HPV L1殼蛋白和MMP—2在宮頸病變表達及臨床意義

周利娟

【摘要】 目的 探討人乳頭狀瘤病毒（HPV）L1殼蛋白及MMP-2在不同宮頸病變表達及臨床意義。方法 宮頸疾病患者121例， 術前HPV-DNA均為陽性， 采用免疫組化方法檢測HPV L1殼蛋白和MMP-2在各級宮頸病變組織的表達情況。結果 121例患者中， HPV L1蛋白在正常宮頸組、CIN I組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組陽性表達分別為69.69%（23/33）、83.33%（15/18）、36.84%（7/19）、4.70%（1/21）、0（0/30）。CIN中為37.93%（23/58）。除了CINⅢ與SCC比較差異無統計學意義（P>0.05）外， 其他不同宮頸病變間比較， 差異有統計學意義（P<0.05）；MMP-2 在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組的陽性表達分別為6.06%（2/33）、33.33%（6/18）、57.89%（11/19）、66.66%（14/21）、76.66%（23/30）， CIN中53.44%（31/58）。正常組織中MMP-2 的陽性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2 在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統計學意義（P<0.05）。CINⅠ組中HPV L1蛋白陽性表達率最高， 隨著病變程度的增加， 其陽性表達率明顯下降。SCC組中MMP-2陽性表達率最高， 隨著病變程度的增加， 其陽性表達率明顯增加經相關性結果分析顯示宮頸病變中HPV L1殼蛋白和MMP-2表達呈負相關（P<0.05）。結論 HPV L1殼蛋白陽性表達率隨著宮頸病變的演變及發展而呈降低趨勢， MMP-2陽性表達率隨著宮頸病變的演變及發展而呈增加趨勢。聯合二者在宮頸病變的發生發展中具有一定意義， 可作為宮頸癌前病變進展的生物學標志物。

【關鍵詞】 人乳頭狀瘤病毒L1殼蛋白；MMP-2；宮頸上皮內瘤變；鱗狀細胞癌；免疫組化

宮頸上皮內瘤變（CIN）反映了子宮頸癌發生發展中的連續過程， 通過篩查發現CIN， 及時治療高級別病變， 是預防子宮頸癌行之有效的措施[1]。研究已表明， 生殖道感染人乳頭瘤病毒（HPV）是婦女宮頸癌和癌前病變的主要危險因素， HPV L1殼蛋白是HPV 感染復制早期所必須的結構蛋白， 故可通過檢測HPV L1殼蛋白來研究HPV感染狀態。細胞外基質（ extracellular matrix， ECM） 降解對于腫瘤的浸潤轉移和血管生成至關重要。基質金屬蛋白酶（ MMPs） 是降解ECM 的重要酶類， MMP-2可能在宮頸癌細胞增殖、血管生成、浸潤轉移等過程中發揮重要作用。本研究通過免疫組化檢測HPV L1蛋白及MMP-2在不同宮頸病變過程的表達情況， 探討其在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌發展中的相關性。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 入選2010年9月～2013年9月許昌市中心醫院手術治療的宮頸疾病患者121例， 術前HPV-DNA均為陽性， 其中宮頸鱗狀細胞癌（SCC）30例、CIN 58例（其中CIN I、CINⅠ、CINⅢ分別為18例、19例、21例）， 正常宮頸33例（因子宮良性病變而行子宮全切除標本， 術前宮頸外觀正常， 術后病理診斷為宮頸炎標本）。所有患者均無宮頸錐切、子宮切除、放化療史。

1. 2 方法 MMP-2及HPV L1檢測法應用鏈霉素親生物素-過氧化物酶法（SP法）進行檢測。

1. 3 試劑 HPV L1鼠抗人單克隆抗體購自賽泰公司， SP試劑盒及DAB酶底物顯色劑等均購自福州邁新生物技術開發有限公司。兔抗人MMP-2抗體購自北京博奧森科技實業有限公司。

1. 4 判斷和評估標準 MMP-2結果按照以下評判標準[2]進行半定量判斷：兩位病理醫師專家各自獨立觀察隨機每例切片隨機選取10個高倍視野進行結果判定。按染色強度及陽性細胞數所占百分比綜合計分。即：0分為陽性細胞數<5%， 1分為5%～25%， 2分為 26%～50%， 3分為51%～75%， 4分為>75% 。按著色強度記分：1分為染色呈淡黃色， 2分為染色呈黃色， 3分為染色呈棕黃色。兩種記分的乘積即為陽性強度：0分為陰性（-）， 1～4分為弱陽性（+）， 5～8分為中度陽性（++）， 9～12分為強陽性（+++）。有一個被染色的細胞核呈紅色即認為HPV L1 殼蛋白表達呈陽性。

1. 5 統計學方法 采用 SPSS18.0統計軟件進行統計處理。計數資料采用χ2檢驗和Fishers 確切概率法， 相關分析使用單因素直線相關分析， P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2. 1 HPV L1殼蛋白和MMP-2在不同宮頸病變組織中的表達 HPV L1殼蛋白在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組陽性表達分別為69.69%（23/33）、83.33% （15/18）、36.84%（7/19）、4.70%（1/21）、0（0/30）。CIN中為37.93%（23/58）。除了CINⅢ與SCC比較差異無統計學意義（P>0.05）外， 其他不同宮頸病變間比較， 差異有統計學意義（P<0.05）；MMP-2 在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組的陽性表達分別為6.06%（2/33）、33.33%（6/18）、57.89%（11/19）、66.66%（14/21）、76.66%（23/30）， CIN中53.44%（31/58）。正常組織中MMP-2 的陽性率明顯低于CIN組及SCC組。MMP-2 在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2. 2 HPV L1 殼蛋白和MMP-2的相關性 CIN I組中HPV L1蛋白陽性表達率最高， 隨著病變程度的增加， 其陽性表達率明顯下降。SCC組中MMP-2陽性表達率最高， 隨著病變程度的增加， 其陽性表達率明顯增加經相關性結果分析顯示宮頸病變中HPV L1殼蛋白與MMP-2表達呈負相關（P<0.05）， 見表2。endprint

3 討論

宮頸癌是婦科常見腫瘤之一， 有年輕化的趨勢， 主要源于對婦女進行有效的宮頸篩查和癌前病變的早期診斷， 宮頸癌的5 年生存率在90%以上， 因此有效地預測宮頸癌的早期病變即可通過早期干預降低宮頸癌的死亡率[3]。

目前已證實高危型HPV感染是宮頸癌發生的重要原因。近年感染HPV的有效評估指標為L1蛋白， 宮頸惡變程度的增高， HPV L1蛋白陽性表達率降低。Lee H等[4]則提出宿主病毒相互干擾學說， 即隨著CIN分度的升高甚則惡變， 可缺失L1殼蛋白。HPV L1殼蛋白陰性提示感染HPV具有進展性， 出現宮頸癌或CIN的高發病率。作者的研究表明隨著宮頸病變級別的增高， HPV L1殼蛋白在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌陽性表達逐漸減少， 差異具有統計學意義（P<0.05）， 同相關研究一致。

基質金屬蛋白酶（MMPs）是降解ECM 的重要酶類。MMP-2為MMPs家族成員， 推測 MMP-2的陽性表達提示， 腫瘤細胞擁有侵襲、轉移的能力， 細胞就具有惡性侵略的特性[5]。滕燕伊等[6]采用免疫組化研究顯示：MMP-2在宮頸癌中的表達高于CIN及正常宮頸組織， 并認為 MMP-2是早期腫瘤的標志。作者的研究表明MMP-2 在正常宮頸組、CIN 組、SCC組的陽性表達分別為6.06%（2/33）、53.44%（31/58）、76.66%（23/30）， 正常組織中MMP-2的陽性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統計學意義（P<0.05）， 同相關研究一致；作者同時檢測HPV L1殼蛋白和MMP-2的表達顯示兩者在宮頸病變的發生發展過程中具有負相關， 提示兩者聯合能用于宮頸癌的早期診斷、預后判斷及術后早期復發轉移的隨訪監測， 但仍需多中心研究結論。

綜上所述， 通過對不同宮頸組織中HPV L1蛋白與MMP-2的免疫組化測定表明：HPV Ll蛋白表達隨著宮頸病變程度的加重而下降；MMP-2隨著宮頸病變程度的加重而增加。因此， 作者推測HPV L1蛋白與MMP-2在宮頸病變的發生發展中具有一定意義， 可以幫助了解宮頸的病變程度， 預測宮頸病變的發展趨勢。

參考文獻

[1] 謝幸.婦產科學.第8版.北京：人民衛生出版社， 2013：301-302.

[2] 朱華， 施錚錚， 楊孝軍， 等. Survivin、Bcl-2、HPV 16 /18在宮頸上皮內瘤變及宮頸癌中的表達及臨床意義.實用婦產科雜志， 2010， 26 （1）：57.

[3] 陳恒禧， 甘曉玲， 傅璟. HPV L1 檢測預測宮頸鱗狀上皮內病變預后的意義.現代婦產科進展， 2009， 18（11）：865.

[4] Lee H， Lee KJ， Jung CK， et al. Expression of HPVL1 capsid protein in cervical specimens with HPV infection. Diagn Cytopathol， 2008， 36（12）：864.

[5] Banerji A， Chakrabarti J， Mitra A， et al. Cell menbrane-associated MT1-MMP-dependent activation of pro-MMP-2 in A375 melanoma cells. J Env Path Tox Oncol， 2005， 24（1）：3-17.

[6] 滕燕伊， 劉曉云， 鄭洪， 等. Ki-67、MMP-7、MMP-2 在宮頸 CIN 和宮頸癌中的表達及意義.重慶醫科大學學報， 2010， 35（7）：989-991.

[收稿日期：2014-04-11]endprint

3 討論

宮頸癌是婦科常見腫瘤之一， 有年輕化的趨勢， 主要源于對婦女進行有效的宮頸篩查和癌前病變的早期診斷， 宮頸癌的5 年生存率在90%以上， 因此有效地預測宮頸癌的早期病變即可通過早期干預降低宮頸癌的死亡率[3]。

目前已證實高危型HPV感染是宮頸癌發生的重要原因。近年感染HPV的有效評估指標為L1蛋白， 宮頸惡變程度的增高， HPV L1蛋白陽性表達率降低。Lee H等[4]則提出宿主病毒相互干擾學說， 即隨著CIN分度的升高甚則惡變， 可缺失L1殼蛋白。HPV L1殼蛋白陰性提示感染HPV具有進展性， 出現宮頸癌或CIN的高發病率。作者的研究表明隨著宮頸病變級別的增高， HPV L1殼蛋白在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌陽性表達逐漸減少， 差異具有統計學意義（P<0.05）， 同相關研究一致。

基質金屬蛋白酶（MMPs）是降解ECM 的重要酶類。MMP-2為MMPs家族成員， 推測 MMP-2的陽性表達提示， 腫瘤細胞擁有侵襲、轉移的能力， 細胞就具有惡性侵略的特性[5]。滕燕伊等[6]采用免疫組化研究顯示：MMP-2在宮頸癌中的表達高于CIN及正常宮頸組織， 并認為 MMP-2是早期腫瘤的標志。作者的研究表明MMP-2 在正常宮頸組、CIN 組、SCC組的陽性表達分別為6.06%（2/33）、53.44%（31/58）、76.66%（23/30）， 正常組織中MMP-2的陽性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統計學意義（P<0.05）， 同相關研究一致；作者同時檢測HPV L1殼蛋白和MMP-2的表達顯示兩者在宮頸病變的發生發展過程中具有負相關， 提示兩者聯合能用于宮頸癌的早期診斷、預后判斷及術后早期復發轉移的隨訪監測， 但仍需多中心研究結論。

綜上所述， 通過對不同宮頸組織中HPV L1蛋白與MMP-2的免疫組化測定表明：HPV Ll蛋白表達隨著宮頸病變程度的加重而下降；MMP-2隨著宮頸病變程度的加重而增加。因此， 作者推測HPV L1蛋白與MMP-2在宮頸病變的發生發展中具有一定意義， 可以幫助了解宮頸的病變程度， 預測宮頸病變的發展趨勢。

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宮頸癌是婦科常見腫瘤之一， 有年輕化的趨勢， 主要源于對婦女進行有效的宮頸篩查和癌前病變的早期診斷， 宮頸癌的5 年生存率在90%以上， 因此有效地預測宮頸癌的早期病變即可通過早期干預降低宮頸癌的死亡率[3]。

目前已證實高危型HPV感染是宮頸癌發生的重要原因。近年感染HPV的有效評估指標為L1蛋白， 宮頸惡變程度的增高， HPV L1蛋白陽性表達率降低。Lee H等[4]則提出宿主病毒相互干擾學說， 即隨著CIN分度的升高甚則惡變， 可缺失L1殼蛋白。HPV L1殼蛋白陰性提示感染HPV具有進展性， 出現宮頸癌或CIN的高發病率。作者的研究表明隨著宮頸病變級別的增高， HPV L1殼蛋白在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌陽性表達逐漸減少， 差異具有統計學意義（P<0.05）， 同相關研究一致。

基質金屬蛋白酶（MMPs）是降解ECM 的重要酶類。MMP-2為MMPs家族成員， 推測 MMP-2的陽性表達提示， 腫瘤細胞擁有侵襲、轉移的能力， 細胞就具有惡性侵略的特性[5]。滕燕伊等[6]采用免疫組化研究顯示：MMP-2在宮頸癌中的表達高于CIN及正常宮頸組織， 并認為 MMP-2是早期腫瘤的標志。作者的研究表明MMP-2 在正常宮頸組、CIN 組、SCC組的陽性表達分別為6.06%（2/33）、53.44%（31/58）、76.66%（23/30）， 正常組織中MMP-2的陽性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較， 三組間差異有統計學意義（P<0.05）， 同相關研究一致；作者同時檢測HPV L1殼蛋白和MMP-2的表達顯示兩者在宮頸病變的發生發展過程中具有負相關， 提示兩者聯合能用于宮頸癌的早期診斷、預后判斷及術后早期復發轉移的隨訪監測， 但仍需多中心研究結論。

綜上所述， 通過對不同宮頸組織中HPV L1蛋白與MMP-2的免疫組化測定表明：HPV Ll蛋白表達隨著宮頸病變程度的加重而下降；MMP-2隨著宮頸病變程度的加重而增加。因此， 作者推測HPV L1蛋白與MMP-2在宮頸病變的發生發展中具有一定意義， 可以幫助了解宮頸的病變程度， 預測宮頸病變的發展趨勢。

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[4] Lee H， Lee KJ， Jung CK， et al. Expression of HPVL1 capsid protein in cervical specimens with HPV infection. Diagn Cytopathol， 2008， 36（12）：864.

[5] Banerji A， Chakrabarti J， Mitra A， et al. Cell menbrane-associated MT1-MMP-dependent activation of pro-MMP-2 in A375 melanoma cells. J Env Path Tox Oncol， 2005， 24（1）：3-17.

[6] 滕燕伊， 劉曉云， 鄭洪， 等. Ki-67、MMP-7、MMP-2 在宮頸 CIN 和宮頸癌中的表達及意義.重慶醫科大學學報， 2010， 35（7）：989-991.

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