慢性阻塞性肺疾病急性加重患者呼吸道病毒及非典型病原體的檢測(cè)分析

童春堂 尤蘭華 郭沛艷 李雪輝 陳杭薇

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一種常見的危害人類健康的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，隨著人口老齡化及環(huán)境污染的加重，其患病率呈逐年增高[1]。COPD患者每次病情的急性加重嚴(yán)重都會(huì)損害肺功能，加速病情進(jìn)展，因而減少COPD急性加重成為延緩該病病情進(jìn)展、改善生活質(zhì)量的重要措施。既往研究發(fā)現(xiàn)大約50%的AECOPD和細(xì)菌感染有關(guān)，而AECOPD與呼吸道病毒及非典型病原體感染的關(guān)系報(bào)道較少[2]。本研究應(yīng)間接免疫熒光法(immunofluorescence assay,IFA)快速定性檢測(cè)AECOPD患者血清中九種呼吸道病原體IgM抗體，旨在了解其在AECOPD患者中的感染情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

對(duì)象與方法

一、檢測(cè)對(duì)象

2012年6月1日至2013年9月1日收住北京軍區(qū)總醫(yī)院呼吸內(nèi)科的211例AECOPD患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)符合2011年修訂版GOLD指南[2]，排除近期接種流感疫苗患者。其中男性128例，女性83例，年齡46～98(77.4±9.4)歲，臨床癥狀包括咳嗽、咳黃痰、喘憋加重等,其中發(fā)熱患者18例 (體溫>37.5 ℃)，記錄其入院季節(jié)、年患病次數(shù)等。

二、檢測(cè)試劑

九項(xiàng)呼吸道感染病原體IgM抗體檢測(cè)試劑盒(國(guó)食藥監(jiān)械(進(jìn))字2010第3400365號(hào))為西班牙VIRCELL公司原裝進(jìn)口產(chǎn)品。采用間接免疫熒光法(IFA)技術(shù)，可同時(shí)檢測(cè)流感病毒A/B(influenza virus A/B,FluA/B)、副流感病毒(parainfluenza virus,PIV)1/2/3型、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、腺病毒(adenovirus,ADV)、嗜肺軍團(tuán)菌(Legionellapneumophila,LP)血清1型、肺炎支原體(mycoplasma pneumoniae,MP)、Q熱立克次體(Q fever rickettsia,QFR)、肺炎衣原體(chlamydia pneumonia,CP)九種IgM抗體。

三、檢測(cè)方法

1. 標(biāo)本收集與處理：①患者入院24 h內(nèi)，靜脈穿刺采集血液2～3 ml，以離心半徑8 cm，2000 r/min離心5 min后取血清待測(cè)，按照1︰1比例稀釋血清樣本；②向稀釋后的血清加入吸附劑以避免干擾IgM檢測(cè)，處理后的血清以離心半徑8 cm，3000 r/min離心10～15 min，在載玻片的每孔中加入15 μl吸附劑處理過的血清，放入濕盒于37 ℃下溫育90 min；③用磷酸鹽緩沖液緩慢沖洗載玻片后放置水平搖床搖動(dòng)10 min，再用蒸餾水緩慢水流沖洗；④將載玻片自然晾干，每孔加入15 μl熒光素標(biāo)記的抗人IgM磷酸緩沖液后放入濕盒37 ℃溫育30 min，晾干后加封閉介質(zhì)，加蓋玻片，即刻熒光顯微鏡下觀察結(jié)果，如不能立即觀察，可避光放置于2～8 ℃不超過24 h。

2. 結(jié)果判斷：陽性：Flu、PIV、ADV、RSV對(duì)陽性血清的細(xì)胞核、胞漿或胞膜出現(xiàn)蘋果綠色熒光(在PIV和RSV中可能同時(shí)觀察到著色的合胞)；LP、CP或QFR中所有的細(xì)菌呈現(xiàn)蘋果綠色熒光；MP對(duì)陽性血清在細(xì)胞外圍呈現(xiàn)蘋果綠色熒光。陰性：LP、CP和QFR無熒光，MP、Flu、ADV、PIV和RSV的細(xì)胞呈紅色。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，率的比較運(yùn)用χ2檢驗(yàn)。

結(jié) 果

一、不同季節(jié)組AECOPD患者IgM抗體檢測(cè)結(jié)果

AECOPD患者中不同季節(jié)IgM抗體總陽性率比較，χ2=15.6，bP=0.001，其中春季IgM抗體總陽性率為57.5%(46/80)，通過不同季節(jié)間的兩兩比較，顯著高于夏季和秋季的30%(12/40)、22.9%(8/35)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；春季FluA IgM抗體陽性率為27.5%(22/80)，F(xiàn)isher確切概率法計(jì)算aP=0.02，通過不同季節(jié)間的兩兩比較，顯著高于夏季的5%(2/40)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其它病原體不同季節(jié)間IgM抗體陽性檢出結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

二、不同年齡組AECOPD患者IgM抗體檢測(cè)結(jié)果

不同年齡AECOPD患者IgM抗體陽性率比較，P>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

表1 不同季節(jié)組AECOPD患者IgM抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 不同年齡組AECOPD患者IgM抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 不同患病次數(shù)AECOPD患者IgM抗體檢測(cè)結(jié)果

三、不同年患病次數(shù)AECOPD患者IgM抗體檢測(cè)結(jié)果

AECOPD患者年患病次數(shù)≥2次與≤1次的IgM抗體總陽性率分別為46.2%(73/158)、35.8%(19/53)，P>0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表3。

四、呼吸道病原體IgM抗體混合陽性檢出情況

混合陽性率5.2%(11/211)，其中Flu合并其他病原體陽性者分別為7例，見表4。

表4 呼吸道病原體抗體混合陽性檢出情況

討 論

COPD是一種常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，在全球各個(gè)地區(qū)均有較高的患病率，以持續(xù)存在氣流受限為特征，并呈進(jìn)行性發(fā)展[3]。反復(fù)的急性加重是導(dǎo)致患者肺功能嚴(yán)重受損及死亡的主要原因，位居世界死亡原因的第4位，給社會(huì)及家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，大多COPD 患者每年會(huì)出現(xiàn)2～5次的急性加重[4]。因此，做好AECOPD的預(yù)防和診治，對(duì)于減少急性加重、延緩肺功能下降、提高患者生活質(zhì)量乃至節(jié)約有限的醫(yī)療資源均有重大意義。

研究表明細(xì)菌感染是AECOPD最主要的原因[5-6]，但近年來隨著呼吸道病毒及非典型病原體(主要指肺炎支原體、嗜肺軍團(tuán)菌、肺炎衣原體)檢測(cè)方法的改進(jìn)和研究的深入，發(fā)現(xiàn)呼吸道病毒及非典型病原體感染與AECOPD密切相關(guān)[7-8]，其中約14%～40% 的AECOPD與病毒感染相關(guān)[9-10]，AECOPD患者入院后盡快明確致病病原體，對(duì)于選擇恰當(dāng)?shù)目垢腥舅幬锞哂兄笇?dǎo)意義。本研究中采用的檢測(cè)試劑盒基于IFA技術(shù)，可對(duì)血清中反映新近發(fā)生感染的九種呼吸道病原體IgM抗體行定性檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)陽性率較高，并存在一定比例的混合感染，以Flu合并其它病原體最為多見，符合我們先前報(bào)道的混合感染是其特點(diǎn)的狀況[11]。

一些COPD患者因高齡、患有多種并發(fā)疾病，或長(zhǎng)期吸入糖皮質(zhì)激素，機(jī)體免疫力差，在流行季節(jié)較容易感染各種病原體導(dǎo)致病情急性加重，由于目前尚無有效的抗病毒藥物，接種流感病毒疫苗成為預(yù)防AECOPD的重要手段[12]。本研究中AECOPD患者春季IgM抗體總陽性率顯著高于夏季和秋季，其中以FluA IgM抗體陽性率顯著高于夏季為特點(diǎn)，提示COPD患者在穩(wěn)定期應(yīng)做好疫苗接種。另外，應(yīng)該關(guān)注呼吸道病毒及非典型病原體感染與AECOPD年加重次數(shù)的關(guān)系，本研究中按年患病次數(shù)將AECOPD患者分為兩組，年患病次數(shù)≥2次組的IgM抗體陽性率高于≤1次組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

呼吸道病毒及非典型病原體尤其是流感病毒感染與AECOPD關(guān)系密切，嚴(yán)重影響患者的臨床療效及生活質(zhì)量，混合感染不容忽視，同時(shí)提醒COPD患者在呼吸道病毒及非典型病原體流行的季節(jié)應(yīng)做好預(yù)防工作。

參 考 文 獻(xiàn)

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