諾迪康膠囊抗小鼠運動性疲勞的實驗研究

朱淦芳

(浙江中醫藥大學，浙江 杭州 310053)

隨著健康知識的普及和推廣，參與體育運動、運動塑身、運動保健、運動康復的群體越來越多，出現運動性疲勞的幾率也越來越大[1]。運動引起的疲勞能否及時消除，關系到運動效率及運動持久性，甚至關系到運動群體的健康。而疲勞主要是大量消耗機體能源，使血糖降低；造成乳酸和蛋白質分解物存留在體內，破壞機體酸堿平衡、離子分布、滲透壓平衡等所引起，是機體代謝失去平衡的表現[2]。

在西醫藥方面，由于西藥在提高運動能力、延緩疲勞產生的同時也給人體帶來了危害，且很多藥物均為國際奧委會所禁用；而中醫藥因其作用多靶點、幾乎不含違禁成分等特點已引起了國內外學者的廣泛關注[3]。中醫認為運動性疲勞是機體因“勞倦”引起“虛損”。心主血脈，只有精血充足，血液才能在脈內正常地運行，營養全身，當心血虧虛時則易導致失眠多夢、眩暈和健忘等癥，當長時間力竭性運動則引起嚴重的平衡紊亂，可能會造成心血管調控功能失常，甚至局部缺血，導致心血管損傷，進而影響機體的運動能力[4]。

諾迪康膠囊由產自西藏高原的藥用植物(圣地紅景天)提取精制而成，主要成分為紅景天苷、黃酮、紅景天素等，具有益氣活血、通脈止痛的作用，臨床常用于治療氣虛血瘀所致胸痹[5]、椎基底動脈供血不足[6]、冠狀動脈臨界病變[7]和慢性心力衰竭[8]等病癥，其在治療心血管疾病方面具有較好療效[9-11]。同時，臨床也發現諾迪康膠囊對慢性疲勞方面也具有較好治療效果[12-13]，但其在抗運動性疲勞方面的研究尚未見報道。據報道，紅景天苷具有提高組織脂質抗氧化水平、清除自由基等作用[14]。故本文采用小鼠游泳運動性疲勞模型，以力竭時間及其LDH、MDA、BUN和SOD及肝糖原的含量為檢測指標，首次研究諾迪康膠囊在抗運動性疲勞和提高耐受力方面的作用，為擴大諾迪康膠囊的進一步臨床應用提供科學依據。

1 試驗材料與儀器

1.1 試驗材料

1.1.1 試劑：諾迪康膠囊(西藏諾迪康藥業股份有限公司，批號：120101)；維生素C(湖北華中藥業有限公司，批號：20081012)；0.9%生理鹽水；SOD試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20120820)；MDA試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20120817)；肝糖原試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號：20120620)。

1.1.2 動物：ICR小鼠，年齡4周齡，體重20±2g，雌雄各半，由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司(合格證號:SYXK(2008-0058)提供。

1.2 實驗儀器

日立自動生化分析儀(H7020，日本日立公司)；勻漿機(T10，德國IKA公司)；電子分析天平(JJ300，江蘇常熟雙杰測試儀器廠)。

2 實驗方法

2.1 小鼠適應性培養 將小鼠進行3d的適應性培養，使小鼠適應實驗室生活環境和飼養條件，達到實驗所需要求。

2.2 小鼠篩選及分組 將小鼠置于直徑40 cm的水槽中，水深30 cm，水溫控制在25℃±1℃，淘汰不會游泳的小鼠(游泳時間小于300 s)。將符合條件的小鼠隨機分成正常對照組、模型組和3個實驗組(高劑量組500mg·kg -1、中劑量組250mg·kg -1和低劑量組100mg·kg -1)，每組10只，共50只。其中3個實驗組每天灌胃對應濃度的諾迪康混懸液，正常對照組和模型組小鼠每天灌胃等體積的蒸餾水。

2.3 小鼠運動疲勞模型制備 每天上午將模型組和3個實驗組和進行游泳訓練，在小鼠尾根部負相當于體重5%的鉛絲，置于水溫25℃±1℃、水深30cm、大小50cm×50cm×40cm的游泳箱中游泳30min，正常對照組不進行訓練。持續14d，即為運動性疲勞模型。

2.4 力竭時間測定。上述小鼠連續灌胃14d，末次灌胃30min后，將所有小鼠進行一次力竭性游泳試驗(連續3次沉入水底，每次持續10 s)。觀察并記錄各小鼠游泳狀況，以入水至力竭的時間作為小鼠力竭時間。

2.5 LDH和BUN含量測定 將力竭小鼠立即進行眼球采血，迅速采集0.5 ml全血，靜置30min，3 000r/min的轉速離心15min。吸取血清，利用全自動生化分析儀測定血清中乳酸脫氫酶(LDH)和尿素氮(BUN)的含量。

2.6 SOD和MDA含量測定 將“2.5”中小鼠迅速解剖，取出心臟，用生理鹽水漂洗后用濾紙吸干，加入9倍重量的生理鹽水，在冰水浴下用玻璃組織勻漿器研磨，3 000r/min離心15min，吸取上清液，按試劑盒操作，測定SOD和MDA的含量。

2.7 小鼠肝糖原含量測定 將“2.6”中小鼠迅速取出肝臟，用生理鹽水漂洗后用濾紙吸干，精確稱取肝臟1g，加入9倍重量的生理鹽水，在冰水浴下用玻璃組織勻漿器研磨，3 000r/min離心15min，吸取上清液，按試劑盒說明書操作，測定小鼠肝糖原的含量。

3 統計學處理

使用SPSS13.0軟件進行統計學處理，組間差異采用方差分析，兩兩比較采用q檢驗。取P<0.05作為顯著性差異水平。

4 結果與分析

4.1 各組小鼠游泳力竭時間變化

結果表明：小鼠游泳力竭時間模型組與正常對照組之間有顯著性差異(P<0.05)，其力竭游泳時間明顯縮短；低劑量組與模型組之間無顯著差異；中劑量組與模型組之間有顯著性差異(P<0.05)；高劑量組與模型組之間有非常顯著性差異(P<0.01)；且中劑量組與高、低劑量組小鼠的游泳時間存在非常顯著性差異(P<0.01)。說明諾迪康膠囊能延長小鼠力竭游泳時間。見表1

表1 各組小鼠游泳力竭時間變化

注：☆與正常對照組比較 P<0.05；☆☆與正常對照組比較 P<0.01；○與模型組比較 P<0.05；○○與模型組比較 P<0.01；表2-4同

4.2 各組小鼠血清BUN和LDH變化

結果表明：小鼠血清BUN和LDH含量模型組與正常對照組相比，其LDH含量明顯降低，BUN含量明顯升高，LDH、BUN均有顯著差異(P<0.05)。三組劑量組組與模型組之間低劑量組無顯著差異；高劑量組與模型組之間存在非常顯著性差異(P<0.01)；中劑量組與模型組之間有顯著差異(P<0.05)。表明諾迪康能提高小鼠運動后血清中LDH的含量，減少血清中BUN含量的產生。小鼠運動后血清LDH含量升高、BUN的含量降低，反映諾迪康膠囊可增強血清中乳酸分解，加強BUN的清除，延緩小鼠的運動疲勞，見表2。

表2 各組小鼠BUN和LDH變化

4.3 各組小鼠心臟MDA和SOD變化

結果表明：小鼠模型組與正常對照組相比，其SOD含量有顯著差異(P<0.05)，MDA含量呈非常顯著性差異(P< 0.01)。高劑量組與模型組比，其SOD含量有顯著差異(P<0.05)，中劑量組MDA含量有顯著差異(P<0.05)，而高劑量組MDA含量呈非常顯著性差異(P<0.01)。說明中高劑量的諾迪康膠囊具有降低機體過氧化脂質水平，具有延緩疲勞作用，見表3。

表3 各組小鼠MDA和SOD變化

4.4 各組小鼠肝糖原變化

結果表明：小鼠肝糖原模型組與正常對照組之間肝糖原的含量存在非常顯著性差異(P< 0.01)。高、中劑量組小鼠的肝糖原含量與模型組比較存在非常顯著性差異(P< 0.01)；低劑量組小鼠肝糖原含量與模型組比，有顯著差異(P< 0.05)。這表明低、中、高劑量的諾迪康膠囊具有增加機體糖原儲備的功效，延緩運動疲勞的作用，見表4。

表4 各組小鼠肝糖原變化

5 討 論

5.1 諾迪康膠囊的作用機制

諾迪康膠囊是從高原人參圣地紅景天中提取有效成分研制的中成藥，具有扶正固本、益氣活血、通脈止痛之功，它的主要藥味是紅景天，具有益氣活血、通脈平喘的功效[12]，能減輕因缺血引起的細胞內酸中毒、減少自由基的釋放，從而改善心肺功能。紅景天中的紅景天苷能有效地擴張冠狀動脈，使動脈血管內血壓下降，減小心臟的負荷，降低心肌耗氧量，調節血流變性，有效改善心力衰竭癥狀，增強心肌收縮，促進心肺功能恢復，具有耐缺氧和抗心肌缺血的作用。

5.2 諾迪康膠囊對小鼠游泳力竭時間的影響

運動疲勞為機體生理過程不能繼續將機體維持在特定水平工作或不能維持預定的運動強度。這是因為體內能源物質大量消耗而不能及時補充，體內糖原消耗過大所致，運動時一些代謝產物在體內堆積且又不能及時清除，從而影響體內的代謝平衡，造成協調機能失調和運動能力下降的現象，實際是一種機體自我保護的正常表現。而力竭則是運動疲勞的極端形式，在長時間運動過程中，機體內產生的自由基增多，而自由基與機體組織細胞損傷有關，是誘發運動疲勞和運動損傷的原因之一。運動員常會因大強度訓練導致體內系統平衡失調，尤其是代謝系統，受神經、免疫內分泌系統的調節，與運動供能直接相關，一旦失衡又不能及時調整，會造成疲勞繼而導致運動能力下降[15]。在運動性疲勞試驗研究中，國內外的造模方法多采用游泳試驗和跑臺試驗[16]。本文選擇小鼠游泳試驗的方法進行造模，研究中發現，與正常對照組小鼠相比，隨著訓練時間的延長，模型組小鼠逐漸出現精神萎靡、毛發蓬亂枯燥、毛色灰暗、食欲明顯下降、易受驚嚇和反應遲鈍等一系列運動性疲勞現象，且在游泳過程中，模型組出現力竭小鼠的數量增多、休息時間延長，說明運動性疲勞模型造模成功。實驗結果證明：經灌胃諾迪康膠囊混懸液后，可以抑制缺氧時血清中LDH的活性，使小鼠力竭游泳時間明顯較模型組延長。說明諾迪康膠囊具有改善心肌功能，使小鼠心肌收縮力增強，提高氧的運輸能力，保持供養充足，提高耐氧能力減少自由基生成，降低過氧化損傷，保證高能有效生成，提高機體運動能力，延緩疲勞出現。

5.3 諾迪康膠囊對小鼠血清中LDH、BUN影響

LDH在存在于機體的所有細胞中，是無氧代謝的重要酶。大運動量運動時，心肌細胞缺氧，糖酵解增加，能量利用降低及產生不足，導致細胞內LDH含量增加及機體乳酸供能系統發生障礙，腎臟、肝臟及心肌的有氧氧化能力大大減弱。而中等運動量運動時，LDH大量釋放，使血清中LDH含量升高，能量的利用率提高，促進機體快速恢復。因此，血清LDH是反映過度訓練對機體組織的損傷情況[17]。BUN是蛋白質代謝的終末產物，運動能力和運動疲勞有著密切的關系，BUN又是評價運動負荷和運動量的重要指標。機理是：在長時間運動時，機體內的蛋白質和氨基酸才會分解供能，BUN的含量升高，身體的機能下降，各組織出現疲勞狀態。在運動過程中血清尿素氮含量通常是隨著運動負荷增加而升高，身體對負荷適應性越差，產生尿素氮越多。蛋白質又是參與能量代謝的儲備之一，利用的程度高低是反映機體適應力大小[18]。在長時間運動過程中，當機體不能通過糖、脂肪代謝獲取足夠的能量時，蛋白質與氨基酸就會參與分解代謝，導致血尿素氮增加。游泳小鼠血清尿素氮比安靜基礎血清尿素氮明顯升高，所以，血清中BUN含量可間接反映機體的疲勞程度[19]。諾迪康中的成分可降低小鼠運動中血清BUN含量，血清BUN含量的降低表明蛋白質參與供能的比例相對減少，在運動時糖原、脂肪的供能得到不斷加強。實驗結果表明：灌胃諾迪康混懸液后，模型組與正常對照組相比，其LDH含量明顯降低，BUN含量明顯升高；高、中劑量組小鼠的LDH和BUN含量與模型組比，LDH的含量明顯上高，UBN含量明顯降低。說明諾迪康混懸液對小鼠力竭運動后所造成LDH、BUN的含量水平異常起到良好的調節作用，促進機體在運動時維持正常的身體機能。更說明諾迪康混懸液對UBN水平有調節作用，能加強糖原、脂肪在運動中的供能，相對減少了肌肉中蛋白質參與供能的比例，維持肌肉中能量平衡，抑制肌肉中過氧化物酶的老化分解。反映諾迪康膠囊可增強血清中乳酸分解，加強BUN的清除，延緩小鼠的運動疲勞。所以，實驗各劑量組小鼠血清BUN含量低于模型組這一結果說明，小鼠運動時動用的蛋白質低于模型組，從而證實諾迪康膠囊具有提高機體適應力、延緩疲勞的作用。

5.4 諾迪康對小鼠心臟中SOD和MDA含量的影響

運動中機體需要大量的氧量增加，導致血紅蛋白自氧化和自由基升高，使體內的抗自由基酶活性也相應增加，從而致使細胞氧化損傷加劇[15]。SOD是體內消除自由基的抗氧化酶。MDA是機體內質過氧化反應的重要代謝產物，對細胞具有嚴重的毒性作用，MDA的含量在一定程度上反應了機體內自由基產生和消除的情況。力竭游泳后的小鼠，SOD的含量降低，MDA的含量上升，其機理是力竭運動后的小鼠機體產生大量的自由基，超過了機體本身抗氧化系統的清除能力，導致大量的自由基對組織細胞膜上的酶的合成受到抑制。本實驗小鼠灌入一定劑量的諾迪康混懸液后，小鼠血清酶的活性明顯降低，同時小鼠SOD含量提高，機體抗氧化酶活性的提高有利于小鼠快速清除運動時產生的過量自由基，避免了自由基各組織的損傷。結果顯示：模型組小鼠SOD含量明顯低于中、高劑量組，而MDA含量高于中、高劑量組。說明諾迪康可通過降低MDA含量，提升SOD抗氧化酶活性，清除氧自由基，減輕氧自由基及其引發的脂質過氧化對細胞組織的損傷，從而達到延緩運動疲勞的目的。

5.5 諾迪康對小鼠肝糖原含量的影響

糖原的儲存量是直接影響機體的運動能力，同時儲量大小與疲勞的延緩也有直接關系。長時間運動時，為機體內的血糖維持平衡水平，肝糖原儲備量下降[12]。糖原含量的高低是反應疲勞發生的快慢。肌糖原消耗的同時，為維持血糖水平，肝糖原儲備量減少[18]。實驗結果表明：諾迪康各劑量組小鼠的肝糖原水平均高于模型組，且有顯著性差異，低、中、高劑量組的游泳小鼠的力竭時間也有不同程度的延長，其具有增加機體糖原儲備的功效。所以，服用不同諾迪康混懸液的量能夠使肝糖原緩慢分解,從而使血糖值水平保持相對平穩。通過增加肝糖原儲備為機體提供更多的能量，可以延長小鼠力竭時間，從而達到抗疲勞的目的。

6 小 結

諾迪康膠囊可通過延長其游泳力竭時間、提高LDH、SOD和肝糖原儲備、降低BUN和MDA含量等方式來提高抗氧化酶活性、減少自由基生成而降低心肌脂質過氧化損傷，對心肌細胞起到了良好的保護作用，延緩小鼠的運動性疲勞，說明該藥物具有改善小鼠心肌相對缺氧、提高運動能力、降低運動損傷、加速疲勞后物質、能量代謝的恢復及疲勞消除的作用。本實驗證明諾迪康膠囊具有抗運動疲勞的作用，為運動訓練提供較高的利用價值，也為擴大諾迪康膠囊的進一步應用范圍提供了科學依據。

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