復(fù)方苦參注射液對rBMSCs細(xì)胞增殖和遷移能力的影響

羅利瓊，胡 林，馮 剛

(1.武漢科技大學(xué)附屬天佑醫(yī)院 腫瘤科，武漢 430064；2.武漢市普愛醫(yī)院 腫瘤科，武漢 430033)

目前，越來越多研究示低氧環(huán)境培養(yǎng)能提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的增殖能力和遷移能力[1-3]。復(fù)方苦參注射液廣泛用于多種晚期腫瘤的治療和惡性胸腔積液治療等方面。在一定濃度藥物和不同氧濃度條件的作用下,BMSCs是否能繼續(xù)存活進(jìn)而發(fā)揮抗腫瘤的作用顯得很重要。為此，在前期試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步觀察攜帶目的基因的BMSCs在復(fù)方苦參注射液作用下和在常氧或缺氧條件下細(xì)胞增殖和遷移能力變化情況。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 材料 大鼠肝癌細(xì)胞株Walker-256細(xì)胞購自武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心；rBMSCs為普愛醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建和保存;復(fù)方苦參注射液購自購自山西振東制藥股份有限公司。

1.2 方法

1.2.1 MTT法 取對數(shù)生長期的rBMSCs種于96孔培養(yǎng)板,每組設(shè)12個復(fù)孔。置37 ℃常氧或低氧(5%)條件下，分別加入復(fù)方苦參注射液(濃度分別為300、200、100、50、25 μL/mL)，培養(yǎng)6、12、24、48、72 h后，每孔加入20 μL MTT液，37 ℃孵育4 h后吸棄培養(yǎng)液，用酶標(biāo)儀于570 nm波長下測量OD值。以不含復(fù)方苦參注射液組為陰性對照，以空白孔進(jìn)行調(diào)零。細(xì)胞存活率=(加藥組-空白組)/(對照組-空白組)×100%。

1.2.2 ELISA法 取對數(shù)生長期的Walker-256細(xì)胞種于24孔培養(yǎng)板，每組設(shè)6個復(fù)孔，待細(xì)胞貼壁完全后將Transwell小室放入24孔，在上室內(nèi)加入不含血清的rBMSCs。置37 ℃常氧或低氧(5%)條件下，分別在復(fù)方苦參注射液(濃度分別為300、200、100 μL/mL)培養(yǎng)12、24、48 h后，吸取Transwell小室中的培養(yǎng)液。用ELISA法對上清液中SDF-1進(jìn)行檢測。室溫顯色后用酶標(biāo)儀于450 nm處測吸光度值并制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定各樣本中含量。……