乙酰肝素酶蛋白表達與肝癌侵襲轉移關系的研究

干惠珠，張學文，孫步彤，王世寶

(吉林大學中日聯誼醫院 1.腫瘤血液科；2.肝膽外科，吉林 長春130033)

乙酰肝素酶(heparanase，HPSE)是一種葡糖苷酸內切酶，能特異性降解硫酸肝素多糖的硫酸肝素側鏈，破壞細胞外基質和基底膜，乙酰肝素酶與腫瘤血管形成、侵襲轉移密切相關。我們采用免疫組織化學法檢測HPSE蛋白在肝細胞肝癌、癌旁肝組織及正常肝組織中的表達，探討HPSE蛋白與肝癌臨床病理特征的關系。

1 臨床資料

1.1一般資料收集2012年1月-2013年12月在我院手術切除并經病理學檢查證實的70例肝細胞肝癌和癌旁組織標本，癌旁組織為距腫瘤2 cm處肝組織。另取手術切除的肝臟良性疾病的正常肝組織20例作正常對照。本組病例男性50例，女性20例；年齡35-70歲，平均52.5歲；癌灶長徑≤5 cm 45例，>5 cm 25例；甲胎蛋白(AFP) 陽性55例、陰性15例；高轉移復發組：有癌栓、肝內播散即衛星癌灶和(或) 淋巴結轉移的30例，低轉移復發組：無癌栓、無肝內衛星癌灶和(或) 淋巴結轉移的40例；高分化20例，中分化28例，低/未分化22例，癌灶包膜完整38例、不完整32例；肝癌BCLC臨床分期極早期、早期45例、中晚期25 例。肝臟良性腫瘤20例中男性12例，女性8例；年齡30-60歲，平均45歲，其中肝血管瘤16例、肝局灶性結節性增生4例。

1.2免疫組織化學染色方法及結果判定標本常規甲醛固定取材、脫水、石蠟包埋后做4 μm連續切片，按SP 免疫組織化學染色試劑盒染色步驟進行，用已知的陽性切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。HPSE染色陽性為胞漿呈棕黃色顆粒，在光鏡下觀察5 個高倍視野，計算陽性細胞數，陽性細胞數≤10%為陰性表達，>10%為陽性表達。

1.3統計學處理采用t檢驗及χ2檢驗，由SPSS11.5軟件進行統計學分析。

2 結果

2.1HPSE蛋白在肝癌組織中的表達免疫組織化學染色顯示乙酞肝素酶HPSE主要表達在肝癌細胞的胞質，胞膜亦有表達，棕黃色，呈散在、片狀或灶狀分布。70例肝癌組織HPSE蛋白表達陽性率58.5%(41/70)，癌旁組織HPSE蛋白表達陽性率8.6%(6/70)，正常肝組織表達陽性率5.0%(1/20)；肝癌與癌旁組織、正常肝組織的HPSE蛋白表達差異有顯著性(P<0.05)。

2.2HPSE蛋白表達與肝癌臨床病理特征的關系肝癌組織中HPSE蛋白表達與患者的性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、甲胎蛋白(AFP)值均無顯著相關性(P>0.05)，而與腫瘤包膜受侵、肝內和(或)淋巴結轉移、BCLC臨床分期有關(P<0.05)(表1)。

表1 HPSE表達與肝細胞癌臨床病理特征的關系

3 討論

乙酰肝素酶基因是1999年克隆鑒定的新基因，是一種葡糖苷酸內切酶[1]。HPSE 通過破壞細胞外基質和細胞基底膜組成的天然屏障，促進腫瘤細胞向周圍浸潤、擴散，并抑制免疫監視，實現腫瘤細胞向遠處轉移[2-4]。研究表明，乙酰肝素酶是腫瘤發生、浸潤和轉移過程中的關鍵酶之一，乙酰肝素酶在轉移的惡性腫瘤中普遍存在，并且在肝癌、結腸癌、乳腺癌高轉移腫瘤細胞中高表達[5,6]。

本研究檢測70 例肝細胞肝癌標本HPSE蛋白的表達情況，45例肝癌組織中HPSE蛋白表達陽性，占總數的64.2 %；結果顯示，肝癌組織HPSE蛋白的表達顯著高于癌旁肝組織及正常肝組織(P<0.05)，與文獻報道一致。HPSE 表達與肝癌的包膜受侵、肝內和(或)淋巴結轉移以及BCLC臨床分期有關。HPSE表達在高轉移復發傾向組和低轉移復發傾向組表達率有明顯差異，初步表明乙酰肝素酶與肝癌侵襲轉移相關，在轉移復發組和無轉移復發組表達率亦有顯著性差異；進一步提示HPSE 表達陽性肝癌有較高的侵襲性；乙酰肝素酶有可能成為HCC術后轉移復發有價值的預測指標。

作者簡介：干惠珠(1972-)，女，副主任醫師，副教授，碩士研究生導師，主要從事惡性腫瘤發病機制及基因治療的研究。

參考文獻：

[1]Vlodavsky I,Friedmann Y,Elkin M,et al.Mammalian heparanase:gene cloning,expression and function in tumor progression and metastasis[J].Nat Med,1999,5:793.

[2]González-Alva P,Kikuchi K,Miyazaki Y,et al.Expression of heparanase:a possible role in invasiveness and aggressive clinical behavior of ameloblastomas[J].J Oral Sci,2010,52:39.

[3]Dong S,Wu XZ.Heparanase and hepatocellular carcinoma:promoter or inhibitor? World J Gastroenterol,2010,16:306.

[4]charia E,Jia J,Zhang X,et al.Newly generated heparanase knock-out mice unravel co-regulation of heparanase and matrix metalloproteinases[J].PLoS One,2009;4:e5181.

[5]Chen G,Dang YW,Luo DZ,et al.Expression of heparanase in hepatocellular carcinoma has prognostic significance:a tissue microarray study[J].Oncol Res,2008,17:183.

[6]Liu CJ,Lee PH,Lin DY,et al.Heparanase inhibitor PI-88 as adjuvant therapy for hepatocellular carcinoma after curative resection:a randomized phase II trial for safety and optimal dosage[J].J Hepatol,2009,50:958.