正交試驗優選復方連芩凝膠提取工藝*

★ 胡鳳鳴 丁志軍 羅美蘭 廖銀根

(江西省皮膚病專科醫院 江西 南昌 330001)

復方連芩凝膠系江西省皮膚病專科醫院中醫科專家多年臨床總結經驗方，由黃連、黃芩、苦參、黃柏、地膚子、紫草和蛇床子等7味中藥組成，具有瀉火解毒、除濕的功效，臨床上主要用于治療濕疹、皮炎等風熱、濕熱之皮膚病。為了將復方連芩煎劑更好地應用于臨床，我院研究開發出攜帶和使用均方便的復方連芩凝膠劑，并對其制備工藝進行了研究。

1 儀器與試藥

Agilent 1200 高效液相色譜(HPLC)系統(美國安捷倫科技有限公司)；CP225D微量天平(德國Sartorius 公司)；KQ-500E醫用超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。

鹽酸小檗堿、黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110713-201212、110715-201117)；黃連、黃芩、黃柏飲片(安徽致和堂藥業有限公司，批號分別為120618，111209，120107)；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 評價指標的確定 復方連芩凝膠處方中有多味藥材，有效成分眾多，根據文獻和藥材實驗結果，選取君藥黃連、臣藥黃柏的有效成分鹽酸小檗堿及另一臣藥黃芩中有效成分黃芩苷含量作為優選工藝的考察指標，符合配方及工藝的特點。

2.2 鹽酸小檗堿和黃芩苷的含量測定

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A、0.05 mol/L磷酸二氫鉀為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫，檢測波長為278 nm，流速為1.0 mL/min；柱溫為20 ℃；進樣量為5 μL。

時間/min流動相A/%流動相/B0-920809-403367

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿、黃芩苷對照品適量，加流動相溶解，制成每1 mL分別含50 μg、60 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密量取提取濃縮液1 mL，置具塞錐形瓶中，精密加入75%乙醇50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率：250 W，頻率：33 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用75%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按處方比例，稱取本處方中除黃連、黃芩、黃柏外的各味藥材，分別加10倍水，煎煮兩次，每次1 h，減壓濃縮，定容至1000 mL，按上述供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

2.2.5 測定法 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各5 μL，注入液相色譜儀測定其峰面積，計算鹽酸小檗堿、黃芩苷含量。液相色譜圖見圖1。

A.對照品；B.供試品；C.陰性對照品

2.3 藥材飲片中有效成分的含量測定

2.3.1 黃連藥材飲片中鹽酸小檗堿的含量測定[1]稱取黃連飲片粉末(過二號篩)約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸(100∶1)的混合溶液50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。按中國藥典2010年版一部黃連含量測定項下方法進樣，測得黃連飲片中鹽酸小檗堿含量為6.12%。

2.3.2 黃柏藥材飲片中鹽酸小檗堿的含量測定[1]取本品粉末(過三號篩)約0.1 g，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相80 mL，超聲處理40min，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。按中國藥典2010年版一部黃柏含量測定項下方法進樣，測得黃柏飲片中鹽酸小檗堿含量為4.36%。

2.3.3 黃芩藥材飲片中黃芩苷的含量測定[1]取本品中粉約0.3 g，精密稱定，加70%乙醇40 mL，加熱回流3h，放冷，濾過，濾液置100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘渣，洗液濾入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。按中國藥典2010年版一部黃芩含量測定項下方法進樣，測得黃芩飲片中黃芩苷含量為9.86%。

2.4 正交試驗優選提取工藝

2.4.1 試驗設計 通過預試驗對影響水煎煮的各因素進行考察，選擇加水量(A)、提取時間(B)、提取次數(C)為影響水煎煮的主要因素，每個因素選取3個水平。因素水平見表1。

表1 因素水平表

2.4.2 正交試驗安排及結果 按處方比例稱取黃連、黃芩、黃柏等藥材72 g，共9份，根據L9(34)正交試驗設計表，將藥材浸泡0.5 h后提取。提取完畢后，將不同條件下的水提液分別濃縮至適量，定容至1000 mL，稱定重量，備用。以鹽酸小檗堿、黃芩苷轉移率為評價指標進行試驗。正交試驗結果見表2；方差分析結果見表3。

表2 正交試驗結果

表3 方差分析結果

由表2、表3可知，以鹽酸小檗堿為評價指標，A因素有顯著性影響，各因素的影響順序為A>C>B，以A3B1C2最佳；以黃芩苷轉移率為評價指標時，A因素有顯著性影響，各因素影響順序為A>C>B，以A2B1C3最佳。考慮到節約能源，降低成本，從而得到最佳工藝為A2B1C2，即加10倍量水，提取2次，每次1 h。

2.5 工藝驗證試驗 為了驗證正交試驗結果的準確性，以確保提取工藝合理可行，按上述工藝條件A2B1C2，重復安排3批試驗。結果，鹽酸小檗堿、黃芩苷平均轉移率分別為69.5%、71.2%，與正交試驗較好的結果相近，表明優選的工藝合理、可行。

3 討論

在測定指標成分含量時，以HPLC同時測定復方連芩凝膠提取液中鹽酸小檗堿、黃芩苷含量，對其方法學進行了考察，分離效果理想，重現性好，考慮到本文主要報道提取工藝研究，故暫未將其列入正文。

采用正交設計，并根據預試驗，確定了水提工藝的最佳條件，即稱取水提取部分藥材，加入藥材量10倍體積的水，加熱提取2次，每次1 h，其中第1次提取前先將藥材浸泡0.5 h。

由于黃芩藥材中含有多種酶，主要是黃芩酶，在一定的溫度、濕度條件下，能使苷水解，黃芩酶遇冷水后活性增大，因此，黃芩應在水沸后加入。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:282、285、286.