五個天祝白牦牛群體近交程度分析

張浩

摘要：為了研究天祝白牦牛群體的近交程度，以5個天祝白牦牛群體共計598頭牦牛為研究對象，借助FAO推薦的17個微衛星座位對群體的近交程度做了評估，結果在JDL、LZH兩個群體檢測到了一定程度的近交，但差異不顯著（P>0.05），而在其他群體顯著（0.01

關鍵詞：牦牛；微衛星DNA；近交分析

中圖分類號：S814.8文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）05-0007-03

微衛星DNA廣泛分布在各種真核生物基因組中，多態性豐富[1，2]，其遵循孟德爾遺傳規律，呈共顯性遺傳[3]，廣泛應用于動植物群體遺傳多樣性的檢測、群體遺傳結構的評估以及群體內個體的識別、親權關系的鑒定，也可應用于分析動物群體內近交程度，用于群體內近交系數的計算。天祝白牦牛是中國稀有而珍貴的地方類群。天祝白牦牛保種采用活體保種的方式，公母羊混養，自然交配，無交配記錄，為了分析群體內部遺傳的多樣化水平，同時也為了搞清其內部是否存在近交，對天祝白牦牛的種質資源進行合理評估，本研究借助FAO推薦的17個微衛星座位來研究5個天祝白牦牛群體內的近交程度，以期為白牦牛資源的保護和利用提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料

以甘肅省天祝縣5個白牦牛群體JDL、JDW、JZMJ、LZH、WYCH為研究對象，樣本容量分別為97、111、134、122、134頭，共計598頭，來研究天祝白牦牛群體近交程度。牦牛經頸靜脈采血，-20 ℃冰箱保存備用。

1.2方法

1.2.1基因組DNA提取及檢測酚氯仿抽提法[4]提取全基因組DNA，用滅過菌的雙蒸水溶解DNA后，通過ND-1000型紫外分光光度計檢測DNA的濃度和純度，0.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測提取的DNA是否降解。檢驗合格-20 ℃冰箱保存備用。

1.2.2引物信息采用FAO（http：//dad.fao.org/）推薦的17個牦牛微衛星位點，微衛星位點盡量分布在不同的染色體上。引物在生物工程（北京）有限公司合成，采用PAGE方法純化。微衛星引物信息見表1。

1.2.3PCR擴增及產物檢測PCR擴增反應采用15 μl體系：10×Taq Buffer 1.5 μL，dNTP Mixture（10 mmol/L）1.0 μL，上下游引物（10 pmol/mL）各0.2 μL，DNA模板（25 ng/μL）1.0 μL，Taq Polymerase（5 U/μL）0.3 μL，ddH2O補足至15 μL。Taq Buffer、dNTP Mixture以及Taq Polymerase 等購自天根生化科技（北京）有限公司。

PCR擴增程序：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性30 s，退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環；72 ℃復性10 min。PCR產物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

PCR產物經2% 瓊脂糖凝膠檢測，以天根生化科技有限公司產DNA Marker Ⅰ為分子量標準，150 V電泳10 min，通過UV-1000型凝膠成像系統查看PCR擴增效果及條帶大小，照相保存。

1.2.5統計分析Fstat 2.9.3軟件[5]用以計算群體內的近交系數。

2結果與分析

摘要：為了研究天祝白牦牛群體的近交程度，以5個天祝白牦牛群體共計598頭牦牛為研究對象，借助FAO推薦的17個微衛星座位對群體的近交程度做了評估，結果在JDL、LZH兩個群體檢測到了一定程度的近交，但差異不顯著（P>0.05），而在其他群體顯著（0.01

關鍵詞：牦牛；微衛星DNA；近交分析

中圖分類號：S814.8文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）05-0007-03

微衛星DNA廣泛分布在各種真核生物基因組中，多態性豐富[1，2]，其遵循孟德爾遺傳規律，呈共顯性遺傳[3]，廣泛應用于動植物群體遺傳多樣性的檢測、群體遺傳結構的評估以及群體內個體的識別、親權關系的鑒定，也可應用于分析動物群體內近交程度，用于群體內近交系數的計算。天祝白牦牛是中國稀有而珍貴的地方類群。天祝白牦牛保種采用活體保種的方式，公母羊混養，自然交配，無交配記錄，為了分析群體內部遺傳的多樣化水平，同時也為了搞清其內部是否存在近交，對天祝白牦牛的種質資源進行合理評估，本研究借助FAO推薦的17個微衛星座位來研究5個天祝白牦牛群體內的近交程度，以期為白牦牛資源的保護和利用提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料

以甘肅省天祝縣5個白牦牛群體JDL、JDW、JZMJ、LZH、WYCH為研究對象，樣本容量分別為97、111、134、122、134頭，共計598頭，來研究天祝白牦牛群體近交程度。牦牛經頸靜脈采血，-20 ℃冰箱保存備用。

1.2方法

1.2.1基因組DNA提取及檢測酚氯仿抽提法[4]提取全基因組DNA，用滅過菌的雙蒸水溶解DNA后，通過ND-1000型紫外分光光度計檢測DNA的濃度和純度，0.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測提取的DNA是否降解。檢驗合格-20 ℃冰箱保存備用。

1.2.2引物信息采用FAO（http：//dad.fao.org/）推薦的17個牦牛微衛星位點，微衛星位點盡量分布在不同的染色體上。引物在生物工程（北京）有限公司合成，采用PAGE方法純化。微衛星引物信息見表1。

1.2.3PCR擴增及產物檢測PCR擴增反應采用15 μl體系：10×Taq Buffer 1.5 μL，dNTP Mixture（10 mmol/L）1.0 μL，上下游引物（10 pmol/mL）各0.2 μL，DNA模板（25 ng/μL）1.0 μL，Taq Polymerase（5 U/μL）0.3 μL，ddH2O補足至15 μL。Taq Buffer、dNTP Mixture以及Taq Polymerase 等購自天根生化科技（北京）有限公司。

PCR擴增程序：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性30 s，退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環；72 ℃復性10 min。PCR產物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

PCR產物經2% 瓊脂糖凝膠檢測，以天根生化科技有限公司產DNA Marker Ⅰ為分子量標準，150 V電泳10 min，通過UV-1000型凝膠成像系統查看PCR擴增效果及條帶大小，照相保存。

1.2.5統計分析Fstat 2.9.3軟件[5]用以計算群體內的近交系數。

2結果與分析

摘要：為了研究天祝白牦牛群體的近交程度，以5個天祝白牦牛群體共計598頭牦牛為研究對象，借助FAO推薦的17個微衛星座位對群體的近交程度做了評估，結果在JDL、LZH兩個群體檢測到了一定程度的近交，但差異不顯著（P>0.05），而在其他群體顯著（0.01

關鍵詞：牦牛；微衛星DNA；近交分析

中圖分類號：S814.8文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）05-0007-03

微衛星DNA廣泛分布在各種真核生物基因組中，多態性豐富[1，2]，其遵循孟德爾遺傳規律，呈共顯性遺傳[3]，廣泛應用于動植物群體遺傳多樣性的檢測、群體遺傳結構的評估以及群體內個體的識別、親權關系的鑒定，也可應用于分析動物群體內近交程度，用于群體內近交系數的計算。天祝白牦牛是中國稀有而珍貴的地方類群。天祝白牦牛保種采用活體保種的方式，公母羊混養，自然交配，無交配記錄，為了分析群體內部遺傳的多樣化水平，同時也為了搞清其內部是否存在近交，對天祝白牦牛的種質資源進行合理評估，本研究借助FAO推薦的17個微衛星座位來研究5個天祝白牦牛群體內的近交程度，以期為白牦牛資源的保護和利用提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料

以甘肅省天祝縣5個白牦牛群體JDL、JDW、JZMJ、LZH、WYCH為研究對象，樣本容量分別為97、111、134、122、134頭，共計598頭，來研究天祝白牦牛群體近交程度。牦牛經頸靜脈采血，-20 ℃冰箱保存備用。

1.2方法

1.2.1基因組DNA提取及檢測酚氯仿抽提法[4]提取全基因組DNA，用滅過菌的雙蒸水溶解DNA后，通過ND-1000型紫外分光光度計檢測DNA的濃度和純度，0.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測提取的DNA是否降解。檢驗合格-20 ℃冰箱保存備用。

1.2.2引物信息采用FAO（http：//dad.fao.org/）推薦的17個牦牛微衛星位點，微衛星位點盡量分布在不同的染色體上。引物在生物工程（北京）有限公司合成，采用PAGE方法純化。微衛星引物信息見表1。

1.2.3PCR擴增及產物檢測PCR擴增反應采用15 μl體系：10×Taq Buffer 1.5 μL，dNTP Mixture（10 mmol/L）1.0 μL，上下游引物（10 pmol/mL）各0.2 μL，DNA模板（25 ng/μL）1.0 μL，Taq Polymerase（5 U/μL）0.3 μL，ddH2O補足至15 μL。Taq Buffer、dNTP Mixture以及Taq Polymerase 等購自天根生化科技（北京）有限公司。

PCR擴增程序：95 ℃預變性5 min；95 ℃變性30 s，退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個循環；72 ℃復性10 min。PCR產物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

PCR產物經2% 瓊脂糖凝膠檢測，以天根生化科技有限公司產DNA Marker Ⅰ為分子量標準，150 V電泳10 min，通過UV-1000型凝膠成像系統查看PCR擴增效果及條帶大小，照相保存。

1.2.5統計分析Fstat 2.9.3軟件[5]用以計算群體內的近交系數。

2結果與分析