依達拉奉對腦出血大鼠血腫周圍組織NF-κB p65蛋白表達的影響

趙彬+王玉芳+陳桂華+張晉霞+李世英+劉玉玲+張玉芹+劉斌

[摘要] 目的 探討依達拉奉對腦出血大鼠血腫周圍組織NF-κB p65蛋白表達的影響。 方法 108只健康雄性Wistar大鼠隨機分為正常組、假手術組、腦出血組和依達拉奉治療組，其中腦出血組和依達拉奉治療組又分為3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d 8個亞組，每組6只。采用大鼠尾動脈自體不凝血50 μL注入尾狀核區建立腦出血模型。依達拉奉治療組于模型制作成功后2 h開始腹腔內注射3 mg/kg依達拉奉，1次/d。免疫組化法檢測NF-κB p65蛋白表達變化。 結果 與腦出血組相比，依達拉奉治療組于出血后 6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d血腫周圍組織NF-κB p65蛋白表達均減少（P < 0.05或P < 0.01）。 結論 依達拉奉對腦出血后血腫周圍腦組織損傷有保護作用，可能與其抑制NF-κB p65蛋白表達有關。

[關鍵詞] 腦出血；NF-κB p65蛋白；依達拉奉

[中圖分類號] R743.34[文獻標識碼] A[文章編號] 1673-7210（2014）05（c）-0017-03

Effect of Edaravone on NF-κB p65 protein expression in perihematoma of rats with intracerebral hemorrhage

ZHAO Bin1 WANG Yufang2 CHEN Guihua2 ZHANG Jinxia2 LI Shiying2 LIU Yuling2 ZHANG Yuqin2 LIU Bin2

1.School Infirmary, Hebei United University, Hebei Province, Tangshan 063000, China; 2.The First Department of Neurology, the Affiliated Hospital of Hebei United University, Hebei Province, Tangshan 063000, China

[Abstract] Objective To investigate the effect of Edaravone on the NF-κB p65 protein expression in perihematoma of rats with intracerebral hemorrhage (ICH). Methods 108 healthy adult Wistar rats were randomly divided into normal group, sham group, ICH group, Edaravon treatment group. The ICH group and Edaravon treatment group were randomly divided into 3 h, 6 h, 12 h, 1 d, 2 d, 3 d, 5 d, 7 d subgroups respectively after ICH, each group had 6 rats. ICH models were prepared by injecting 50 μL of autogenous blood into the right caudate nucleus of rats. Edaravon treatment group after ICH 2 h were given 3 mg/kg Edaravon by intraperitoneal injection, 1 time/d. The expression of NF-κB p65 protein was observed by immunohistochemistry. Results Compared with ICH group, the expression of NF-κB p65 protein in Edaravone treatment group were weakened at 6 h, 12 h, 1 d, 2 d, 3 d, 5 d and 7 d after ICH (P < 0.05 or P < 0.01). Conclusion Edaravon has a protective effect on perihematoma brain tissues after ICH, it may be related to the inhibition of NF-κB p65 protein expression.

[Key words] Cerebral hemorrhage; NF-κB p65 protein; Edaravone

腦出血（intracerebral hemorrhage，ICH）是神經內科常見病、多發病，嚴重威脅人類的生命和健康。腦出血后影響患者存活，且致殘率高，主要原因包括腦血腫對血腫周圍神經組織的物理損傷以及血腫的占位效應，另外還與血腫周圍神經組織的繼發性損害有關[1]。腦出血后的繼發性損害機制較復雜，許多病理生理機制參與其中。有研究表明，炎性反應在腦損傷的發展中具有重要作用[2]。核轉錄因子NF-κB（nuclear factor kappa-B）是一種具有多種調節作用的免疫反應蛋白，與機體的免疫應答、細胞的增生和凋亡及炎性反應等重要的病理生理過程密切相關，其中，NF-κB p65是重要的核轉錄因子，在腦出血后損傷中具有重要作用[3]。依達拉奉（Edaravone）是一種新型腦保護劑，可抑制脂質過氧化，清除自由基，從而抑制神經細胞的氧化損傷，具有抗細胞凋亡和神經保護作用[4]。研究表明，依達拉奉在治療腦出血方面效果確切[5]。本研究通過制作腦出血大鼠模型，并給予依達拉奉藥物治療，觀察依達拉奉對腦出血大鼠血腫周圍組織NF-κB p65蛋白表達的影響，進一步探討依達拉奉對腦出血后腦組織損害的保護機制，為依達拉奉臨床治療腦出血提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康雄性Wistar大鼠108只，體重250～300 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號：Scxk（京）-2013-0001。

1.2 主要試劑

NF-κB p65多克隆抗體由北京中杉金橋生物技術有限公司提供。依達拉奉注射液由南京先聲藥業公司生產，批號：040181，規格10 mg/5 mL。

1.3 模型制作

按照李慧等[6]報道的方法制作腦出血大鼠模型。術前大鼠需禁食、水，腹腔注射100 g/L水合氯醛麻醉，然后俯臥位固定于立體定位儀上，消毒切皮暴露前囟后，以其中央為原點，取其后方1.4 mm，中線右側旁3.2 mm處鉆一小孔（直徑為1 mm）至顱骨下硬膜，鼠尾消毒后斷尾取自體血50 μL，用微量注射器沿鉆孔方向垂直進針，深約5.6 mm，緩慢均速將自體血（50 μL）推注入腦，留針10 min后退出，并用醫用骨蠟封閉骨孔，縫合頭皮，加壓包扎尾部。假手術組除不注射自體血外，余操作同上。模型成功的標準：①大鼠爬行時向左側傾倒或按逆時針方向轉圈；②提尾時大鼠左側前肢內收屈曲。

1.4 分組及給藥方法

實驗動物隨機分為正常組、假手術組、腦出血模型組（腦出血組）和依達拉奉治療組，其中，腦出血組和依達拉奉治療組根據動物處死時間分為3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d共8個亞組，每組6只。依達拉奉治療組于模型制作成功后2 h開始按3 mg/kg腹腔內注射依達拉奉，1次/d，用藥到試驗結束。假手術組和腦出血組腹腔內注射等量生理鹽水。

1.5 標本制備

各組取相應時相點大鼠，以100 g/L水合氯醛（300 mg/kg）腹腔麻醉致死，仰臥固定于操作臺上，切皮打開胸腔，暴露心臟，灌注針從心尖插入至左心室，并剪開右心耳，快速滴入37℃生理鹽水液約300 mL，去除血污后滴入固定液（4℃多聚甲醛400 mL）。待鼠尾完全僵直，迅速斷頭后取出腦組織，于4%多聚甲醛溶液中固定12～24 h，進行脫水透明及石蠟包埋。冠狀面連續切片（厚度約3 μm），用經多聚賴氨酸處理的載玻片撈片，晾干后置于60℃的烤箱中烘烤備用。

1.6 NF-κB p65蛋白檢測

采用免疫組織化學法檢測NF-κB p65蛋白的表達情況，操作步驟嚴格按試劑說明書進行。陽性標準：鏡下觀察，NF-κB p65因子染色呈棕黃色顆粒，位于胞漿內。取血腫周圍腦組織不重疊的6個視野，于高倍鏡下觀察，用高清晰度彩色病理圖像分析系統計數NF-κB p65的陽性細胞數，取其平均值。

1.7 統計學方法

以Excel數據庫整理后用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

正常組和假手術組只見少量的NF-κB p65蛋白陽性細胞表達，由于數量極少，故未進行統計學分析。腦出血組在腦出血后3 h即有NF-κB p65陽性細胞表達，隨著出血時間的延長陽性細胞表達逐漸增多，出血后12 h明顯增多，出血后2 d表達達高峰，出血后3 d陽性細胞表達逐漸減少。依達拉奉治療組于出血后3 h有NF-κB p65陽性細胞表達，出血后2 d表達最高，出血后3 d開始下降。與腦出血組相比，依達拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性細胞在腦出血后3 h未見減少（P > 0.05），在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d時表達均明顯減少，差異有統計學意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表1。

3 討論

核因子NF-κB是從B細胞核提取物中發現的一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強子κB序列特異結合的蛋白因子[7]，最為典型的NF-κB是由P50和P65（RelA）亞基組成，具有多種調節作用。通常情況下，NF-κB與抑制蛋白相結合以非活性形式存在于胞漿內，在細胞接受胞外氧自由基等刺激信號后，NF-κB可被激活而迅速由胞漿移向胞核，與相應DNA上的κB序列發生特異性結合，促進相關基因的轉錄，進而在細胞的增殖、分化、細胞凋亡的調節以及炎癥的發生等方面發揮重要作用[8-9]。NF-κB在多種疾病的發生、發展過程中起著重要的作用。顧萍等[10]建立大鼠腦出血模型發現，NF-κB p65蛋白陽性細胞于術后6 h開始增多，48 h達高峰，持續到96 h仍有較多表達，與細胞凋亡呈正相關。本研究實驗結果顯示，大鼠腦出血后3 h血腫周圍腦組織即有少量NF-κ B p65蛋白陽性表達，在術后6 h增多，2 d達高峰，3 d后逐漸下降。同時，本研究觀察到NF-κB p65蛋白陽性細胞主要表達于細胞凋亡較重的區域。本研究結果與顧萍等[10]的報道結果基本一致。說明NF-κB p65參與了腦出血后血腫周圍腦組織細胞損傷的病理過程。

依達拉奉是一親脂性基團，其相對分子量為174.20，在體內以陰離子形式存在，可轉移一個電子給自由基而產生依達拉奉基團，切斷脂質過氧化反應鏈，對神經細胞具有保護作用[11]。依達拉奉是目前臨床試驗證明唯一有效的自由基清除劑，在包括腦血管疾病、顱腦外傷等在內的中樞神經系統疾病中發揮重要的神經保護作用[12-13]。依達拉奉可抑制腦出血后血腫周圍神經細胞凋亡，對腦出血后腦組織起到神經保護作用[14-15]。本研究通過對腦出血大鼠進行依達拉奉干預，結果表明，依達拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性表達在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d均明顯減少。提示依達拉奉可通過抑制NF-κB p65蛋白的表達，對腦出血后腦組織損傷有保護作用。

[參考文獻]

[1]張云，劉斌.腦出血后繼發性腦損傷的細胞凋亡機制研究進展[J].中國康復醫學雜志，2007，22（12）：1130-1133.

[2]Hou J，Manaenko A，Hakon J，et al. Liraglutide，a long acting GLP 1 mimetic， and it smet abolite attenuate inflammation after in tracerebral hem orrhage [J]. J Cereb Blood Flow Metab，2012，32（12）：2201 .

[3]楊德剛，陳應柱，吳碧華，等.抑肽酶對大鼠腦出血血腫周圍組織核轉錄因子表達的影響[J].臨床神經病學雜志，2008，21（4）：287-289.

[4]Shimon A，Tatsushi K，Chikako N，et al. Anti-apoptotic and neuroprotective effects of edaravone following transient focal ischemia in rats [J]. Eur J Pharmacol，2005，516（2）：125-130.

[5]韋道祥，桑道乾，吳國林，等.依達拉奉治療急性腦出血的療效觀察[J].中華全科醫學，2009，7（4）：345-346.

[6]李慧，婁季宇，楊霄鵬. 實驗性腦出血動物模型[J].中國實用神經疾病雜志，2007，10（2）：152-153.

[7]Sen R，Baltimore D. Multiple nuclear factors interact with the immunoglobulin enhancer sequences [J]. Cell，1986，46（5）：705-716.

[8]宋祖軍，王少波，王琦，等.NF-κB的研究進展[J].世界急危重病醫學雜志，2007，4（1）：1693-1696.

[9]于明，包曉群.依達拉奉對Aβ25-35 誘導分化PC12細胞NF-κB p65基因表達的影響[J].中國老年學雜志，2008， 28（22）：2199-2201.

[10]顧萍，張勇，丁新生，等.尼莫同對腦出血大樹血腫周圍核轉錄因子-κB表達的影響[J].南京醫科大學學報：自然科學版，2006，26（3）：153-155.

[11]Masahiro B，Tetsuya M，Hideki K，et al. The radical scavenger edaravone prevents oxidative neurotoxicity induced by peroxynitrite and activated microglia [J]. Neuropharm，2005，4（3）：283-290.

[12]Liu XY，Yao LL，Chen YJ，et al. Survivin is involved in the anti-apoptotic effect of edaravone in PC12 cells [J]. Mol Cell Biochem，2009，327（1/2）：21-28.

[13]Itoh T，Satou T，Nishida S，et al. Edaravone protects against apoptotic neuronal cell death and improves cerebral function after traumatic brain injury in rats[J]. Neurochem Res，2010，35（2）：348-355．

[14]劉斌，趙紫燁，李建民，等.依達拉奉對腦出血大鼠血腫周圍組織細胞凋亡及P38M-APK蛋白表達的影響[J].中國藥房，2010，21（13）：1173-1175.

[15]趙彬，劉斌，張玉芹.依達拉奉對腦出血大鼠血腫周圍組織Caspase-3和Pdcd-5蛋白表達的影響[J].天津醫藥，2012，40（5）：483-485.

（收稿日期：2014-03-12本文編輯：程銘）

[基金項目] 河北省唐山市科學技術研究與發展計劃課題(編號10150204A-24)。

[通訊作者] 劉斌（1964.9-），男，碩士，主任醫師；研究方向：腦血管病基礎與臨床。

1.4 分組及給藥方法

實驗動物隨機分為正常組、假手術組、腦出血模型組（腦出血組）和依達拉奉治療組，其中，腦出血組和依達拉奉治療組根據動物處死時間分為3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d共8個亞組，每組6只。依達拉奉治療組于模型制作成功后2 h開始按3 mg/kg腹腔內注射依達拉奉，1次/d，用藥到試驗結束。假手術組和腦出血組腹腔內注射等量生理鹽水。

1.5 標本制備

各組取相應時相點大鼠，以100 g/L水合氯醛（300 mg/kg）腹腔麻醉致死，仰臥固定于操作臺上，切皮打開胸腔，暴露心臟，灌注針從心尖插入至左心室，并剪開右心耳，快速滴入37℃生理鹽水液約300 mL，去除血污后滴入固定液（4℃多聚甲醛400 mL）。待鼠尾完全僵直，迅速斷頭后取出腦組織，于4%多聚甲醛溶液中固定12～24 h，進行脫水透明及石蠟包埋。冠狀面連續切片（厚度約3 μm），用經多聚賴氨酸處理的載玻片撈片，晾干后置于60℃的烤箱中烘烤備用。

1.6 NF-κB p65蛋白檢測

采用免疫組織化學法檢測NF-κB p65蛋白的表達情況，操作步驟嚴格按試劑說明書進行。陽性標準：鏡下觀察，NF-κB p65因子染色呈棕黃色顆粒，位于胞漿內。取血腫周圍腦組織不重疊的6個視野，于高倍鏡下觀察，用高清晰度彩色病理圖像分析系統計數NF-κB p65的陽性細胞數，取其平均值。

1.7 統計學方法

以Excel數據庫整理后用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

正常組和假手術組只見少量的NF-κB p65蛋白陽性細胞表達，由于數量極少，故未進行統計學分析。腦出血組在腦出血后3 h即有NF-κB p65陽性細胞表達，隨著出血時間的延長陽性細胞表達逐漸增多，出血后12 h明顯增多，出血后2 d表達達高峰，出血后3 d陽性細胞表達逐漸減少。依達拉奉治療組于出血后3 h有NF-κB p65陽性細胞表達，出血后2 d表達最高，出血后3 d開始下降。與腦出血組相比，依達拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性細胞在腦出血后3 h未見減少（P > 0.05），在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d時表達均明顯減少，差異有統計學意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表1。

3 討論

核因子NF-κB是從B細胞核提取物中發現的一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強子κB序列特異結合的蛋白因子[7]，最為典型的NF-κB是由P50和P65（RelA）亞基組成，具有多種調節作用。通常情況下，NF-κB與抑制蛋白相結合以非活性形式存在于胞漿內，在細胞接受胞外氧自由基等刺激信號后，NF-κB可被激活而迅速由胞漿移向胞核，與相應DNA上的κB序列發生特異性結合，促進相關基因的轉錄，進而在細胞的增殖、分化、細胞凋亡的調節以及炎癥的發生等方面發揮重要作用[8-9]。NF-κB在多種疾病的發生、發展過程中起著重要的作用。顧萍等[10]建立大鼠腦出血模型發現，NF-κB p65蛋白陽性細胞于術后6 h開始增多，48 h達高峰，持續到96 h仍有較多表達，與細胞凋亡呈正相關。本研究實驗結果顯示，大鼠腦出血后3 h血腫周圍腦組織即有少量NF-κ B p65蛋白陽性表達，在術后6 h增多，2 d達高峰，3 d后逐漸下降。同時，本研究觀察到NF-κB p65蛋白陽性細胞主要表達于細胞凋亡較重的區域。本研究結果與顧萍等[10]的報道結果基本一致。說明NF-κB p65參與了腦出血后血腫周圍腦組織細胞損傷的病理過程。

依達拉奉是一親脂性基團，其相對分子量為174.20，在體內以陰離子形式存在，可轉移一個電子給自由基而產生依達拉奉基團，切斷脂質過氧化反應鏈，對神經細胞具有保護作用[11]。依達拉奉是目前臨床試驗證明唯一有效的自由基清除劑，在包括腦血管疾病、顱腦外傷等在內的中樞神經系統疾病中發揮重要的神經保護作用[12-13]。依達拉奉可抑制腦出血后血腫周圍神經細胞凋亡，對腦出血后腦組織起到神經保護作用[14-15]。本研究通過對腦出血大鼠進行依達拉奉干預，結果表明，依達拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性表達在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d均明顯減少。提示依達拉奉可通過抑制NF-κB p65蛋白的表達，對腦出血后腦組織損傷有保護作用。

[參考文獻]

[1]張云，劉斌.腦出血后繼發性腦損傷的細胞凋亡機制研究進展[J].中國康復醫學雜志，2007，22（12）：1130-1133.

[2]Hou J，Manaenko A，Hakon J，et al. Liraglutide，a long acting GLP 1 mimetic， and it smet abolite attenuate inflammation after in tracerebral hem orrhage [J]. J Cereb Blood Flow Metab，2012，32（12）：2201 .

[3]楊德剛，陳應柱，吳碧華，等.抑肽酶對大鼠腦出血血腫周圍組織核轉錄因子表達的影響[J].臨床神經病學雜志，2008，21（4）：287-289.

[4]Shimon A，Tatsushi K，Chikako N，et al. Anti-apoptotic and neuroprotective effects of edaravone following transient focal ischemia in rats [J]. Eur J Pharmacol，2005，516（2）：125-130.

[5]韋道祥，桑道乾，吳國林，等.依達拉奉治療急性腦出血的療效觀察[J].中華全科醫學，2009，7（4）：345-346.

[6]李慧，婁季宇，楊霄鵬. 實驗性腦出血動物模型[J].中國實用神經疾病雜志，2007，10（2）：152-153.

[7]Sen R，Baltimore D. Multiple nuclear factors interact with the immunoglobulin enhancer sequences [J]. Cell，1986，46（5）：705-716.

[8]宋祖軍，王少波，王琦，等.NF-κB的研究進展[J].世界急危重病醫學雜志，2007，4（1）：1693-1696.

[9]于明，包曉群.依達拉奉對Aβ25-35 誘導分化PC12細胞NF-κB p65基因表達的影響[J].中國老年學雜志，2008， 28（22）：2199-2201.

[10]顧萍，張勇，丁新生，等.尼莫同對腦出血大樹血腫周圍核轉錄因子-κB表達的影響[J].南京醫科大學學報：自然科學版，2006，26（3）：153-155.

[11]Masahiro B，Tetsuya M，Hideki K，et al. The radical scavenger edaravone prevents oxidative neurotoxicity induced by peroxynitrite and activated microglia [J]. Neuropharm，2005，4（3）：283-290.

[12]Liu XY，Yao LL，Chen YJ，et al. Survivin is involved in the anti-apoptotic effect of edaravone in PC12 cells [J]. Mol Cell Biochem，2009，327（1/2）：21-28.

[13]Itoh T，Satou T，Nishida S，et al. Edaravone protects against apoptotic neuronal cell death and improves cerebral function after traumatic brain injury in rats[J]. Neurochem Res，2010，35（2）：348-355．

[14]劉斌，趙紫燁，李建民，等.依達拉奉對腦出血大鼠血腫周圍組織細胞凋亡及P38M-APK蛋白表達的影響[J].中國藥房，2010，21（13）：1173-1175.

[15]趙彬，劉斌，張玉芹.依達拉奉對腦出血大鼠血腫周圍組織Caspase-3和Pdcd-5蛋白表達的影響[J].天津醫藥，2012，40（5）：483-485.

（收稿日期：2014-03-12本文編輯：程銘）

[基金項目] 河北省唐山市科學技術研究與發展計劃課題(編號10150204A-24)。

[通訊作者] 劉斌（1964.9-），男，碩士，主任醫師；研究方向：腦血管病基礎與臨床。

1.4 分組及給藥方法

實驗動物隨機分為正常組、假手術組、腦出血模型組（腦出血組）和依達拉奉治療組，其中，腦出血組和依達拉奉治療組根據動物處死時間分為3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d共8個亞組，每組6只。依達拉奉治療組于模型制作成功后2 h開始按3 mg/kg腹腔內注射依達拉奉，1次/d，用藥到試驗結束。假手術組和腦出血組腹腔內注射等量生理鹽水。

1.5 標本制備

各組取相應時相點大鼠，以100 g/L水合氯醛（300 mg/kg）腹腔麻醉致死，仰臥固定于操作臺上，切皮打開胸腔，暴露心臟，灌注針從心尖插入至左心室，并剪開右心耳，快速滴入37℃生理鹽水液約300 mL，去除血污后滴入固定液（4℃多聚甲醛400 mL）。待鼠尾完全僵直，迅速斷頭后取出腦組織，于4%多聚甲醛溶液中固定12～24 h，進行脫水透明及石蠟包埋。冠狀面連續切片（厚度約3 μm），用經多聚賴氨酸處理的載玻片撈片，晾干后置于60℃的烤箱中烘烤備用。

1.6 NF-κB p65蛋白檢測

采用免疫組織化學法檢測NF-κB p65蛋白的表達情況，操作步驟嚴格按試劑說明書進行。陽性標準：鏡下觀察，NF-κB p65因子染色呈棕黃色顆粒，位于胞漿內。取血腫周圍腦組織不重疊的6個視野，于高倍鏡下觀察，用高清晰度彩色病理圖像分析系統計數NF-κB p65的陽性細胞數，取其平均值。

1.7 統計學方法

以Excel數據庫整理后用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

正常組和假手術組只見少量的NF-κB p65蛋白陽性細胞表達，由于數量極少，故未進行統計學分析。腦出血組在腦出血后3 h即有NF-κB p65陽性細胞表達，隨著出血時間的延長陽性細胞表達逐漸增多，出血后12 h明顯增多，出血后2 d表達達高峰，出血后3 d陽性細胞表達逐漸減少。依達拉奉治療組于出血后3 h有NF-κB p65陽性細胞表達，出血后2 d表達最高，出血后3 d開始下降。與腦出血組相比，依達拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性細胞在腦出血后3 h未見減少（P > 0.05），在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d時表達均明顯減少，差異有統計學意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表1。

3 討論

核因子NF-κB是從B細胞核提取物中發現的一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強子κB序列特異結合的蛋白因子[7]，最為典型的NF-κB是由P50和P65（RelA）亞基組成，具有多種調節作用。通常情況下，NF-κB與抑制蛋白相結合以非活性形式存在于胞漿內，在細胞接受胞外氧自由基等刺激信號后，NF-κB可被激活而迅速由胞漿移向胞核，與相應DNA上的κB序列發生特異性結合，促進相關基因的轉錄，進而在細胞的增殖、分化、細胞凋亡的調節以及炎癥的發生等方面發揮重要作用[8-9]。NF-κB在多種疾病的發生、發展過程中起著重要的作用。顧萍等[10]建立大鼠腦出血模型發現，NF-κB p65蛋白陽性細胞于術后6 h開始增多，48 h達高峰，持續到96 h仍有較多表達，與細胞凋亡呈正相關。本研究實驗結果顯示，大鼠腦出血后3 h血腫周圍腦組織即有少量NF-κ B p65蛋白陽性表達，在術后6 h增多，2 d達高峰，3 d后逐漸下降。同時，本研究觀察到NF-κB p65蛋白陽性細胞主要表達于細胞凋亡較重的區域。本研究結果與顧萍等[10]的報道結果基本一致。說明NF-κB p65參與了腦出血后血腫周圍腦組織細胞損傷的病理過程。

依達拉奉是一親脂性基團，其相對分子量為174.20，在體內以陰離子形式存在，可轉移一個電子給自由基而產生依達拉奉基團，切斷脂質過氧化反應鏈，對神經細胞具有保護作用[11]。依達拉奉是目前臨床試驗證明唯一有效的自由基清除劑，在包括腦血管疾病、顱腦外傷等在內的中樞神經系統疾病中發揮重要的神經保護作用[12-13]。依達拉奉可抑制腦出血后血腫周圍神經細胞凋亡，對腦出血后腦組織起到神經保護作用[14-15]。本研究通過對腦出血大鼠進行依達拉奉干預，結果表明，依達拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性表達在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d均明顯減少。提示依達拉奉可通過抑制NF-κB p65蛋白的表達，對腦出血后腦組織損傷有保護作用。

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（收稿日期：2014-03-12本文編輯：程銘）

[基金項目] 河北省唐山市科學技術研究與發展計劃課題(編號10150204A-24)。

[通訊作者] 劉斌（1964.9-），男，碩士，主任醫師；研究方向：腦血管病基礎與臨床。