一株羊源產氣莢膜梭菌的分離與鑒定

金鐸+林家琪+董真等

摘要：2013年4月，揚州大學動物醫院畜禽門診接診一例山羊急性死亡的病例，對其進行剖檢，無菌恒溫厭氧分離培養，純化鑒別，革蘭氏染色，生化反應，結果表明為產氣莢膜梭菌，并對此進行了一定的討論。

關鍵詞：產氣莢膜梭菌；分離；鑒定

中圖分類號：S858.26 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2014）06-0005-02

產氣莢膜梭菌舊名魏氏梭菌，產氣莢膜桿菌，根據致死性毒素與其抗毒素的中和試驗，將此菌分為A、B、C、D、E 5個類型，以菌體抗原進行血清型分類意義不大，菌體抗原與毒素分型之間沒有明顯關系，毒素至少已經發現15種，其中α、β、ε、ι、δ、θ、κ、λ、μ、υ、CPE、其他毒素、神經氨酸酶等。A型、C型、D型的某些菌株可以產生腸毒素，A型產氣莢膜梭菌主要引起動物的氣性壞疽，牛、羔羊、新生羊駝、馴鹿、仔豬、家兔的腸毒血癥，B型菌主要引起羔羊痢疾，還可以引起犢牛、羔羊、山羊的腸毒血癥或壞死性腸炎，C型菌是綿羊猝狙的病原。D型、E型菌也是導致牛羊腸毒血癥和豬的腹瀉[1]。筆者結合相關知識，將一例羊源產氣莢膜梭菌感染病例介紹如下。

1 材料與方法

1.1 病料來源

2013年4月，江蘇某養殖戶飼養的240多只母山羊陸續產羔，羔羊在產后24～48 h開始出現劇烈腹瀉，拉水樣黑色稀糞，虛弱，隨后死亡，死亡率達60%。剖檢后發現病死羊羔嚴重脫水，真胃和大腸內容物呈糊狀，小腸壁變薄，或黃或黑，透明，充滿空氣，部分腸道黏膜充血，卡他性出血性炎癥，肝臟腫大。疑似為產氣莢膜梭菌感染，需進一步進行實驗室檢測。

1.2 細菌分離

取山羊的腸道、肝臟、脾臟、腎臟等病變組織在無菌環境下接種于鮮血瓊脂培養基，在37℃條件下用燭缸厭氧培養24 h。然后在無菌條件下分別挑取血平板上的單個菌落，用鮮血瓊脂培養基和麥康凱瓊脂培養基進行鑒別培養。取單個菌落進行革蘭氏染色，鏡檢。

1.3 生化試驗

利用細菌微量生化反應管（購于杭州微生物試劑有限公司，操作方法與判定標準參照該公司操作方法與標準）對所分離的菌株進行生化指標測定，牛乳發酵活性實驗。

2 結果與分析

2.1 細菌分離

取山羊的病變組織（肺臟）在無菌環境下接種于血瓊脂培養基中，37 ℃條件培養24 h后出現圓形光滑、隆起、淡黃色的菌落。菌落周圍有溶血環，出現明顯的雙溶血環，內環為完全溶血，外圍為不完全溶血環。經過純化培養，麥康凱瓊脂板上沒有菌落生長。經過革蘭氏染色鏡檢，結果菌體為直桿狀，兩端鈍圓，單個或成雙的革蘭氏陽性細菌。

2.2 生化試驗結果

分離菌接種在生化反應管后于37℃培養24h后，取出觀察，分離細菌能發酵葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖等，牛乳發酵活性試驗呈陽性。結合剖檢癥狀，確定為產氣莢膜棱菌感染。

3 討 論

該病例羊的腸道出現明顯卡他性滲出并伴有出血癥狀，肝臟和腎臟有壞死灶。分離菌株為直桿狀，兩端鈍圓，單個或成雙的革蘭氏陽性細菌，芽孢大而卵圓。通過生化試驗檢驗，與產氣莢膜梭菌的生化反應結果一致，從而證明分離菌是產氣莢膜梭菌。該病例的死亡率較高，對羊群危害較大。該病的防治重在飼養管理，保持環境，溫濕度穩定。平時要注意環境衛生，及時清理舍內糞便，定期用生石灰、百毒殺等消毒。不要突然更換飼料，平時可在飼料中添加微量元素和益生菌以調節腸道中的正常菌群平衡對減少該病的發生具有一定的效果[3]。加強對畜舍環境和糞便內產氣莢膜梭菌的檢測和監控有利于該病的防控，對暴發過該病的地區，需要掌握其流行形勢以便于采取合理防治措施[4]。該疾病發展太快，治療一般效果不明顯。接種疫苗是預防該病的有效方法，預防羔羊痢疾、猝狙，腸毒血癥等，可用三聯菌苗和五聯菌苗進行免疫防治。

由于產氣莢膜梭菌病常呈急性散發， 目前尚無有效的治療措施，治療時一般遵循強心補液、解毒、鎮靜、調理腸胃的原則， 進行對癥治療；給予抗生素等藥物， 如青霉素、四環素等，值得注意的是，磺胺嘧啶和多黏菌素類藥物對產氣莢膜梭菌沒有抑制作用，對其他的細菌卻有較強的抑制作用[5]，應用這兩類藥物治療產氣莢膜梭菌往往不會得到理想的結果；采用同型的高免血清治療， 可收到一定的效果。在中藥治療方面，一般用能增加胃腸蠕動、清熱解毒、涼血止痢、阻止瘟疫熱毒進入機體的中藥， 如黃芩黃連解毒湯加減， 煎水灌服， 每天2次，連用3～5 d， 可收到良好的效果[6]。臨床上，產氣莢膜梭菌常與其他細菌混合感染，如巴氏桿菌、大腸桿菌、鏈球菌、葡萄球菌、沙門氏菌、肺炎克雷伯氏菌等[7]，在診斷和治療的時候應格外注意，不僅要針對單一病原采取對癥治療措施，也要注意可能的繼發感染。

產氣莢膜梭菌是羊腸道內正常菌，正常情況下數量有限，腸道菌群處于平衡狀態，其發病原因主要與氣候變化飼養管理不當或疫苗免疫失敗等有關，如長期陰雨潮濕飼喂精料過多粗纖維含量較少，致使腸道正常菌群失調，產氣莢膜梭菌大量繁殖，產生毒素，使機體發病產氣莢膜梭菌有不同的血清型[8]，確診該病應依靠實驗室診斷血清型鑒定，否則可能導致誤診。

參考文獻：

[1] 陸承平.獸醫微生物學[M].第四版.北京中國農業出版社，2007.

[2] 張紅英，盧中華，楊 霞，等. 我國魏氏梭菌病的流行特點[J]. 中國畜牧獸醫，2004（1）：39-41.

[3] 李長安，王正園，常順蘭. 牛魏氏梭菌病概述[J]. 畜牧獸醫雜志，2012（6）：48-49，52.

[4] 鄭曉麗，竇賢明，胡道俊，等. 湖北襄陽地區規模化牛場產氣莢膜梭菌的分離和鑒定[J]. 湖北農業科學，2011，50（23）：4893-4895.

[5] 陳天壽. 微生物培養基的制造與應用[M]. 北京： 中國農業出版社，1995.

[6] 鄭曉麗，竇賢明，胡道俊，等. 產氣莢膜梭菌對養牛業的危害及其防制[J]. 中國畜牧獸醫，2010（8）：211-214.

[7]盛衛東. 魏氏梭菌病的診斷與綜合防治[J]. 農技服務，2013（2）：173.

[8]梁淑珍，徐明舉. 山羊產氣莢膜梭菌病的診治[J]. 畜牧與獸醫，2011（11）：72-73.