山茱萸總苷對坐骨神經損傷Balb/c小鼠神經傳導速度及脊髓運動神經元內 Gap-43表達的影響

齊 爽，劉 燕，陳 鵬

(吉林大學中日聯誼醫院，吉林 長春 130033)

如何促進周圍神經損傷后的修復和再生一直是外科學的研究熱點。山茱萸是我國傳統中藥，近年來的研究發現，其總苷成份可以顯著增加腦損傷大鼠新生成熟神經元及血管數目，改善其神經系統功能[1]；但對周圍神經損傷后的神經再生與修復影響尚無報導。生長相關蛋白(Growth associated protein,Gap-43)有促進神經軸突生長的作用，是神經生長發育、損傷修復時的首選分子標志物[2]。本研究旨在通過觀察山茱萸總苷對坐骨神經損傷Balb/c小鼠神經傳導速度( MCV) 及其相應水平脊髓損傷的運動神經元中GAP-43表達的影響，為山茱萸總苷治療周圍神經損傷提供理論依據。

1 材料與方法

1.1動物分組及造模

84只雄性、健康、鼠齡8周、體重(20±2) g的Balb/c小鼠由同一動物飼養員采用專門鼠籠分籠管理，飼養管理條件一致。采用1%硫噴妥鈉100 mg/kg腹腔注射麻醉。局部脫毛，消毒。沿右側臀大肌纖維方向做右臀及大腿上部皮膚切口，分開臀肌顯露坐骨神經使其與周圍組織分離。坐骨結節下0.5 cm處完全切斷神經干，12倍手術顯微鏡下用11-0醫用無損傷線做斷端吻合，逐層閉合創口。

綜上所述，大紅柳灘地區金礦開采過程中，應以保護環境為基礎，提升地區經濟發展。在開采中會對環境產生一定的負效應，相關企業和人員需要提升對環境保護的重視度，保持生態環境與經濟利益的平衡發展，確保金礦開采科學性和合理性，最大程度降低因開采金礦產生的環境問題。結合金礦開采實際情況，對地質環境、水資源等進行分析，采取針對性措施，降低負效應，全面抓緊金礦開采管理規范，保護環境，促進經濟與生態的可持續發展。

隨機分為山茱萸總苷高劑量組(320 mg/kg/d)，中劑量組(160 mg/kg/d)，低劑量組 (80 mg/kg/d)及生理鹽水對照組，每組16例。各組均采取灌胃方法給藥。連續給藥至處死。各按術后3天、5天、1周、2周，4周、8周、12周分為7個時間點進行觀察。

1.2相關指標檢測

之前就聽我媽說過，這家人成分是很微妙的。家里男人是鄂州搞房地產的，經常不在家。兒子和我一個小學，馬上要上初中。而現在和孩子在家里的是他的后媽。

在機械設備制造中，自動化技術的出現，使其能夠依托于計算機來對機械設備制造的各個環節進行集成化控制，從而使自動化技術發揮更大的作用。利用自動化技術來進行集成化的機械設備制造，能夠使不同的加工工序按照線性的方式進行排序，從而實現各個生產環節的科學整合，并通過相應的子系統對這些生產環節進行控制，從而提高各個生產環節之間的協作性，使機械設備制造分工更加清晰明確，進而為機械設備制造提供了可靠的技術保證。

總苷是中藥山茱萸的主要藥效部分，具有免疫抑制，降血糖，抗炎，抗氧化，抗心律失常等多重功效[4]。在移植排斥反應的防治及各種免疫性及炎癥性疾病治療的臨床應用上也取得了良好效果[5，6]。而對其促進神經損傷后修復的研究較少。

拉力試驗機是一種常用的力學檢測設備，是保證材料拉伸、壓縮、彎曲、撕裂、剝離等試驗順利進行的基礎檢測設備。其主要結構為工作臺、計算機控制系統、動力傳動系統、測力機構、傳感器等[2]。操作者只需將需檢測的零件和夾具安放于拉力試驗機上，并操縱計算機控制界面，即可開始檢測。

①MCV：采用 Medtronic Keypoint 肌電/ 誘發電位儀，對術后第4、8、12周的各組小鼠雙側坐骨神經作檢測。室溫在24℃，1%硫噴妥鈉腹腔麻醉后，常規消毒術野，俯臥位顯露坐骨神經，同芯針電極刺入小鼠比目魚肌肌腹內為記錄電(M點)，接地電極置于鼠尾部。以平行刺激電極(兩極固定間距為2 mm)分別于坐骨神經吻合口近側坐骨結節水平(P點)及遠側坐骨神經分支處(D點)，給以超強刺激(電流10 mA)。

1.3統計學分析

②Gap-43:術后3天、5天、1周、2周、4周、8周時間點，各組取6只小鼠，仰臥位固定，用灌注穿刺針由心尖穿至主動脈根部，用生理鹽水50-100 ml快速灌注，沖洗血液，待右心耳流出清亮液體時，用新鮮4%多聚甲醛磷酸緩沖液300-400 ml持續灌注固定30 min，先快后慢。灌注完畢后，用咬骨鉗咬開椎管，完整且無損傷暴露、游離L4-L6節段脊髓，切取組織，用10%中性甲醛固定標本72 h，酒精逐級脫水后石蠟包埋，備做免疫組化染色。每張切片隨機選取5個視野照相，在放大200倍下，應用圖像分析軟件分析Gap-43的表達。

周圍神經損傷后的神經再生過程復雜且緩慢。精密的顯微縫合僅能恢復損傷神經的連續性，不能完全解決神經再生的質量、傳導速度以及靶器官功能恢復問題[3]。再生神經與周圍組織粘連、失神經支配的肌肉發生萎縮及退行性變現象常見。因此，通過藥物來提高損傷神經縫合后再生質量具有重要的研究意義。

2 結果

①MCV：COG 各劑量組在術后4、8、12周，波幅和運動神經傳導速度方面與對照組之間比較，均存在顯著差異，各時間點高、中劑量組與低劑量組之間比較，均存在顯著差異，而高、中劑量組之間則無顯著差異。術后 4周、8周、12周各組AMP與MNCV比較見表1-3。②Gap-43：術后各時間點脊髓Gap-43的平均光密度值比較結果顯示：坐骨神經損傷后3天、5天、1周，各劑量組Gap-43平均光密度逐漸增加，2周時達最高，隨后的第4周、第8周則逐漸呈逐漸下降。各組間差異性明顯，其中高劑量組，中劑量組明顯高于低劑量和對照組，差異性顯著。

動作電位波幅(AMP)與潛伏期由儀器自動顯示，用游標卡尺測量并輸入刺激電極間距離，儀器自動計算得出運動神經傳導速度(MNCV)。公式如下：

組別術后4周 術后8周術后12周高劑量4.52±0.16abc23.51±0.15abc25.64±1.06abc中劑量4.14±0.18ab19.56±0.31ab23.08±0.33ab低劑量2.42±0.04a15.43±0.35a19.71±0.44a對照組2.01±0.1312.52±0.0717.92±0.71

COG各劑量組與對照組比較a0.010.05

組別術后4周 術后8周術后12周高劑量41.1±0.72abc63.9±1.64abc64.8±1.52abc中劑量37.4±0.93ab58.4±1.17ab59.7±0.83ab低劑量33.8±0.79a52.6±0.79a54.1±0.39a對照組28.6±0.5550.4±0.4647.7±3.36

COG各劑量組與對照組比較a0.010.05

表3 不同時間點脊髓Gap-43平均光密度值比較

COG 各劑量組與對照組比較，aP<0.01，b0.010.05

3 討論

MNCV=兩刺激電極間距離/動作電位潛伏期差值。

但與此同時，各類關于牛肉丸非法添加添加劑的報道也接踵而至。早在2011年3月24日，遼沈晚報就發布了報道《便宜的“牛肉丸”是添加劑做的》；就在今年，中國新聞網上發表了一篇名叫《牛肉丸并非真“姓” 一顆肉丸N種添加劑》的文章。長時間以來，新聞媒體對牛肉丸的口誅筆伐甚囂塵上。那么，牛肉丸里的添加劑是不是像報道里說的那么可怕？牛肉丸里都有哪些添加劑？這些添加劑在制作肉丸的過程中起什么作用？是否真如報道所說的那般惡毒呢？

生長相關蛋白(growth associated proteins，Gap-43) 主要是由神經元胞體產生，主要分布于生長錐。在神經生長階段，神經元的生長錐在神經發育和再生中引導軸突的生長和延伸，Gap-43是富含于神經生長錐中的胞膜相關蛋白，它通過促進細胞骨架蛋白中的肌動蛋白聚集，增強生長錐的活力，啟動和促進神經軸突的生長，分化、再生及突觸重建[7]。因此，它與神經元生長發育、突觸形成及神經可塑性密切相關[8]。

本研究通過各組坐骨神經損傷后小鼠脊髓前角運動神經元Gap-43免疫組織化學染色后的Gap-43的平均光密度值的測量分析發現：坐骨神經損傷后相應脊髓節段的Gap-43被激活并大量表達，應用山茱萸總苷后高中劑量組的Gap-43表達明顯高于低劑量組及對照組，存在明顯的量效關系；2周達到高峰，并于8周后仍能持續表達。神經電生理檢測結果提示隨著時間延長，各組的神經傳導速度與波幅均不斷增長。山茱萸總苷各劑量組各時間點的波幅和運動神經傳導速度較對照組均具有明顯的優勢。表明山茱萸總苷可促進 GAP-43 表達上調，縮短軸突重建時間，能夠促進周圍神經損傷后的再生及神經功能的恢復。

總之，山茱萸總苷可加速坐骨神經損傷后神經髓鞘及軸索再生，其機制可能為增加脊髓內的Gap-43 蛋白的表達。

作者簡介：齊爽(1980-)，女，博士，從事周圍神經、骨與關節軟組織損傷再生與修復的研究。

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