浙江溫州地區人群染色體9p21上rs1333049位點的單核苷酸多態性分布與冠心病的相關性

林斌等

[摘要]目的研究浙江溫州地區漢族人群中染色體9p21上的rs1333049位點上的單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism，SNP）與冠心病的相關性。方法對冠心病組（至少1支主要冠狀動脈內徑狹窄≥50.00%）181例和對照組173例，采用聚合酶鏈反應和基因測序方法，檢測染色體9p21上rs1333049位點基因多態性。結果3種基因型均可在rs1333049位點上檢測到，并且其基因型的分布亦符合Hardy_Weinberg平衡定律。冠心病組rs13330149位點的CC、CG基因型分布及C等位基因頻率均高于對照組，差異有統計學意義（均P<0.01）。結論rs1333049位點G/C基因的多態性與冠心病發病相關，其中的C等位基因亦可能是浙江溫州地區漢族人群冠心病患者的易感性標志之一。

[關鍵詞]冠狀動脈粥樣硬化性心臟病；染色體9p21；單核苷酸多態性

中圖分類號：R541.4文獻標識碼：A文章編號：1009_816X（2014）04_0298_03

doi：10.3969/j.issn.1009_816x.2014.04.10冠心病是成年人死亡的重要原因，隨著社會、經濟的發展和變化，我國冠心病的發病率呈上升趨勢。目前，大家普遍認為冠心病是由多種遺傳因素和各種高危因素（疾病）共同作用而導致的多基因遺傳性疾病。然而，得到確認的有關遺傳因素對冠心病的影響研究成果并不多。近來，全基因組相關研究（genome_wide association studies GWAS）檢測了成百上千個標志物或者重點相關基因，其中包含冠心病的易患基因和其多態性的研究。WTCCC[1]（The Wellcome Trust Case Control Consortium）等發現人類9號染色體上的9p21.3區域上的基因和冠心病發病顯著相關。本文對354例冠狀動脈造影檢查患者進行了9p21區域多態位點rs1333049位點上的基因進行基因多態性測定，以探討其是否與浙江溫州地區漢族人群中的冠心病發病相關。

1資料與方法

1.1一般資料：入選對象均為2010年8月至2013年3月本院心內科的住院患者。所有患者入院后均常規檢測總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、血糖（Glu），并行冠狀動脈造影檢查。左右冠狀動脈主干、回旋支、前降支及其主要分支中任何一支血管直徑狹窄程度≥50%為冠狀動脈造影陽性。依據造影結果分為兩組：（1）冠心病組：共181例，男112例，女69例，年齡38～84歲，平均（64.76±10.59）歲。（2）對照組：冠狀動脈造影陰性，共173例，男105例，女68例，年齡35～81歲，平均（63.20±11.33）歲。所有患者均為溫州本地長期居住者，漢族且無親緣關系，并排除腦血管病、外周血管病、惡性腫瘤病史者。兩組患者年齡、性別等一般臨床資料，比較差異無統計學意義，見表1。

1.2方法：

1.2.1染色體基因組DNA的采集：在征得患者或其家屬的同意后，從外周靜脈采取5ml的靜脈血，置于常規抗凝管中（應用酸性的檸檬酸葡萄糖抗凝）。并取得白細胞（應用低滲溶血法），并提取基因組DNA，TE溶解（采用常規的酚/氯仿抽提法），并置于-20℃低溫的冰箱中保存。

1.2.2引物設計：引物采用Primier 5軟件自行設計，rs1333049上游引物：5'_GGCTGCTGACTCTGAAGATC_3'，下游引物：5'_CTTGCTTACCTCTGCGAGTG_3'，由上海生工生物工程有限公司合成。

1.2.39p21基因聚合酶鏈反應（PCR）：擴增總體積為50μL，其中引物1.0μmol/L。擴增條件：95℃ 5min，92℃50s，60℃50s，72℃50s，72℃5min，共35個循環。PCR產物經2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

1.2.4基因測序：PCR產物送長沙三濟生物科技有限公司純化后，采用ABI3730XLDNA分析系統進行測序分析。

1.3統計學處理：應用SPSS17.0版中文軟件包進行統計分析。計量資料以（x-±s）表示，組間比較采用t檢驗；等位基因頻率和基因型采用基因計數法進行統計計算，對基因型資料進行遺傳平衡檢驗（采用Hardy_Weinberg法）；單個基因型及基因組組間的等位基因頻率比較采用卡方檢驗，rs1333049基因多態性和冠心病的相關性采用多因素Logistic回歸分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.19p21區域rs1333049位點多態性分析：rs1333049位點PCR擴增結果見圖1。基因測序結果可見CC、CG及GG三種基因型。冠心病組和對照組的rs1333049位點上的觀察數與期望數比較差異無統計學意義（P>0.05），表明本研究的人群符合Hardy_Weinberg平衡定律。

3討論

冠心病是一種由多種遺傳因素和各種高危因素（疾病）共同作用而導致的多基因遺傳性疾病。年齡、性別、肥胖、高血壓、高脂血癥、糖尿病，吸煙等均是冠心病患病的重要危險因素[2]。但近年來，有研究表明基因在冠心病發病中扮演重要角色。關注于冠心病和心肌梗死所涉及的全基因組相關研究（GWAS）觀察發現，冠心病和心肌梗死相關位點在染色體9p21位點最為常見。WTCCC研究入選了1926例冠心病病例以及2938例對照組病例，采用Affymetrix 500K基因芯片，在世界上首次發現多態位點rs1333049（位于9p21.3區域）與高加索人群冠心病的發病呈顯著相關[1]。Schunkert H等薈萃分析了7個歐洲人群和參加早先冠心病全基因組相關研究的4個人群，證實了rs1333049位點的多態性與冠心病的發病關系明顯相關[3]。此后該位點SNP和冠心病易感性的關聯也相繼在其它國家的其它人種人群中得到了印證。Hinohara等研究發現韓國和日本人群中染色體9p21區域上的rs1333049位點SNP和冠心病易感性的相關[4，5]。而中國的學者Wang等所做的研究結果亦提示rs1333049位點CC表型與中國漢族人群冠心病的早發性和嚴重性密切有關，且與患者的血糖，血胰島素水平及炎癥因子無關[6]。杜蓉等報道rs1333049位點CC與CG基因型為新疆維族人群心肌梗死的易感相關危險基因型[7]。本研究中所發現的冠心病患者和對照組患者的rs1333049位點基因型頻率分布有顯著差異（P<0.01），冠心病患者中的C等位基因的頻率明顯高于對照組（P<0.01），提示rs1333049位點多態性與冠心病的發病相關，C等位基因可能是浙江溫州地區漢族人群冠心病發病的易感因素之一。

在染色體9p21上發現的且與冠心病關系密切的SNPs主要集中在染色體9p21.3的區域內。該區域存在2種抑癌基因CDKN2A和CDKN2B，分別編碼細胞周期蛋白激酶抑制子CDK4家族中的抑制子p16NK4a、p15NK4b，在多種細胞增殖、衰老和凋亡中起重要作用[8～11]，而細胞增殖、衰老和凋亡是動脈粥樣硬化形成的主要特征之一，而動脈粥樣硬化是冠心病的病理基礎。Cunnington等研究表明9p21.3位點基因可能影響細胞周期激酶抑制因子4b位點的反義非編碼RNA ANRIL的調節，進而調節CDKN2A和CDKN2B的表達，這種調節可能促進細胞的增殖，引起動脈粥樣硬化性改變[12]。

總之，SNP位點的突變型在不同人種，民族中的差異較大，并且其易感位點亦不同，而且目前世界上對染色體9p21上SNP位點如何影響患者患病機制尚不明確，根據本研究的結果，我們推測其可能作為一種遺傳標志，通過其鄰近的基因發揮作用，關于SNP影響冠心病患病機制有待進一步研究。

參考文獻

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（收稿日期：2014_4_7）

在染色體9p21上發現的且與冠心病關系密切的SNPs主要集中在染色體9p21.3的區域內。該區域存在2種抑癌基因CDKN2A和CDKN2B，分別編碼細胞周期蛋白激酶抑制子CDK4家族中的抑制子p16NK4a、p15NK4b，在多種細胞增殖、衰老和凋亡中起重要作用[8～11]，而細胞增殖、衰老和凋亡是動脈粥樣硬化形成的主要特征之一，而動脈粥樣硬化是冠心病的病理基礎。Cunnington等研究表明9p21.3位點基因可能影響細胞周期激酶抑制因子4b位點的反義非編碼RNA ANRIL的調節，進而調節CDKN2A和CDKN2B的表達，這種調節可能促進細胞的增殖，引起動脈粥樣硬化性改變[12]。

總之，SNP位點的突變型在不同人種，民族中的差異較大，并且其易感位點亦不同，而且目前世界上對染色體9p21上SNP位點如何影響患者患病機制尚不明確，根據本研究的結果，我們推測其可能作為一種遺傳標志，通過其鄰近的基因發揮作用，關于SNP影響冠心病患病機制有待進一步研究。

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（收稿日期：2014_4_7）

在染色體9p21上發現的且與冠心病關系密切的SNPs主要集中在染色體9p21.3的區域內。該區域存在2種抑癌基因CDKN2A和CDKN2B，分別編碼細胞周期蛋白激酶抑制子CDK4家族中的抑制子p16NK4a、p15NK4b，在多種細胞增殖、衰老和凋亡中起重要作用[8～11]，而細胞增殖、衰老和凋亡是動脈粥樣硬化形成的主要特征之一，而動脈粥樣硬化是冠心病的病理基礎。Cunnington等研究表明9p21.3位點基因可能影響細胞周期激酶抑制因子4b位點的反義非編碼RNA ANRIL的調節，進而調節CDKN2A和CDKN2B的表達，這種調節可能促進細胞的增殖，引起動脈粥樣硬化性改變[12]。

總之，SNP位點的突變型在不同人種，民族中的差異較大，并且其易感位點亦不同，而且目前世界上對染色體9p21上SNP位點如何影響患者患病機制尚不明確，根據本研究的結果，我們推測其可能作為一種遺傳標志，通過其鄰近的基因發揮作用，關于SNP影響冠心病患病機制有待進一步研究。

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（收稿日期：2014_4_7）