博落回總堿胃內漂浮片中白屈菜紅堿的含量測定

崔殿波，王興剛，朱艷華，王鳳儒

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

植物博落回屬于罌粟科博落回屬多年生草本植物，又名號筒桿、山梧桐、三錢三、山號筒等。在我國分布于長江中下游各省市地區，生長于海拔2000m以下的低山、路邊及溝邊。博落回主要成分為生物堿類物質，其中白屈菜紅堿為一種異喹啉衍生物堿。白屈菜紅堿(chelerythrine，CHE)還存在于飛龍掌血、白屈菜、血水草等植物中。CHE具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、殺蟲等多種藥理活性，特別是抗腫瘤活性，倍受人們的關注，CHE的分子結構的特殊性決定了其抗癌活性。利用白屈菜紅堿治療腫瘤疾病的研究也較多，本研究是將博落回總堿制成胃內漂浮片發揮其在胃內長時間滯留，達到治療胃癌的作用。

1 儀器與試藥

島津公司LC－2010AHT型高效液相色譜儀;德國Sartorius公司Sartorius BT25S電子天平;北京國藥龍立科技有限公司DP－30型單沖打片機;白屈菜紅堿對照品(深圳美荷生物有限公司);博落回總堿(寶雞鴻源生物有限公司);博落回總堿胃內漂浮片(本實驗室自制);乙腈為色譜純;水為超純水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為迪馬公司Diamonsil C18(5μm，250mm×4.6mm);流動相為乙腈 － 水 － 磷酸(25∶75∶0.1);流速為1.0mL/min;檢測波長270nm;進樣量10μL;柱溫為35℃。

2.2 溶液制備

白屈菜紅堿對照品溶液制備:精密稱取白屈菜紅堿對照品10.03mg，置10mL量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，即得1.00mg/mL對照品溶液。

供試品溶液制備:取博落回總堿胃內漂浮片10片，研細，混勻，取粉末約50mg，精密稱定，置50mL量瓶中，加乙腈40mL超聲提取30min，加乙腈定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，以0.45μm 的微孔濾膜濾過，濾液即為供試品溶液。

陰性供試品溶液的制備:按處方比例取不含博落回總堿的制劑輔料50.06mg，置于10mL容量瓶中，制成陰性供試品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性實驗

精密量取供試品溶液和陰性供試品溶液，按照2.1條件項下進行測定，進樣10μL作HPLC分析。色譜圖見圖1。由圖可見，輔料對白屈菜紅堿的測定無干擾。

2.3.2 線性關系考察

分別精密吸取2.2項下的白屈菜紅堿對照品溶液100、300、500、700、900μL 加乙腈定容至 10mL 量瓶中，制成濃度為 10.00、30.00、50.00、70.00、90.00μg/mL的白屈菜紅堿對照品溶液，分別精密吸取注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程:A=81794C－21495(R=0.9999)。圖2表明，白屈菜紅堿在濃度為10.00～90.00μg/mL之間具有良好的線性關系。

圖1 空白胃內漂浮片和博落回總堿胃內漂浮片的HPLC色譜圖

2.3.3 精密度實驗

精密量取對照品溶液按照2.1條件項下進樣10μL，連續進樣6次，測得對照品溶液白屈菜紅堿的平均峰面積為2465753，RSD=2.71%，表明精密度良好。

2.3.4 穩定性實驗

取2.2 項下制備的供試品溶液分別于0、2、4、6、8、12h，進行HPLC分析，記錄峰面積。結果峰面積無明顯變化，計算RSD為2.79%，表明樣品溶液在12h內穩定。

2.3.5 重復性實驗

平行稱取適量樣品6份，精密稱定，按照2.2項下操作得供試品溶液，測定峰面積。結果白屈菜紅堿的平均含量為3.21%，RSD為2.97%，表明重現性良好。

2.3.6 加樣回收率實驗

取片重差異檢測合格的博落回總堿胃內漂浮片10片，研細，混勻，精密稱取9份，每份約25mg，按照2.2項下操作得供試品溶液，分別精密加入標準品0.64、0.80、0.96mg 進樣測定，進樣量為 10μL，測得白屈菜紅堿的平均回收率為99.10%，RSD=1.91%。表明該方法加樣回收率合格。結果見表1。

回收率(%)=(測得白屈菜紅堿總量－樣品中白屈菜紅堿的含量)/加入白屈菜紅堿對照品量×100%

表1 回收率實驗結果

2.4 供試品含量測定

精密稱取供試品3批，按照2.2項下操作，得樣品溶液。然后按照2.1項下的色譜條件測定3次取平均值，計算含量。結果見表2。

表2 三批樣品測定結果

3 結論

本實驗在查閱大量白屈菜紅堿含量檢測方法的基礎上［1－3］，通過實驗考察，確定了一種漂浮片劑中白屈菜紅堿的含量測定方法，該法簡便快速、準確可靠，可作為博落回總堿胃內漂浮片的質量控制方法。

［1］李曉蒙，程力惠，劉慧瓊.HPLC法測定博落回藥材不同器官白屈菜紅堿含量［J］.亞熱帶植物科學，2008，37(2):41 －43.

［2］王曙光，滑培玲，王涵磊，等.HPLC法測定不同產地博落回中白屈菜紅堿和血根堿含量［J］.安徽醫藥，2011，15(4):434 －436.

［3］左金梁，白璐，宋欣鑫，等.Rp－HPLC法同時測定白屈菜藥材中血根堿、小檗堿和白屈菜紅堿的含量［J］.藥物分析雜志，2008，28(6):903－905.