胸腺五肽對重度創傷失血性休克大鼠免疫功能的影響

邵仲達，張建新，陳朔華，蔡立松，張小平，程愛國

胸腺五肽對重度創傷失血性休克大鼠免疫功能的影響

邵仲達，張建新，陳朔華，蔡立松，張小平，程愛國

目的觀察胸腺五肽(TP-5)對重度創傷失血性休克大鼠免疫功能的影響。方法54只健康雄性SD大鼠隨機分為3組，即對照組(n=6)、重度創傷失血性休克模型組(模型組，n=24)、TP-5復蘇組(TP-5組，n=24)，在復蘇后12 h(T1)、24 h(T2)、48 h(T3)、72 h(T4)各時間窗抽取靜脈血，應用流式細胞儀測量T淋巴細胞亞群含量,并應用ELISA法測量腸道黏液內分泌性免疫球蛋白A(SIgA)含量。結果模型組與TP-5組病死率均為4.17%(1/24)，差異無統計學意義(P>0.05)。與對照組比較，模型組T1～4的CD+4、CD+4/CD+8、SIgA含量均明顯下降，CD+8明顯升高(P<0.01，P<0.05)；與模型組比較，TP-5組隨復蘇時間延長，各項指標逐漸恢復，差異有統計學意義(P<0.01，P<0.05)。結論早期聯合應用TP-5復蘇治療對重度創傷失血性休克大鼠免疫功能有一定保護作用。

休克，創傷失血性；免疫功能；胸腺五肽；分泌性免疫球蛋白A；大鼠

免疫功能損傷是創傷失血性休克后引起諸如感染及多器官功能衰竭等并發癥，導致遠期預后差的主要原因。胸腺五肽(thymopentin-5,TP-5)是人工合成的五肽片段，具有免疫調節功能，近年來在嚴重燒傷、肝臟疾病及產科危重癥的治療中取得了較好效果[1，2]。本研究利用重度創傷失血性休克動物模型，動態觀察復蘇后大鼠T淋巴細胞亞群及腸道黏膜分泌性免疫球蛋白A(SIgA)含量變化，探討TP-5對其免疫功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 動物及分組：健康雄性SD大鼠54只 (北京維通利華實驗動物技術有限公司提供)，月齡12周，體質量(300±10)g，在實驗中心動物房標準飼料喂養1周，而后隨機分為3組：對照組(n=6)，模型組(n=24)，胸腺五肽復蘇組(TP-5組，n=24)。儀器及試劑：外科手術顯微鏡(上海手術機械廠)，BL-410生物機能試驗系統(四川泰盟科技有限公司)，深低溫冰箱(美國Thermo Forma公司)，M/ETM型高速自動平衡離心機(美國SIGMA公司)，BioTek酶標儀(美國伯騰儀器有限公司)，FACSCalibur 流式細胞儀(美國Becton Dickinson公司)。單克隆抗體(美國Becton Dickinson公司)，淋巴細胞分離液(天津灝洋生物制品公司)，SIgA試劑盒(上海藍基生物科技有限公司)。

1.2 模型制作 所有大鼠術前禁食12 h，不禁水，手術室溫度保持在(25±2)℃。大鼠腹腔內注射10%水合氯醛0.35 ml/100 g麻醉后，將其仰臥固定于操作臺上，頸部和雙側腹股溝區備皮，0.5%碘伏消毒。逐層切開左側腹股溝區皮膚及皮下組織，分離出股靜脈行全身肝素化并置管用于復蘇，股動脈用于放血；頸部正中偏右側縱切口，逐層切開頸部皮膚及皮下組織，于氣管旁分離出右側頸總動脈，置管后接壓力換能器進行持續血流動力學監測。用特制咬骨鉗致大鼠股骨干中上1/3處開放性骨折，查無明顯出血后縫合切口。骨折后即經股動脈插管開始緩慢放血，于10 min內使平均動脈壓下降至(35±5)mm Hg,并通過繼續放血或回輸血液使血壓在(35±5)mm Hg維持90 min，造模完成。根據創傷嚴重度評分(ISS)標準[3]，本模型符合重度創傷失血性休克。

1.3 大鼠分組處理 對照組只分離組織并行血管插管，不進行放血及骨折，穩定10 min后開始取血液及病理取材；模型組造模完成后，靜脈回輸所放血液及2倍量的復方林格氏液進行復蘇治療并逐層縫合創口，待大鼠清醒后置于籠中，室溫(25±2)℃，自由進食及飲水；TP-5組造模完成后，在常規復蘇的基礎上腹腔注射胸腺五肽0.35 mg·kg-1·d-1，直至實驗結束。模型組按照常規復蘇及TP-5組治療后12 h(T1)、24 h(T2)、48 h(T3)和72 h(T4)分別取6只大鼠進行觀察。

1.4 指標測定

1.4.2 腸道黏液SIgA含量檢測： 各組大鼠下腔靜脈取血后顯露腸管，在距回盲部5 cm處向近端方向切取小腸組織，沿腸系膜緣剖開小腸，以細圓玻璃棒輕柔展平，長軸兩端用訂書釘固定于A4打印紙片上，用PBS緩沖液輕輕洗去腸壁上殘存糞便及污垢，用載玻片輕刮黏膜表面黏液，收集入1.5 ml離心管內，加入0.5 ml PBS緩沖液振蕩混勻, 水平離心1 000 r/min，10 min，取上清液，-20℃保存。待樣本收集后，采用酶聯免疫吸附法測定腸黏液內SIgA含量，嚴格按照說明書要求進行操作。

2 結 果

2.1 一般情況比較 各組大鼠的體質量、動脈放血量比較差異均無統計學意義(P>0.05)。模型組復蘇后病死率為4.17%(1/24)，TP-5組亦為4.17%(1/24)，2組差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠體質量、動脈放血量情況比較

3 討 論

嚴重創傷失血性休克是外科常見的重癥疾病，即使復蘇成功仍有相當高的病死率。研究表明，創傷失血性休克患者免疫功能紊亂[4]，腸黏膜屏障功能損傷[5]，引起腸道內細菌、毒素易位，甚至全身性炎性反應及多器官功能障礙。因此改善機體的免疫功能、防止內源性感染，越來越受到重視。

表2 各組大鼠T淋巴細胞亞群、SIgA比較

注：與對照組比較，*P<0.05，#P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，☆P<0.01

TP-5是人工合成的五肽片段，與胸腺生成素II的32～36位氨基酸順序相同，具有其全部的生物學功能，是雙向免疫調節劑。近年來廣泛應用于嚴重燒傷、肝臟疾病及產科危重癥等[1，2]，但治療休克較少報道。因此本研究建立臨床重度創傷失血性休克模型，探討TP-5對休克復蘇后免疫功能的影響。

綜上所述，TP-5有效改善休克復蘇后機體的免疫功能，維護腸道黏膜屏障作用，有助于阻斷瀑布樣連鎖反應，降低膿毒血癥發生機會，而TP-5免疫調理功能的量效關系及藥物聯合應用尚需進一步研究。

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TheeffectsofTP-5resuscitatingserioustraumatichemorrhagicshockonimmunefunctioninrats

SHAOZhongda*,ZHANGJianxin,CHENShuohua,CAILisong,ZHANGXiaoping,CHENGAiguo.

*DepartmentofPostgraduates,HebeiUnitedUniversity(nowworkingatDepartmentofAnesthesiology,KailuanHospitalofOccupationalDisease),Tangshan063000,China

ZHANGXiaoping,E-mail:xpzh55@sohu.com

ObjectiveTo investigate the influence of TP-5 on immune function of rats with severe traumatic hemorrhagic shock.Methods54 healthy male SD rats were randomly divided into three groups, the control group(n=6), severe traumatic hemorrhagic shock model (model group,n=24), TP-5 resuscitation group(TP-5 group,n=24), in recovery after 12 (T1), 24 (T2), 48 (T3), 72 (T4) each time window picked up venous blood, used flow cytometry to measure the content of T lymphocyte subsets and used ELISA to measure SIgA content within intestinal mucus.ResultsModel group and TP-5 group's mortality rate were 4.17% (1/24), the difference was not statistically significant (P>0.05). Compared with the control group, model group T1-4of CD+4,CD+4/CD+8,SIgA levels were significantly decreased,CD+8was significantly higher (P<0.01,P<0.05); compared with the model group, TP-5 group with prolonged recovery, the index gradually recovered, significantly better than the model group (P<0.01,P<0.05).ConclusionCombined TP-5 early resuscitation of severe traumatic hemorrhagic shock in rats immune function have a protective effect.

Shock,traumatic hemorrhagic; Immune function; Thymopentin; Secretory immunoglobulin A; Rats

063000 唐山，河北聯合大學研究生部(邵仲達，現就職于開灤職業病防治院麻醉科)； 河北聯合大學附屬開灤 總醫院麻醉科(張建新、陳朔華、蔡立松)； 河北聯合大學附屬醫院麻醉科(張小平、程愛國)

張小平，E-mail:xpzh55@sohu.com

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.05.020

2014-02-11)