野菊花提取物耐缺氧能力實驗研究

魏昌玲

野菊花提取物耐缺氧能力實驗研究

魏昌玲

野菊花；耐缺氧；心肌缺氧；小鼠

野菊花為雙子葉植物，在我國大部分地區廣泛分布，主要化學成分有萜類、揮發油和野菊花黃酮類[1]。具有疏風、清熱、明目、解毒的功效，主要治療頭痛、眩暈、目赤、心胸煩熱、療瘡、腫毒等癥[2]。近代研究表明，野菊花有抗病原微生物、保護心肌、降血壓、抗氧化等藥理作用[3]。為進一步了解野菊花的藥理作用，本文對野菊花的耐缺氧能力進行了初步研究。

1 材料與試劑

1.1 動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由泰邦科技生物有限公司提供，動物合格證號：20030011。

1.2 藥品 野菊花由濟寧邦爾中藥飲品有限公司（批號：20130321）；鹽酸異丙腎上腺素（iso）由上海禾豐制藥有限公司提供（批號為：5E20010）。

1.3 儀器 動物耐缺氧與耗氧量動態變化同步測定裝置、電子天平、秒表。

2 方法

2.1 野菊花提取物制備 稱取野菊花300 g加適量水浸泡6 h，煎煮40 min，過濾，去濾渣，再次加適量水，煎煮40 min過濾，合并兩次濾液濃縮至折合生藥1.0 g/ml，4 ℃低溫保存備用。

2.2 耗氧量的測定 將受試小鼠放入耗氧量測定裝置內，調整液面高度至定量管0刻度，關閉通氣管，使裝置密閉，立刻記錄實驗開始時間，每隔5 min記錄一次定量內液面上升高度，作為小鼠的累積耗氧量，連續觀察30 min，并記錄從裝置密閉至小鼠呼吸停止的時間為小鼠的缺氧存活時間[4]。

2.3 常壓耐缺氧實驗

2.3.1 動物分組及給藥 將小鼠禁食16 h后按體重隨機分為四組，分別為對照組給予0.9%氯化鈉注射液（30 ml/kg），野菊花提取液小劑量組（5.0 g/kg）、中劑量組（12.5 g/kg）、大劑量組（25.0 g/kg），每組10只，雌雄各半。各藥物組灌胃給藥，容量為0.2 ml/10g，每天給藥1次，連續3 d[6]。

2.3.2 方法 最后一次灌胃40 min后，照上述方法測定耗氧量。記錄開始時間，密切觀察小鼠的反應。并記錄5、10、15、20、30 min時液面上升的高度，作為小鼠的累計耗氧量；小鼠死亡時液面上升的高度即為存活期總耗氧量；記錄小鼠從裝置密閉至呼吸停止的時間，即為小鼠缺氧存活時間；用不同時間的累計耗氧量減掉前一次的累計耗氧量，即為各時間段的耗氧量。

2.4 減壓耐缺氧實驗 照上述方法分組與給藥，最后一次給藥40 min后，四組小鼠均腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素（ISO）20 ml/kg，10 min后，放進缺氧裝置中，記錄5、10、15、20、30 min時液面上升高度和小鼠死亡時間，以及死亡時液面上升高度[7]。

2.5 小鼠急性腦缺血及失血性休克實驗 照上述方法分組與給藥，最后一次灌胃40 min后，在小鼠耳后部迅速斷頭，造成腦部急性缺血，在斷頭后的同時，觀察小鼠張口呼吸次數，并記下呼吸停止時間。小鼠斷頭后，同時迅速剖開小鼠的胸部，暴露心臟，以心室停跳為指標，觀察小鼠心臟搏動時間。

2.6 統計學方法 采用SPSS 19.0統計軟件進行分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 野菊花提取物對正常小鼠存活時間及耗氧量的影響 野菊花提取物中、大劑量組均可延長小鼠存活時間，降低前20 min的累計耗氧量；大劑量組野菊花水提液明顯降低前10 min的耗氧量；并且耐缺氧程度與野菊花提取物有劑量成正相關，差異有統計學意義（P＜0.05），見圖1～4。

3.2 對異丙腎上腺素致心肌耗氧增加小鼠耐缺氧能力的影響 對異丙腎上腺素致心肌耗氧增加的小鼠，中、大劑量組野菊花提取物能明顯增加小鼠的耐缺氧能力，降低前5 min的耗氧量，提高小鼠的存活時間，并且小鼠的耐缺氧程度與野菊花水提液劑量成正相關，差異有統計學意義（P＜0.05），見圖5～7。

3.3 對腦缺血小鼠耐缺氧能力的影響 對腦缺氧小鼠，野菊花中、大劑量組與對照組比較，能明顯增加小鼠的呼吸次數、呼吸時間、心搏時間，并且耐缺氧程度與野菊花提取物濃度成正相關，有統計學意義（P＜0.05）。

圖1 野菊花對四組小鼠死亡時累計耗氧量的影響

圖2 野菊花對四組小鼠死亡時累計耗氧量與存活時間的影響

圖3 野菊花對四組小鼠各時間段耗氧量的影響

圖4 野菊花對ISO致心肌耗氧量增加四組小鼠的累計耗氧量的影響

圖5 野菊花對ISO致心肌耗氧量增加四組小鼠死亡累計耗氧量、存活時間的影響

圖6 野菊花對ISO致心肌耗氧量增加四組小鼠各時間段耗氧量的影響

圖7 野菊花對急性腦缺血性缺氧四組小鼠的影響

4 討論

缺氧對機體是一種緊張性刺激，影響機體各種代謝，特別是影響機體的氧化供能，最終會導致心、腦等主要器官缺氧供能不足而死亡。由于吸入氣體中氧分壓低而引起缺氧，從而使動脈血氧分壓下降，以致于動脈血氧含量減少，最終導致機體死亡[5]。

對于正常小鼠，耗氧量測定結果表明，野菊花水提物有增強耐缺氧作用可能主要與減少單位時間內的耗氧量有關，但野菊花水提物提高小鼠的耐缺氧能力具有劑量依賴性。對于異丙腎上腺 素致心肌耗氧量增加小鼠的耗氧量測定結果表明，在心肌耗氧情況下，更高濃度的野菊花水提物的耐缺氧能力更加明顯。灌胃12.5 g/kg、25.0 g/kg劑量可顯降低耗氧量并延長小鼠存活時間。對于腦缺氧的小鼠，灌胃12.5 g/kg、25.0 g/kg的中、大劑量組能明顯增加小鼠的呼吸時間、呼吸次數，延長心搏時間。

本實驗證明，野菊花提取物有增強小鼠耐缺氧能力的作用，為野菊花藥物資源的進一步開發利用提供了實驗依據。不過野菊花增強耐缺氧能力的作用機制有待于進一步研究。

[1] 中華人民共和國衛生部藥典委員會編.中華人民共和國藥典[M].北京:化學上業出版社,2010:120-120.

[2] 吳釘紅,楊立偉,蘇薇薇.野菊花化學成分及藥理研究進展[J].中藥材,2009,27(2):142-144.

[3] 陳傳千,沈艷平,屈躍丹,等.野菊花提取物藥理作用的研究進展[J].吉林醫藥學院院報,2010,3(31):175-176.

[4] 孔燕芳,周艷梅,閆艷倉,等.正交試驗優選野菊花中總黃酮的提取工藝[J].中國藥房,2013,24(43):4068-4069.

[5] 馬艷,汪宇,康萬軍,等.蛹蟲草口服液對小鼠耐缺氧和抗疲勞作用[J].中國藥師,2012,12(10):1376-1377.

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