不同醇沉濃度板藍根浸膏粉中多糖寡糖含量測定

★ 曾金娣 劉微 謝茵 羅曉健

(1.江西中醫藥大學 江西 南昌 330006；2.中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心 江西 南昌 330006)

板藍根(Isatidis root),別名靛青根、藍靛根、靛根[1]，是十字花科植物菘藍(IsatistinctoriaL.)的干燥根,味苦性寒，具有清熱解毒、涼血利咽的功能,臨床上廣泛用于病毒性疾病及細菌性感染疾病的治療。板藍根中含有較多的多糖，它具有多種生物活性,對特異性免疫和非特異性免疫均有一定的促進作用,是一種比較理想的免疫增強劑[2-6]。

本實驗以板藍根不同醇沉濃度噴霧干燥粉為模型藥物，考察了不同醇沉濃度對其多糖寡糖含量的影響，為后續深入研究板藍根不同醇沉噴霧干燥粉的吸濕性及噴霧干燥工藝研究提供依據。

1 材料與儀器

苯酚(AR，西隴化工股份有限公司)；硫酸(AR，蘇州市晶協高薪電子材料有限公司)；葡萄糖(AR，西隴化工股份有限公司)；蒸餾水;自制板藍根不同醇沉濃度噴霧干燥粉。

UV-2550島津分光光度計(UVProbe工作站)；MAPADA紫外可見分光光度計();BSA2245型分析天平(SARTORIPUS);恒溫震蕩儀(國華企業SHZ-82)；無水乙醇(AR);自制板藍根不同醇沉濃度噴霧干燥粉。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的葡萄糖對照品10mg，置100mL容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得0.1 mg/mL葡萄糖對照品溶液。

2.2 浸膏粉多糖與寡糖供試液的制備 精密稱取真空干燥12h的中藥水提浸膏粉200mg及不同醇沉濃度浸膏粉60mg，分別置具塞錐形瓶中，加8mL蒸餾水置超聲儀中超聲15min，充分溶解，加入乙醇使含醇量達到80%，置于55℃恒溫震蕩儀中震蕩1h，冷卻過濾，濾液備用。濾渣溶于60℃蒸餾水中，震蕩1h，冷卻過濾，濾液定容至50mL，即為各浸膏粉的多糖供試液；備用濾液置于蒸發皿中，揮干乙醇，加蒸餾水溶解，60℃水浴中溶解1 h，冷卻過濾，濾液以蒸餾水定容至250mL為寡糖儲備液。精密量取水提浸膏粉寡糖儲備液5mL，以蒸餾水定容至50mL即為水提浸膏粉寡糖供試液。精密量取不同醇沉浸膏粉寡糖儲備液各5mL，定容至10mL，即為各不同醇沉濃度浸膏粉的寡糖供試液。

2.3 5%苯酚溶液的配制 稱取苯酚100g，加鋁片0.1g和碳酸鈉0.05g，常壓蒸餾，收集182℃餾分。精密稱取該餾分(100%苯酚)5g，置100mL容量瓶中，以蒸餾水定容至刻度，搖勻后，置棕色試劑瓶中，冷藏儲存備用。

2.4 最大吸收波長的確定 精密量取1mL標準葡萄糖溶液，精密加入5%苯酚溶液1mL，搖勻，精密加入硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱20min，置冰浴中冷卻5min，放置至室溫，以相應試劑為空白，在UV-2550島津分光光度計上掃描400～600nm之間的吸光度，檢測其最大吸收波長為486nm，以此波長吸收作為本法的吸收波長。

2.5 標準曲線的繪制 分別精密量取對照品溶液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.8，0.9，1.0mL，分別置10mL具塞試管中，加水補至1.0mL，精密加入5%苯酚溶液1mL，搖勻，精密加入硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱20min，置冰浴中冷卻5min，室溫放置20min，以相應試劑為空白，于486nm波長處測定其吸光度。以吸光度為縱坐標，無水葡萄糖含量為橫坐標，繪制標準曲線。以吸光度A對無水葡萄糖含量進行線性回歸，得葡萄糖標準曲線方程為：Y=0.0098X-0.0409(r=0.9997),表明無水葡萄糖在19.44～97.20μg范圍內有良好的線性關系。

2.6 精密度試驗 分別精密稱取標準品0.5mL各6份，依次添加水使終體積為1.0mL分別按2.6項下測定含量，連續測定6次，計算相對標準偏差(RSD)，RSD=0.677%<2%，說明該方法精密度良好。

2.7 重復性試驗 按2.2項下"浸膏粉多糖和寡糖供試液的制備"平行制備同一浸膏粉多糖樣品6份，測定其吸光度，并計算多糖含量，測得樣品中多糖含量分別為：3.52%，3.54%，3.49%，3.70%，3.54%和3.57%，平均含量為3.56%，RSD為3.3%，說明該含量測定方法重復性良好。

2.8 穩定性試驗 精密吸取供試品1.0mL，按照2.5項下方法，分別在0，10，20，30，50，60min時進行測定，記錄吸光度，得到葡萄糖的吸光度值分別為：0.664，0.663，0.659，0.657，0.658，0.657和0.658，RSD為0.29%。表明供試品溶液在60min內穩定。

2.9 加樣回收率試驗 按照2.2項下制備多糖儲備液及寡糖儲備液，分別加入3個濃度水平標準葡萄糖適量,加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻,按多糖含量測定方法計算多糖寡糖含量，測得多糖平均回收率為100.75%,RSD為1.74%，寡糖平均回收率為100.24%,RSD為1.89%(n=6)。

2.10 樣品含量測定 精密量取同批1mL供試品溶液，精密加入5%苯酚溶液1mL，搖勻，精密加入硫酸5mL，搖勻，置沸水浴中加熱20min，置冰浴中冷卻5min，室溫放置20min，以相應試劑為空白，測定其吸光度，計算中藥浸膏粉中多糖和寡糖的含量，結果見表1。

表1 板藍根不同醇沉濃度下多糖寡糖含量

多糖是一類大分子物質，更易被沉淀出來，隨著醇沉濃度的增大，多糖所占含量比重減少，而寡糖多是小分子類物質，不會被醇沉淀出來，其成分含量所占比重增大。

3 結論

通過測定板藍根不同醇沉濃度浸膏粉多糖寡糖含量的結果看,用本文所確定的苯酚-硫酸法于490nm波長處測定其吸光度，其標準曲線好,回收率高,多糖含量測定結果穩定,重復性高,可以作為多糖含量測定方法。隨著醇沉濃度的增大，多糖含量減小，寡糖含量增大。

[1]張體祥,李艷福,劉捷,等.板藍根多糖的分離純化及其單糖組成的研究[J].河南工程學院學報(自然科學版),2009,21(3):13.

[2]儲岳峰.九種中藥成分的免疫增強活性及其作用機理研究[D].南京:南京農業大學,2003.

[3]王元梁.南、北板藍根的異同[J].海峽藥學,2003,15(5):86.

[4]肖珊珊,金郁,孫毓慶.板藍根化學成分、藥理及質量控制研究進展[J].沈陽藥科大學學報,2003,20(6):455-459.

[5]徐晗,方建國,劉云海.板藍根最新研究進展[J].中草藥,2003,34(4):10-11.

[6]梁永紅,侯華新,黎丹戎,等.板藍根二酮B體外抗癌活性研究[J].中草藥,2000,31(7):531-533.