BALB/c突變卷毛小鼠血液學指標的檢測分析

李瑞生，李曉娟，湯紫榮，姜棋予，李 蓓，侯 俊

(1. 解放軍第302醫院實驗技術研究保障中心，北京 100039；2. 解放軍第302醫院感染控制科，北京 100039)

血液生理生化指標是反映實驗動物是否健康和建立標準化動物模型的一項重要內容，也是探討發病機制、生理學、藥理學和毒理學等實驗研究的重要參考值[1]。尤其對于基因突變、轉基因和基因敲除等所建立的動物模型，其血液生理生化指標的檢測顯得尤為重要[2]。2012年本實驗室發現了一只被毛卷曲的BALB/c自發突變小鼠，通過近交繁殖已建立了純系突變卷毛小鼠，為了探討BALB/c突變卷毛小鼠其血液學指標與正常BALB/c小鼠是否發生了變異。本實驗選取6周齡的BALB/c突變卷毛小鼠和正常小鼠，對其血液學的8項生理指標和15項血清電解質及生化指標進行了檢測分析，以期了解BALB/c突變卷毛小鼠的血液學指標與正常小鼠之間是否存在差異，旨在探討突變基因對小鼠的血液學指標是否產生影響，也為今后建立和應用BALB/c突變卷毛小鼠模型提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

BALB/c突變卷毛小鼠來源于本實驗室自繁(全同胞兄妹交配)，選擇6周齡BALB/c突變卷毛小鼠20只(雌雄各半)；同時選擇6周齡正常BALB/c小鼠20只(雌雄各半)，其來源于軍事醫學科學院實驗動物中心，許可證號【SCXK(軍)2012-0004】，本實驗室具有SPF級實驗動物使用許可證書【SYXK(軍)2012-0010】。

1.2 儀器設備

7020全自動生化儀(日本日立公司)；KX-21N全自動血球分析儀(日本Sysmex公司)；5415R離心機(Eppendoff公司)。

1.3 方法

1.3.1 血液生理指標測定

采集小鼠尾血20 μL，用全自動血細胞分析儀檢測以下血常規指標：紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)、血紅蛋白濃度(HGB)、血細胞壓積(HCT)、平均血細胞容積(MCV)、平均血細胞血紅蛋白量(MCH)、平均血細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板計數(PLT)等8項指標。

1.3.2 血清生化與電解質指標測定

小鼠于采血前禁食12 h，利用眼球摘除法采血1 mL于EP管中，室溫靜置30 min，3000 r/min離心10 min，分離血清。用全自動生化儀檢測以下生化指標：總蛋白(TP)、球蛋白(GLO)、白蛋白(ALB)、天冬氨酸轉氨酶(AST)、丙氨酸轉氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、葡萄糖(GLU)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)；同時檢測血清中鉀、鈉、氯、離子鈣、磷等電解質指標。

1.4 統計分析

應用SPSS17.0統計學軟件對各項指標數據進行正態性檢驗，應用配對t檢驗對實驗結果進行性別及組間分析比較。

2 結果

2.1 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血液生理指標分析

兩組小鼠生理指標的檢測結果顯示：BALB/c突變卷毛小鼠WBC、MCV和PLT的性別及組間結果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，BALB/c突變卷毛小鼠MCHC的雄性及組間結果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.01)，其它各項指標無差異(表1)。

表1 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血液生理指標的比較

2.2 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血清電解質指標分析

兩組小鼠血清電解質指標的檢測結果顯示：BALB/c突變卷毛小鼠Na+的雌性和組間、K+的雌性以及Cl—雌性和組間的結果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，其它各項指標無差異(表2)。

2.3 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血清生化指標分析

兩組小鼠血清生化指標的檢測結果顯示：BALB/c突變卷毛小鼠ALT的雄性和組間、GLU的雌性和組間、TG的雌性和組間結果與正常小鼠具有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)，其它各項指標無差異(表3)。

3 討論

嚙齒類的小鼠最易自發基因突變，所形成的突變型小鼠為人類各種疾病的研究提供了優質的模型動物[3]。基因突變動物不僅會影響其器官系統和外觀表征發生改變，而且還會影響其血液學指標正常范圍值的變動，監測突變基因動物的血液學指標對于了解突變系動物的血液系統[4]，分析該動物的各項功能器官是否造成影響[5]都具有十分重要的指導意義。岳敏等[6]、沈果等[7]、王冬平等[8]和韓凌霞等[9]分別對小型豬、獼猴、SD大鼠和鴨子等動物進行了血液生理生化指標的測定，為這些不同品種實驗動物的應用提供了可靠的血液學指標參考范圍值。而對于敲基因小鼠[10]、轉基因小鼠[11]和突變小鼠[12]血液生理生化指標的測定也愈加受到重視，不僅能夠為這些新型實驗動物提供可靠的血液學指標參考范圍值，而且還能夠分析外來插入和突變的基因是否對實驗動物的血液系統造成影響。目前對于BALB/c突變卷毛小鼠的血液學指標的正常參考范圍值還不太清楚。

表3 BALB/c突變卷毛小鼠與正常小鼠血清生化指標的比較

因此，本實驗選取6周齡BALB/c突變卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠，對其血液學的8項生理指標和15項血清生化及電解質指標進行了相應的測定分析，結果顯示BALB/c突變卷毛小鼠的4項血液生理學指標、3項電解質指標和3項血清生化指標與正常小鼠之間存在顯著的差異性，結果提示突變基因可能對小鼠的血液系統造成了一定的影響。其中BALB/c突變卷毛小鼠的WBC和PLT均顯著高于正常小鼠，由于血小板具有促進血栓形成的作用，而且可以介導炎癥反應，被激活后的血小板通過表達和釋放炎癥介質而誘導白細胞的炎癥作用[13]。由此可推測BALB/c突變卷毛小鼠血栓形成和易發生炎癥反應的幾率會大大高于正常小鼠，此結果與杜靜等[13]研究IL-10敲基因小鼠血液生理生化發生的變化相一致。但有關BALB/c突變卷毛小鼠是否具有易形成血栓和炎癥反應等特點還有待進一步研究證實。實驗動物的血液學指標受品系、年齡、性別、營養代謝以及測定方法、儀器設備和樣本量等因素的影響[14]，因此上述這些差異性指標是否是由于基因突變所造成，還需要今后擴大樣本量且對該突變小鼠血液學指標進行有序地動態監測，才能更加全面地對其血液學特性進行分析和驗證。

綜上所述，BALB/c突變卷毛小鼠和正常BALB/c小鼠的部分血液學指標存在差異，提示突變基因可能對血液學指標產生一定的影響。此結果為深入了解BALB/c突變卷毛小鼠的血液學特性提供了可靠的參數，也為今后開發和利用該突變卷毛小鼠模型奠定了堅實的理論基礎。

參考文獻：

[1] 王莉，唐大軒，熊靜悅，等．不同月齡SPF級SD大鼠血液學及生化指標的變化[J]．醫學動物防制，2009，25(12)：903-905．

[2] 左琴，李波，岳秉飛，等．C57-ras致癌性轉基因模型雜交1代的臟器及血液學參數測定[J]．中國比較醫學雜志，2011，21(5)：5-9．

[3] Koshibu K，Levitt P．Transforming growth factor-alpha induces sex-specific neurochemical imbalance in the stress- and memory-associated brain structures[J]．Neuropharmacology，2006，50(7)：807-13．

[4] 樊林花，李丹，劉茂林，等．清潔級SD大鼠血液生理及生化指標正常參考值的觀察[J]．中國醫療前沿，2011，6，(19)：33-34．

[5] 李曉娟，張巧云，李蓓，等．BALB/c突變卷毛小鼠部分生長發育指標初探[J]．中國比較醫學雜志，2013，23(11)：36-39．

[6] 岳敏，范沛，吳麗紅，等．廣州地區三種小型豬血液生理生化指標的比較[J]．中國比較醫學雜志，2011，21(8)：24-26．

[7] 沈果，田軍東，郭相保，等．野生太行山獼猴血液生理生化指標測定與分析[J]．四川動物，2011，30(2)：254-257．

[8] 王冬平，隋麗華，尚世臣，等．清潔級SD大鼠血液生理生化指標的測定[J]．中國比較醫學雜志，2009，19(9)：44-46．

[9] 韓凌霞，劉霄磊，蔡文博，等．HBK-SPF鴨生理生化指標的測定[J]．實驗動物科學，2011，28(2)：44-46．

[10] 李瑞生，李曉娟，戰大偉，等．PLCε基因敲除小鼠血液生理生化指標分析[J]．實驗動物科學，2012，29(3)：1-4．

[11] 田小蕓，惲時鋒，胡玉紅，等．轉基因EGFP小鼠血液生理生化指標的測定[J]．實驗動物科學，2008，25(5)：56-58．

[12] 王冬平，李善如，欒蓉暉，等．突變無毛小鼠F2代的血液學和血液生化指標測定[J]．實驗動物科學與管理，2004，21(3)：7-9．

[13] 杜靜，葉亮，林欣乾，等．白細胞介素-10基因敲除小鼠血液生理生化指標分析[J]．廣東醫學，2013，34(14)：2138-2140．

[14] 鄭鳳嬌，傅泳航，劉光澤，等．HBV轉基因小鼠血液生理生化指標檢測分析[J]．解放軍醫學雜志，2011，36(9)：970-972．