山東蠶區桑斷柄型細菌性疫病的發生與防治研究

孫景詩等

摘要：山東桑樹細菌性疫病除有黑枯型和縮葉型外，近年在多地連年出現新癥狀類型——斷柄型。病原菌的培養性狀及生理生化性狀比較表明：該病病原菌與江蘇、浙江的斷柄型細菌性疫病病原為同一致病型。室內藥物篩選、田間防效研究認為：該病宜于桑樹發芽脫苞前噴施30%琥膠肥酸銅（DT）懸浮劑500 mg/kg，防效可達84.4%，其次噴施鏈霉素或鹽酸環丙沙星或鹽酸恩諾沙星100 mg/kg液。

關鍵詞：桑細菌性疫病；斷柄型；癥狀；生理生化性狀；防治方法

中圖分類號：S888.71+9 文獻標識號：A 文章編號：1001-4942（2014）03-0093-04

AbstractBesides two types of mulberry bacterial diseases，black blight and crinkle leaf，a new type，broken leafstalk， was discovered in many places of Shandong Province in recent years. Through the comparisons of culture， physiological and biochemical properties of the pathogen， it was found that this pathogen was the same to that in Jiangsu and Zhejiang Province. The indoor and field control tests showed that spraying 30% DT SC with the concentration of 500 mg/kg before green tip sprouting stage was the best with the control efficiency up to 84.4%. Streptomycin， ciprofloxacin hydrochloride or enrofloxacin hydrochloride with the concentration of 100 mg/kg were the followed ones.

Key wordsMulberry bacterial disease；Broken-leafstalk type；Symptom；Physiological and biochemical properties；Control method

桑細菌性疫病是危害桑樹的主要病害，在全國各地均普遍發生且危害嚴重。20世紀90年代以前，研究認為該病有兩種致病型：一種是以縮葉癥狀為主的縮葉型，即“桑縮葉型疫病”；另一種是以嫩梢變黑枯死癥狀為主的黑枯型，稱為“桑黑枯型疫病”[1，2]。20世紀90年代末，毛建萍等[3]在江蘇、浙江兩省新發現了另一種表現為桑樹嫩葉葉柄縊縮、葉片下垂枯萎的細菌性疫病，稱為“桑斷柄型細菌性疫病”，故認為桑細菌性疫病有三種類型。丁愛云等（2001）[4]調查研究了山東省蠶區16個縣（市）桑細菌性疫病病原生物型、病害侵染循環等，提出山東桑樹細菌性疫病分為黑枯癥、枝裂癥、縮葉癥和葉斑癥4種癥狀類型，未發現山東有斷柄型疫病。

筆者于2002年起在山東省高密市柴溝鎮等多處桑園中發現，較多的桑葉葉柄縊縮、葉片下垂枯萎，2003～2004年又在高密市周邊諸城、安丘、平度、五蓮等縣（市）桑園中發現此種病害。為搞清該病是否系先前毛建萍等以江蘇、浙江材料所定名的桑斷柄型細菌性疫病，我們參照文獻[3]的主要試驗方法，對該病病原菌的培養性狀、生理生化性狀進行了測定，對發病規律和防治方法進行了研究。

1材料與方法

1.1供試菌株

如表1所示。

1.2病原菌的分離和人工接種

將采集的病葉葉柄，委托高密市農業局植病實驗室經表面消毒并用稀釋法分離培養獲得純菌后，對桑樹新芽第2葉葉柄用針刺、涂抹、噴霧三種方法進行人工接種，并以塑料袋保濕18 h，從接種菌株M1-1的桑樹上有典型癥狀的病葉中重新分離出菌株M1-1備用。

1.3病原菌初次侵染試驗

試驗于2006年開展，設4種處理：（1）3月底桑樹發芽前，在田間用涂抹法接種桑條；（2）4月份在田間選擇長約1.5 cm的嫩芽用涂抹法接種；（3）田間選擇桑枝條標記作為自然發病的對照；（4）桑樹夏伐后在田間選擇長約1 cm的嫩芽用涂抹法接種。每處理為10根枝條或桑芽，重復3次，20 d起調查是否發病，記錄發病癥狀。

1.4培養性狀測定

將菌株M1-1分別采用牛肉汁蛋白胨瓊脂平板、斜面、半固體以及肉湯胨水、牛乳液、修改金氏培養基、Fermi液、Cohn液、滅菌的馬鈴薯塊培養基等接種，28℃培養，觀察其生長情況[5，6]。

1.5生理生化性狀測定

將各菌株分別接種在肉湯胨水培養液中，在不同溫度下培養48 h后，用722光柵分光光度計在640 nm波長下比較光密度大小，以測定病原菌最適生長溫度[7]。對氧化酶、糖醇發酵等按參考文獻[5，6]方法進行，各菌株在半固體牛肉汁蛋白胨瓊脂斜面培養24 h后，測試顏色反應。

1.6室內藥效測定

試驗于2005年10月開展。應用培養皿圓濾紙片法，將NA培養基斜面上培養48 h的M1-1菌株用無菌水制備108 cfu/ml菌懸液，取1 ml菌懸液加入99 ml液化并冷卻至45℃的NA培養基中，搖勻后倒平板，將浸藥液的直徑為0.5 cm的圓濾紙片置入培養皿中，每皿3片，28℃培養48～72 h，檢查抑菌圈直徑。試驗選用5種抗生素和11種殺菌劑，分別為環丙沙星、 恩諾沙星、阿奇霉素、鏈霉素、土霉素、萘啶酸、 氟哌酸、 苯扎氯銨、吡哌酸、DT -301、硫酸銅、二氯化磷酸三鈉、百菌清、琥膠肥酸銅、戊二醛、雙乙酸鈉，每處理重復3皿。

1.7田間防治試驗

田間防治試驗在高密市拒城河桑園中進行，供試品種為選792，試驗分成4個小區，每小區設6個處理，分別噴施鏈霉素粉劑100 mg/kg、30%琥膠肥酸銅懸浮劑500 mg/kg、鹽酸環丙沙星粉劑100 mg/kg、鹽酸恩諾沙星100 mg/kg和甲K殺菌靈水劑555 mg/kg 5種藥劑，設無菌水噴施作對照。自2006年3月下旬開始噴藥，每7天1次，共噴6次。調查統計株發病率和芽發病率。

2結果與分析

2.1病害的發生與分布

自2002年春季起，發現高密的柴溝等大部分鄉鎮的桑園有該病害發生。以后陸續調查周邊的諸城、安丘、五蓮、平度等縣市也都有不同程度的發生。重者株發病率達67.7%，芽（新梢）發病率4.9%。該病在山東僅出現在春蠶期，即4月中旬至5月中旬，其他時間未見發病。選792、農桑10號、沙2×倫109等推廣桑品種的新老桑園均有病害出現，病害有點片發生和發病中心的趨勢，也廣泛地零星發生。

斷柄型病原生命力較強，在各種處理（保存）下均能活到翌年5月份，且在自然表土及10 cm深的無菌土中活得更長，這些土壤、病殘體上的越夏、越冬病原，通過雨水飛濺或其他途徑傳播到桑枝桑芽上，成為來年發病的侵染源。

2.2發病癥狀

自然條件下發病的癥狀，先是桑樹新梢第1～2片嫩葉的葉柄中段底部出現由淺變深的褐色病斑，病斑逐漸變黑縊縮，使葉柄逐漸向下彎折，葉片隨之下垂、枯萎，并從葉柄縊縮處脫落。這時新梢上已長出3～5片葉，病葉大都處于第4葉位[8]。病葉枯萎前若遇風雨，會從葉柄縊縮處折斷而落地。該病通常1個新梢上只有1片葉發病，極少有2片葉發病者，這與縮葉型及黑枯型明顯不同（圖1）。

2.3病原菌的致病性測定

在3～4月份將病原菌進行人工接種，發病癥狀與桑園自然發病癥狀完全相同。7～8月份對夏伐后桑樹新梢嫩葉接種均不發病。

2.4病原菌培養性狀

培養性狀與文獻[3]基本相同，如：牛肉汁蛋白胨瓊脂平板都生成圓形、乳白色、半透明、中間凸起表面濕潤的絲狀交織菌落，斜面劃線的菌苔呈線狀、邊緣有小突起；在修改金氏B培養基中菌落生長良好，能產生綠色螢光；牛肉汁瓊脂半固體培養基穿刺接種，菌體都沿穿刺溝向四周擴散生長；在肉湯胨水培養液中，接種培養2 d后多見渾濁，4 d后表層產生環狀膜，底層有沉淀出現；牛乳培養也生長良好，基質稍透明，液面有膜；在Fermi液培養中，菌株都生長良好，基質渾濁，液面有環狀膜；在Cohn培養液中，菌體不生長；在滅菌馬鈴薯塊上，菌體都生長良好，菌苔呈灰色，基質不變色；菌體在鮮馬鈴薯上不生長。

2.5生理生化性狀

根據光密度測定結果，可以推出斷柄型菌株的最適生長溫度為28～30℃。

供試斷柄型菌株與文獻[3]一樣，均能產氨，不還原硝酸，不產生硫化氫和吲哚，不液化明膠，淀粉水解弱，V.P 及氧化酶反應為陰性，30%蔗糖生長及過氧化氫酶試驗均為陽性，能使石蕊牛乳產堿變藍，能利用檸檬酸鹽及丙二酸鹽。

所測定的對16種糖、醇的利用能力，結果是斷柄型菌株對葡萄糖、甘露糖、D-果糖、半乳糖、蔗糖、阿拉伯糖、木糖、密爾糖、菊糖產酸不產氣（其中對阿拉伯糖、木糖等的利用因菌株不同而有差異）；對山梨醇、鼠李糖、乳糖、甘露醇、糊精、甘油等均不能利用產酸（表2）。

2.6室內藥效測定

采用培養皿圓濾紙片法測定11種殺菌劑和5種抗生素對致病菌M1-1抑制作用。結果表明鏈霉素、70%百菌清、琥膠肥酸銅、鹽酸環丙沙星等對M1-1均有抑制作用。其中鏈霉素、70%百菌清、琥膠肥酸銅等抑菌效果好。

2.7田間防治試驗

桑園試驗表明，斷柄型桑疫病的藥物防治，以桑樹近發芽至桑芽脫苞前噴藥效果為好，等癥狀出現后施藥效果很差。所用藥物以30%琥膠肥酸銅懸浮劑最好，防效可達84.4%，其次為鏈霉素，防效58.0%，再次為鹽酸環丙沙星與恩諾沙星（表3）。

3結論與討論

通過對高密等地新發現的桑樹斷柄型桑疫病病原菌的培養性狀、生理生化性狀的測定，該病與浙江的桑斷柄型細菌性疫病為同一病原菌。經室內及田間藥物篩選、藥效試驗，總結出該病的防治措施，普通發病較輕的桑園無須單獨打藥防治，而對于發病重的桑園，應在春季桑芽萌動或脫苞前向桑樹枝條噴500 mg/kg 30%琥膠肥酸銅懸浮劑，每5～7天噴1次，連噴5次，該藥養蠶安全期7～10 d，也可噴灑100 mg/kg鏈霉素液，還可用100 mg/kg鹽酸環丙沙星與鹽酸恩諾沙星進行交替防治，兩藥間隔7 d，各噴2～3次。

經過多年研究探討，桑疫病化學防治效果不理想，沒有高效的防治藥物，今后應與化工領域專家共同努力，研制出高效低毒、綠色的防治藥物。

參考文獻：

[1]

堵鶴鳴，李國喜，戴荷芳，等.關于桑樹細菌性黑枯病病原菌的研究[J].蠶業科學，1979，5（3）：152-158.

[2]戴荷芳，周水良，堵鶴鳴，等.關于桑樹細菌性黑枯病——葉型病的研究[J].蠶業科學，1980，6（3）：150-154.

[3]毛建萍，堵鶴鳴，浦冠勤，等.桑斷柄型細菌性疫病的研究[J].蠶業科學，1999，25（4）：203-207.

[4]丁愛云，鄭繼法，萬平平，等.山東省桑樹細菌性疫病的發生與防治研究[J].蠶業科學，2002，28（3）：185-189.

[5]方中達.植病研究法[M].北京：農業出版社，1979：161-222.

[6]中國科學院微生物研究所細菌分類組.一般細菌常用鑒定方法[M].北京：科學出版社，1978：135-180.

[7]堵鶴鳴，李國喜，戴荷芳，等.桑細菌性疫病與若干因子的關系[J].蠶業科學，1982，8（2）：82-86.

[8]華德公，胡必利.圖說桑蠶病蟲害防治[M].北京：金盾出版社，2006：7-9.

1.7田間防治試驗

田間防治試驗在高密市拒城河桑園中進行，供試品種為選792，試驗分成4個小區，每小區設6個處理，分別噴施鏈霉素粉劑100 mg/kg、30%琥膠肥酸銅懸浮劑500 mg/kg、鹽酸環丙沙星粉劑100 mg/kg、鹽酸恩諾沙星100 mg/kg和甲K殺菌靈水劑555 mg/kg 5種藥劑，設無菌水噴施作對照。自2006年3月下旬開始噴藥，每7天1次，共噴6次。調查統計株發病率和芽發病率。

2結果與分析

2.1病害的發生與分布

自2002年春季起，發現高密的柴溝等大部分鄉鎮的桑園有該病害發生。以后陸續調查周邊的諸城、安丘、五蓮、平度等縣市也都有不同程度的發生。重者株發病率達67.7%，芽（新梢）發病率4.9%。該病在山東僅出現在春蠶期，即4月中旬至5月中旬，其他時間未見發病。選792、農桑10號、沙2×倫109等推廣桑品種的新老桑園均有病害出現，病害有點片發生和發病中心的趨勢，也廣泛地零星發生。

斷柄型病原生命力較強，在各種處理（保存）下均能活到翌年5月份，且在自然表土及10 cm深的無菌土中活得更長，這些土壤、病殘體上的越夏、越冬病原，通過雨水飛濺或其他途徑傳播到桑枝桑芽上，成為來年發病的侵染源。

2.2發病癥狀

自然條件下發病的癥狀，先是桑樹新梢第1～2片嫩葉的葉柄中段底部出現由淺變深的褐色病斑，病斑逐漸變黑縊縮，使葉柄逐漸向下彎折，葉片隨之下垂、枯萎，并從葉柄縊縮處脫落。這時新梢上已長出3～5片葉，病葉大都處于第4葉位[8]。病葉枯萎前若遇風雨，會從葉柄縊縮處折斷而落地。該病通常1個新梢上只有1片葉發病，極少有2片葉發病者，這與縮葉型及黑枯型明顯不同（圖1）。

2.3病原菌的致病性測定

在3～4月份將病原菌進行人工接種，發病癥狀與桑園自然發病癥狀完全相同。7～8月份對夏伐后桑樹新梢嫩葉接種均不發病。

2.4病原菌培養性狀

培養性狀與文獻[3]基本相同，如：牛肉汁蛋白胨瓊脂平板都生成圓形、乳白色、半透明、中間凸起表面濕潤的絲狀交織菌落，斜面劃線的菌苔呈線狀、邊緣有小突起；在修改金氏B培養基中菌落生長良好，能產生綠色螢光；牛肉汁瓊脂半固體培養基穿刺接種，菌體都沿穿刺溝向四周擴散生長；在肉湯胨水培養液中，接種培養2 d后多見渾濁，4 d后表層產生環狀膜，底層有沉淀出現；牛乳培養也生長良好，基質稍透明，液面有膜；在Fermi液培養中，菌株都生長良好，基質渾濁，液面有環狀膜；在Cohn培養液中，菌體不生長；在滅菌馬鈴薯塊上，菌體都生長良好，菌苔呈灰色，基質不變色；菌體在鮮馬鈴薯上不生長。

2.5生理生化性狀

根據光密度測定結果，可以推出斷柄型菌株的最適生長溫度為28～30℃。

供試斷柄型菌株與文獻[3]一樣，均能產氨，不還原硝酸，不產生硫化氫和吲哚，不液化明膠，淀粉水解弱，V.P 及氧化酶反應為陰性，30%蔗糖生長及過氧化氫酶試驗均為陽性，能使石蕊牛乳產堿變藍，能利用檸檬酸鹽及丙二酸鹽。

所測定的對16種糖、醇的利用能力，結果是斷柄型菌株對葡萄糖、甘露糖、D-果糖、半乳糖、蔗糖、阿拉伯糖、木糖、密爾糖、菊糖產酸不產氣（其中對阿拉伯糖、木糖等的利用因菌株不同而有差異）；對山梨醇、鼠李糖、乳糖、甘露醇、糊精、甘油等均不能利用產酸（表2）。

2.6室內藥效測定

采用培養皿圓濾紙片法測定11種殺菌劑和5種抗生素對致病菌M1-1抑制作用。結果表明鏈霉素、70%百菌清、琥膠肥酸銅、鹽酸環丙沙星等對M1-1均有抑制作用。其中鏈霉素、70%百菌清、琥膠肥酸銅等抑菌效果好。

2.7田間防治試驗

桑園試驗表明，斷柄型桑疫病的藥物防治，以桑樹近發芽至桑芽脫苞前噴藥效果為好，等癥狀出現后施藥效果很差。所用藥物以30%琥膠肥酸銅懸浮劑最好，防效可達84.4%，其次為鏈霉素，防效58.0%，再次為鹽酸環丙沙星與恩諾沙星（表3）。

3結論與討論

通過對高密等地新發現的桑樹斷柄型桑疫病病原菌的培養性狀、生理生化性狀的測定，該病與浙江的桑斷柄型細菌性疫病為同一病原菌。經室內及田間藥物篩選、藥效試驗，總結出該病的防治措施，普通發病較輕的桑園無須單獨打藥防治，而對于發病重的桑園，應在春季桑芽萌動或脫苞前向桑樹枝條噴500 mg/kg 30%琥膠肥酸銅懸浮劑，每5～7天噴1次，連噴5次，該藥養蠶安全期7～10 d，也可噴灑100 mg/kg鏈霉素液，還可用100 mg/kg鹽酸環丙沙星與鹽酸恩諾沙星進行交替防治，兩藥間隔7 d，各噴2～3次。

經過多年研究探討，桑疫病化學防治效果不理想，沒有高效的防治藥物，今后應與化工領域專家共同努力，研制出高效低毒、綠色的防治藥物。

參考文獻：

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[7]堵鶴鳴，李國喜，戴荷芳，等.桑細菌性疫病與若干因子的關系[J].蠶業科學，1982，8（2）：82-86.

[8]華德公，胡必利.圖說桑蠶病蟲害防治[M].北京：金盾出版社，2006：7-9.

1.7田間防治試驗

田間防治試驗在高密市拒城河桑園中進行，供試品種為選792，試驗分成4個小區，每小區設6個處理，分別噴施鏈霉素粉劑100 mg/kg、30%琥膠肥酸銅懸浮劑500 mg/kg、鹽酸環丙沙星粉劑100 mg/kg、鹽酸恩諾沙星100 mg/kg和甲K殺菌靈水劑555 mg/kg 5種藥劑，設無菌水噴施作對照。自2006年3月下旬開始噴藥，每7天1次，共噴6次。調查統計株發病率和芽發病率。

2結果與分析

2.1病害的發生與分布

自2002年春季起，發現高密的柴溝等大部分鄉鎮的桑園有該病害發生。以后陸續調查周邊的諸城、安丘、五蓮、平度等縣市也都有不同程度的發生。重者株發病率達67.7%，芽（新梢）發病率4.9%。該病在山東僅出現在春蠶期，即4月中旬至5月中旬，其他時間未見發病。選792、農桑10號、沙2×倫109等推廣桑品種的新老桑園均有病害出現，病害有點片發生和發病中心的趨勢，也廣泛地零星發生。

斷柄型病原生命力較強，在各種處理（保存）下均能活到翌年5月份，且在自然表土及10 cm深的無菌土中活得更長，這些土壤、病殘體上的越夏、越冬病原，通過雨水飛濺或其他途徑傳播到桑枝桑芽上，成為來年發病的侵染源。

2.2發病癥狀

自然條件下發病的癥狀，先是桑樹新梢第1～2片嫩葉的葉柄中段底部出現由淺變深的褐色病斑，病斑逐漸變黑縊縮，使葉柄逐漸向下彎折，葉片隨之下垂、枯萎，并從葉柄縊縮處脫落。這時新梢上已長出3～5片葉，病葉大都處于第4葉位[8]。病葉枯萎前若遇風雨，會從葉柄縊縮處折斷而落地。該病通常1個新梢上只有1片葉發病，極少有2片葉發病者，這與縮葉型及黑枯型明顯不同（圖1）。

2.3病原菌的致病性測定

在3～4月份將病原菌進行人工接種，發病癥狀與桑園自然發病癥狀完全相同。7～8月份對夏伐后桑樹新梢嫩葉接種均不發病。

2.4病原菌培養性狀

培養性狀與文獻[3]基本相同，如：牛肉汁蛋白胨瓊脂平板都生成圓形、乳白色、半透明、中間凸起表面濕潤的絲狀交織菌落，斜面劃線的菌苔呈線狀、邊緣有小突起；在修改金氏B培養基中菌落生長良好，能產生綠色螢光；牛肉汁瓊脂半固體培養基穿刺接種，菌體都沿穿刺溝向四周擴散生長；在肉湯胨水培養液中，接種培養2 d后多見渾濁，4 d后表層產生環狀膜，底層有沉淀出現；牛乳培養也生長良好，基質稍透明，液面有膜；在Fermi液培養中，菌株都生長良好，基質渾濁，液面有環狀膜；在Cohn培養液中，菌體不生長；在滅菌馬鈴薯塊上，菌體都生長良好，菌苔呈灰色，基質不變色；菌體在鮮馬鈴薯上不生長。

2.5生理生化性狀

根據光密度測定結果，可以推出斷柄型菌株的最適生長溫度為28～30℃。

供試斷柄型菌株與文獻[3]一樣，均能產氨，不還原硝酸，不產生硫化氫和吲哚，不液化明膠，淀粉水解弱，V.P 及氧化酶反應為陰性，30%蔗糖生長及過氧化氫酶試驗均為陽性，能使石蕊牛乳產堿變藍，能利用檸檬酸鹽及丙二酸鹽。

所測定的對16種糖、醇的利用能力，結果是斷柄型菌株對葡萄糖、甘露糖、D-果糖、半乳糖、蔗糖、阿拉伯糖、木糖、密爾糖、菊糖產酸不產氣（其中對阿拉伯糖、木糖等的利用因菌株不同而有差異）；對山梨醇、鼠李糖、乳糖、甘露醇、糊精、甘油等均不能利用產酸（表2）。

2.6室內藥效測定

采用培養皿圓濾紙片法測定11種殺菌劑和5種抗生素對致病菌M1-1抑制作用。結果表明鏈霉素、70%百菌清、琥膠肥酸銅、鹽酸環丙沙星等對M1-1均有抑制作用。其中鏈霉素、70%百菌清、琥膠肥酸銅等抑菌效果好。

2.7田間防治試驗

桑園試驗表明，斷柄型桑疫病的藥物防治，以桑樹近發芽至桑芽脫苞前噴藥效果為好，等癥狀出現后施藥效果很差。所用藥物以30%琥膠肥酸銅懸浮劑最好，防效可達84.4%，其次為鏈霉素，防效58.0%，再次為鹽酸環丙沙星與恩諾沙星（表3）。

3結論與討論

通過對高密等地新發現的桑樹斷柄型桑疫病病原菌的培養性狀、生理生化性狀的測定，該病與浙江的桑斷柄型細菌性疫病為同一病原菌。經室內及田間藥物篩選、藥效試驗，總結出該病的防治措施，普通發病較輕的桑園無須單獨打藥防治，而對于發病重的桑園，應在春季桑芽萌動或脫苞前向桑樹枝條噴500 mg/kg 30%琥膠肥酸銅懸浮劑，每5～7天噴1次，連噴5次，該藥養蠶安全期7～10 d，也可噴灑100 mg/kg鏈霉素液，還可用100 mg/kg鹽酸環丙沙星與鹽酸恩諾沙星進行交替防治，兩藥間隔7 d，各噴2～3次。

經過多年研究探討，桑疫病化學防治效果不理想，沒有高效的防治藥物，今后應與化工領域專家共同努力，研制出高效低毒、綠色的防治藥物。

參考文獻：

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[5]方中達.植病研究法[M].北京：農業出版社，1979：161-222.

[6]中國科學院微生物研究所細菌分類組.一般細菌常用鑒定方法[M].北京：科學出版社，1978：135-180.

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[8]華德公，胡必利.圖說桑蠶病蟲害防治[M].北京：金盾出版社，2006：7-9.