EDTA依賴性假性血小板減少癥檢測方法的探討

馬力?張靜?韓志梅?曲東霞

【摘要】 目的 探討乙二胺四乙酸（EDTA）依賴性假性血小板減少癥幾種檢測方法的可靠性。方法 對10例EDTA依賴性假性血小板減少癥病例采用XE-2100血液分析儀， 觀察不同條件（不加抗凝劑、EDTA、枸櫞酸鈉、肝素鋰）在不同時間段測定血小板的變化。結果 5 min即刻檢測， 各種抗凝劑血小板數值均正常。30 min后EDTA抗凝標本血小板數值明顯下降。部分枸櫞酸鈉、肝素鋰標本血小板數值也有不同程度下降。結論 對EDTA依賴性假性血小板減少癥可采取儀器旁即刻檢測方法， 而枸櫞酸鈉、肝素鋰檢測方法不可取。

【關鍵詞】 乙二胺四乙酸；血小板計數；血細胞分析；假性血小板減少癥

假性血小板減少是指血小板發生體外聚集而致血小板減少。由于血小板聚集成團， 使血細胞自動計數儀無法分辨血小板團與單個血小板， 致使檢測的血小板計數較實際血小板數值低出許多， 導致臨床誤診誤治。據報道， 假性血小板減少與抗凝劑乙二胺四乙酸（EDTA）有明顯相關性[1]。因為國際血液學標準化委員會（ICSH）1993年確定EDTA為血細胞分析的首選抗凝劑并廣泛應用， 因此EDTA依賴性假性血小板減少癥（ethylenediaminetetraacetic acid-dependent pseudo-thrombocytopenia， EDTA-PTCP）發生率明顯增加。本研究旨在探討不同抗凝劑不同時間段條件下， 糾正EDTA-PTCP血小板檢測的最佳方法， 為減少該病誤診誤治做出一點貢獻。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 患者標本來源于本院2005～2014年門診與住院患者診斷EDTA依賴性假性血小板減少癥的10例患者。其中男6例， 女4例， 發病年齡：20～75歲， 其中4例為門診常規體檢就診， 3例原發性高血壓， 1例冠心病， 1例左輸尿管結石， 1例左腎癌術后。10例患者均為常規血細胞分析檢查發現血小板明顯減少， 但均無臨床出血傾向。白細胞、血紅蛋白、凝血指標均正常。經即刻采血及外周血涂片檢查明確診斷為EDTA-PTCP。

1. 2 儀器與試劑 Sysmex-2100型全自動血液分析儀及配套試劑和質控品。

1. 3 方法 采患者靜脈血， 分別置于無任何抗凝劑管、EDTA抗凝管、枸櫞酸鈉抗凝管、肝素鋰抗凝管內， 分別于5、30、60、120 min用Sysmex-2100型分析儀檢測血小板數值。

1. 4 血涂片 EDTA抗凝血（30、120 min）、患者新鮮耳血涂片各1張自然晾干， 用瑞-姬氏染色， 顯微鏡觀察血小板聚集情況。

2 結果

2. 1 不同時間， 4種方法測定血小板計數 5 min即刻儀器旁檢測：不加抗凝劑組， EDTA組， 枸櫞酸鈉組， 肝素鋰組均顯示血小板計數正常。（30～120 min） EDTA組血小板均減少， 并且隨時間延長血小板減少程度增加。例4在枸櫞酸鈉、肝素鋰組30、60、120 min均出現血小板減少， 例6在枸櫞酸鈉組（60、120 min）出現血小板減少。例10在肝素鋰組（30、60、120 min）出現血小板減少。見表1。

2. 2 血涂片檢查 所有病例新鮮耳血涂片均可見血小板散在或小簇狀易見。EDTA 30 min時涂片可見體尾部血小板簇狀聚集， 片尾部呈小片狀聚集。120 min后涂片血小板在片尾部均可見大片狀聚集。

3 討論

文獻報道EDTA-PTCP的發病率約為0.07%～0.21%[1]， 且隨著EDTA抗凝劑在血常規檢查中的廣泛應用， 發病率呈逐年上升趨勢。EDTA-PTCP的發生原因可能與以下機制有關：抗體介導的血小板聚集；血小板衛星現象；抗磷脂抗體[2]等。已證實大多數假性血小板減少的患者抗血小板抗體作用靶點是GPIIb/IIIa[3]。正常情況下， 血小板膜抗原表位隱藏在血小板膜GPIIb的亞單位中， 而鈣離子螯合劑改變GPIIb/IIIa的分子構象， 引起血小板膜糖蛋白的暴露及分子修飾， 進而被抗血小板抗體識別， 結合， 引起血小板聚集。

據文獻報道[4， 5]， 初步懷疑EDTA-PTCP的患者， 許多醫院喜歡換用枸櫞酸鹽抗凝劑或肝素抗凝劑重新檢測。EDTA是最常見的鈣離子螯合劑， 可以引起EDTA-PTCP。而其他弱的鈣離子螯合劑抗凝劑如枸櫞酸鹽類也可以引起血小板體外聚集成團， 導致假性血小板減少。另外肝素能引起血小板聚集及腫脹， 在計數時， 由于其體積較大， 會被儀器誤認為其他細胞而導致血小板減少。本研究20%的病例（每組2例）經枸櫞酸鹽、肝素抗凝后， 血小板數值均有不同程度的下降。與胡先泳等[6]報道相符。因此， 作者認為對于懷疑EDTA-PTCP患者， 不應更換枸櫞酸鹽或肝素類抗凝劑再次檢測， 而應該用不加任何抗凝劑管的全血做儀器旁即刻檢測， 則血小板數值比較準確。

EDTA-PTCP可見于許多疾病[7-9]， 如高血壓、高血脂、糖尿病、自身免疫性疾病、肝病、腫瘤、膿毒血癥， 隨著病情控制， 血小板可逐漸恢復正常， 也可見于正常人。鄺妙歡等[8]報道， 腫瘤患者中EDTA-PTCP發生與性別、合并常見病、腫瘤類型、治療方式可能無關。本研究中10例EDTA-PTCP患者患有心臟病、腫瘤等疾病， 也有正常人， 同時無性別差異， 與上述報道相符。

將EDTA-PTCP的血液制品輸給受血者， 后者血小板仍可獲得滿意提升[10]， 證明EDTA-PTCP的良性病程。因此， EDTA-PTCP本身無臨床意義， 關鍵要盡早診斷， 將其與其他血小板減少進行鑒別， 避免不必要的檢查與治療。文獻報道中對多例EDTA-PTCP患者行骨髓穿刺檢查， 予血小板輸注， 甚至予大劑量糖皮質激素沖擊治療， 增加患者的身心痛苦及經濟負擔。因此接診一個血小板明顯減少的患者， 應仔細詢問病史及查體， 如皮膚有無瘀點、瘀斑， 有無臨床出血表現， 臨床表現與血小板減少程度是否相符等。如臨床無出血表現， 而血小板減少明顯者， 需要考慮EDTA-PTCP的診斷。endprint

最后建議臨床上對無任何出血傾向而血小板減少明顯患者， 采取以下應對措施：①警惕EDTA-PTCP的發生， 避免臨床誤診誤治。②疑似EDTA-PTCP患者可在儀器旁， 即刻采血直接行血小板計數。不建議更換枸櫞酸鹽或肝素抗凝劑重復采血。③血常規做涂片染色， 加EDTA抗凝劑者可見片尾大量血小板聚集， 不加抗凝劑者可見血小板散在或小堆簇狀存在。

參考文獻

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[10] Sweeney JD， Holme S， Heaton WA， et al. pseudothrombocytopenia in plateletpheresis donors. Transfusion ， 1995（35）：46-50.

[收稿日期：2014-05-06]endprint

最后建議臨床上對無任何出血傾向而血小板減少明顯患者， 采取以下應對措施：①警惕EDTA-PTCP的發生， 避免臨床誤診誤治。②疑似EDTA-PTCP患者可在儀器旁， 即刻采血直接行血小板計數。不建議更換枸櫞酸鹽或肝素抗凝劑重復采血。③血常規做涂片染色， 加EDTA抗凝劑者可見片尾大量血小板聚集， 不加抗凝劑者可見血小板散在或小堆簇狀存在。

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[收稿日期：2014-05-06]endprint

最后建議臨床上對無任何出血傾向而血小板減少明顯患者， 采取以下應對措施：①警惕EDTA-PTCP的發生， 避免臨床誤診誤治。②疑似EDTA-PTCP患者可在儀器旁， 即刻采血直接行血小板計數。不建議更換枸櫞酸鹽或肝素抗凝劑重復采血。③血常規做涂片染色， 加EDTA抗凝劑者可見片尾大量血小板聚集， 不加抗凝劑者可見血小板散在或小堆簇狀存在。

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[收稿日期：2014-05-06]endprint