三種大鼠脂肪肝模型的比較研究

葉虹婷 榮勝忠 靳 革

三種大鼠脂肪肝模型的比較研究

葉虹婷 榮勝忠 靳 革

目的 采用大鼠進行不同建模，并比較研究全面，尋找最佳的脂肪肝造模方法。方法 Wistar大鼠隨機分四組：陰性對照組飼以普通飼料；模型A、B、C組飼以高脂飼料，A、B組分別每日以50%、40%乙醇灌胃；C組后肢皮下注射四氯化碳。實驗7周，以斷髓法處死大鼠，觀察三種脂肪肝模型的肝臟病理學改變并進行比較分析。結果 A、B、C三組大鼠肝指數無明顯差異，A組大鼠肝臟出現彌漫性中度脂肪變性，匯管區可見炎性細胞浸潤；B組大鼠肝臟出現輕度脂肪變性，胞漿中可見大小不等的脂肪空泡； C組大鼠肝臟出現輕度脂肪變性，肝小葉可見點灶狀肝細胞壞死，淋巴細胞浸潤。結論 C組的造模方法簡便易行，模型復制率高，為制備動物脂肪肝模型的首選。

脂肪肝；動物模型；大鼠

深入研究脂肪性肝疾病的發生機制、篩選防治脂肪肝的有效藥物，首先必須選擇一種理想的動物模型，其應與人類脂肪肝病特征相似，模型形成率高、病死率低、造模方法簡便易行。本實驗使用三種不同方法建立脂肪肝動物模型，旨在尋找最佳的脂肪肝造模方法，為今后的研究提供適宜的動物模型。

1 材料與方法

1.1 動物 選取健康Wistar大鼠40只，雄性25只，雌性15只，體重188～370 g。由牡丹江醫學院動物室提供。

1.2 試劑 50%乙醇、40%的乙醇（沈陽新興試劑廠生產的分析純乙醇溶液，加蒸餾水稀釋而成）；40%的四氯化碳（CC14）溶液（天津化學試劑廠生產的四氯化碳溶液，加菜籽油稀釋而成CC14）。

1.3 飼料 90%基礎飼料（牡丹江醫學院實驗中心提供）加10%豬油（自制）。

1.4 方法 將40只Wistar大鼠隨機分成四組，其中模型A、B、C組分別為11只，陰性對照組為7只，按體重相近原則每2只一籠飼養。模型A、B、C組飼以高脂飼料，其中A、B組分別每日以50%、40%乙醇灌胃，C組后肢皮下注射CCl4。對照組使用基礎飼料，每日按1 ml/100g體重以0.9%氯化鈉注射液灌胃；動物建模7周，若在此期間死亡計入死亡率，實驗結束前1 d晚上禁食，稱重，斷髓法處死，取肝臟稱重。于肝中葉剪下8 mm×8 mm×4 mm大小的組織塊，用80%乙醇固定，送病理室制成病理切片。

1.5 統計學方法 采用SPSS 16.0軟件進行統計學處理，病死率比較采用χ2檢驗，肝指數比較采用F分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 成模率比較 模型A、B、C組大鼠病死率分別為27.3%、27.3%、18.2%，實驗結束時總病死率為20.0%。死亡原因主要有初期注酒速度太快、超量，致吸入性肺炎和急性酒精中毒死亡。A、B、C三組模型組大鼠病死率差異無統計學意義（χ2=0.04，P＞0.05），見表1。

表1 四組大鼠的死亡率(n,%)

2.2 肝重與體重比例 肝指數以肝組織濕重/體重×100%計算，見表2。陰性對照組及模型A、B、C組大鼠肝指數差異無統計學意義（F=0.71，P＞0.05）。

表2 四組大鼠的肝指數(±s)

表2 四組大鼠的肝指數(±s)

組別 動物只數 肝指數(%) F值 P值模型A組模型B組模型C組陰性對照組7687 3.7±0.7 3.4±0.4 3.7±0.4 3.7±0.40.71＞0.06

2.3 手術所見 模型組肝臟表面包膜緊繃，陰性對照組光滑質地柔軟。模型組有可觸及小顆粒，壓迫時可出現凹陷，表面色澤較蒼白或帶灰黃色，有油膩感。對照組切面未見黃色脂滴，組織結構較緊密，刀切時，硬度正常，刀面無沾染。

2.4 病理學顯示 陰性對照組：肝細胞為多角形，胞漿嗜酸性著色，細胞核呈圓形，位于細胞的中央。肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀整齊排列。模型A組：肝臟彌漫性中度脂肪變性，在肝細胞胞漿中可見大小不等的脂肪空泡，細小空泡位于細胞核周圍，較大空泡位于胞漿一側，肝小葉結構未見明顯異常。在匯管區可見炎性細胞浸潤，見圖1。模型B組：肝臟部分肝小葉輕度脂肪變性，在肝細胞胞漿中可見大小不等的脂肪空泡,細小空泡位于細胞核周圍，較大空泡位于胞漿一側。模型C組：肝臟彌漫性輕度脂肪變性，在肝細胞胞漿中可見大小不等的脂肪空泡，肝小葉結構未見明顯異常。此外在肝小葉可見點灶狀肝細胞壞死，淋巴細胞浸潤，匯管區也可見淋巴細胞浸潤，見圖2。

圖1 模型A組大鼠的肝臟組織學結構（HE染色×40）

圖2 模型C組大鼠的肝臟組織學結構（HE染色×40）

3 討論

脂肪肝從病因學上大體可分為酒精性和非酒精性脂肪肝[1]。要更好的對脂肪肝進行研究，就必須有較理想的動物模型。在脂肪肝的實驗研究中，常利用乙醇灌胃、高脂飲食、注射藥物或毒物等復制脂肪肝的動物模型。國內多采用趙靜波等[2]的方法，給健康成熟雄性Wistar大鼠，用白酒灌胃，每次7 ml/kg體重，每日2次。1～2周后大鼠出現急性酒精性肝損傷表現。造模時間一般不超過10 d。但病死亡率較高。后肢皮下注射CCl4加喂食高脂飲食建立脂肪肝模型原理為CCl4進入體內后，影響代謝及能量的生成，使肝細胞發生變性、壞死，以及迅速出現脂肪變性、肝壞死等形態學改變[3]。三種造模方法都能成功建立脂肪肝模型，但是模型A、B組應用乙醇灌胃，實驗動物易死亡；后肢皮下注射CCl4加高脂膳食建立大鼠脂肪肝模型的方法[4]，與人體慢性肝損傷過程在某些方面相似，且造模方法簡便易行，模型復制率高，為急性中毒性脂肪肝模型的首選，是一種較好的造模方法。

[1] 孫璇.脂肪肝動物模型述評[J].中西醫結合肝病雜志,1998(1): 251-253.

[2] 李東良,王玉枚.大鼠酒精性肝損傷模型的建立及病理學觀察[J].實用肝臟病雜志,1998,3(4):207-208.

[3] 周玉娟,劉福林,張永健.脂肪肝的發病機制和治療研究進展[J].臨床薈萃,2005,20(6):350-352.

[4] 鐘嵐,范建高.非酒精性脂肪肝動物模型[J].國外醫學消化分冊,1996,31(1):27-27.

R-332

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1673-5846(2014)07-0266-02

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