表達與新生血管、淋巴管形成及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。采取有效手段阻斷新生血管、淋巴管形成是當前腫瘤治療方面研究的熱點，而對治療靶點的選擇至關(guān)重要。本研究結(jié)果顯示，HMGB1、VEGF在卵巢癌患者血清中高表達，且二者表達與新生血管、淋巴管形成密切相關(guān)。采用抑制劑或siRNA技術(shù)阻斷 HMGB1 的高表達可能下調(diào) VEGF 的表達，并直接抑制血管、淋巴管生成。總之，對HMGB1、VEGF表達水平的監(jiān)測不僅可作為卵巢癌預(yù)后評估的重要指標，更重要的是，深入研究HMGB1、VEGF參與卵巢癌侵襲轉(zhuǎn)移的信號機制可為卵巢癌的基因治療提供潛在的治療靶點，并有利于研發(fā)新的抗腫瘤藥物。

1 Bast RC，Hennessy B，Mills GB．The biology of ovarian cancer: new opportunities for translation．Nat Rev Cancer，2009，9:415-428．

2 劉曉燕,張捷,陳潔.高遷移率族蛋白 B1在卵巢癌組織及單克隆細胞亞系中的表達及其臨床意義．山東大學(xué)學(xué)報，2011，49:123-131．

3 Diener KR,Al-Dasooqi N,Lousberg EL,et al.The multifunctional alarmin HMGB1 with roles in the pathophysiology of sepsis and cancer.Immunol Cell Biol,2013.352.

4 曹清心,劉宇,凌昌全.HMGB1與腫瘤相關(guān)性的研究進展.臨床腫瘤學(xué)雜志，2012,17：282-285.

5 吳蔚，張雪玉，楊彩虹.HMGB1和VEGF-C在宮頸鱗癌中的表達及意義．寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2012，34: 699-708．

6 Sullu Y,Gun S,Atmaca S,et al.Poor prognostic clinicopathologic features correlate with VEGF expression but not with PTEN expression in squamous cell carcinoma of the larynx.Diagn Pathol,2010,5:35.

7 Salahira T,Kirita T,Bhawal UK,et al.The expression of receptor for advanced glycation end products is associated with angiogenesis in human oral squamous cell carcinoma.Virchows Arch,2007,450:287-295.

8 Greenberger S，Adini I，Boscolo E，et al． Targeting NF-κB in infantile hemangioma-derived stem cells reduces VEGF-A expression． Angiogenesis，2010，13:327-335．

9 Jiang W,Wang Z,Li X,et al.Reduced high-mobility group box 1 expression induced by RNA interference inhibits the bioactivity of hepatocellular carcinoma cell line HCCLM3.Dig Dis Sci,2012,57:92-98.

ThechangesandclinicalsignificanceofserumlevelsofHMGB1,VEGFbeforeandafteroperationinpatientswithovariancarcinoma

ZHIHua*,MAHaiyan,CHENXiaoli.*CenterforDiseaseControlandPreventionofQiaoxiDistrict,Hebei,Zhangjiakou075000，China

ObjectiveTo investigate the changes and clinical significance of serum levels of HMGB1,VEGF before and after operation in patients with ovarian carcinoma.MethodsThe serum levels of HMGB1 and VEGF were detected by ELISA in 40 patients with ovarian cancer before and after operation,60 patients with benign ovarian tumor and 30 healthy subjects.ResultsThe serum levels of HMGB1 and VEGF were obviously increased in ovarian carcinoma group,as compared with those in the other two groups (P<0.05).However there were no significant differences between normal control group and benign ovarian tumor group (P<0.05).After operation,the serum levels of HMGB1 and VEGF were significantly decreased in ovarian carcinoma group,as compared with those before treatment (P<0.05).ConclusionDetection of serum levels of HMGB1 and VEGF has important reference value for evaluating therapeutic efficacy and prognosis of patients with ovarian carcinoma.

ovarian carcinoma;high mobility group box 1;vascular endothelial growth factor

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.09.006

075000 河北省張家口市橋西區(qū)疾病預(yù)防控制中心(智華)；河北省張家口市第二醫(yī)院骨五科(馬海燕)；河北省張家口市第五醫(yī)院(陳曉莉)

R 737.31

A

1002-7386(2014)09-1297-03

2013-11-19)