豬繁殖與呼吸綜合征的臨床診斷措施

郁星星　邢濤　李小華

摘要：介紹了豬繁殖與呼吸綜合征的病毒生物學特性、流行病學、癥狀與病理變化，并對其診斷方法進行了總結。

關鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征；臨床癥狀；病理變化；診斷

中圖分類號：S858.28文獻標識碼：B文章編號：1007-273X（2014）03-0028-02

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的豬的繁殖障礙和呼吸系統的傳染病。該病可以感染任何年齡的豬，以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道癥狀為特征，造成懷孕母豬流產、產死胎和仔豬高死亡率。豬繁殖與呼吸綜合征已成為全球性豬病，給世界養豬業造成了巨大的經濟損失，它也成為世界獸醫學界異常關注的疾病之一。

1生物學特性

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）屬動脈炎病毒科，動脈炎病毒屬，有囊膜的單股RNA病毒，具有高度的變異性，根據其差異可將PRRSV分為兩種基因型：即歐洲型（代表株Lelystadvirus）和美洲型（代表株VR 2332）[1]。PRRSV對有機溶劑敏感，對pH要求高，在pH6.5～7.5間相對穩定，pH高于7.5或低于5時，感染力很快消失，這顯示了很強的pH依賴性。從自然發病豬中分離到的PRRSV不具有血凝活性，不能凝集雞、鵝、豚鼠、牛、馬、豬、綿羊和人的紅細胞。

2流行病學

20世紀80年代末，美國暴發了一種從未見過的毀滅性疾病，隨后歐洲和亞洲于90年代初也相繼暴發。1991年，歐洲研究人員指出導致這種疾病暴發的病原是一種從未見過的動脈炎病毒，并采用豬繁殖與呼吸綜合征的名稱命名該病[2]。

我國于1996年首次報道該病并分離到PRRSV[3]，隨后該病在我國呈蔓延趨勢。目前PRRS已遍及全球主要養豬國家和地區，給世界養豬業造成了巨大的經濟損失。

3癥狀與病理變化

3.1經典的PRRSV感染

PRRS的臨床癥狀表現多樣，并受很多因素影響。PRRSV主要引起妊娠母豬的流產和仔豬的呼吸道癥狀，臨床上伴有高熱、部分豬耳部及四肢末端發紺等癥狀，剖檢病變主要為間質性肺炎，多數仔豬肺尖葉、心葉呈暗紅色或黃、紅病灶相間，全身淋巴結有不同程度的淤血、出血、腫脹。但是僅憑臨床癥狀很難做出準確診斷，為此荷蘭制定的臨床診斷標準為死產率達到20%，母豬流產率達到8%，斷奶仔豬死亡率達到26%。

3.2高致病性PRRSV感染

與經典豬藍耳病相比，高致病性豬藍耳病的主要特征是發病豬出現41 ℃以上持續高熱、發病豬不分年齡段均出現急性死亡、仔豬出現高發病率和高死亡率，發病率可達100%，死亡可達50%，母豬流產率可達30%。臨床主要表現為發熱、厭食或不食；耳部、口鼻部、后軀及股內側皮膚發紅、淤血、出血斑、丘疹；眼結膜炎；咳嗽、哮喘等呼吸道癥狀；后軀無力、不能站立或搖擺、轉圈運動、抽搐等神經癥狀；部分發病豬呈頑固性腹瀉。

剖檢變化為肺出血、淤血以及以心葉、尖葉為主的灶性暗紅色實變；扁桃體出血、化膿；腦出血、淤血、軟化灶及膠凍樣物質滲出；心衰、心肌出血、壞死；脾、淋巴結新鮮或陳舊性出血、梗死；腎表面和切面部分可見出血點、出血斑等；部分豬肝可見黃白色壞死灶或出血灶；腎表面凹凸不平；腸出血等[4]。

4診斷

4.1病毒的分離

病毒分離被認為是最為確切的方法，但費時費力。需采用病毒適應性好的細胞，主要有豬肺巨噬細胞（PAMs）、MA104細胞系的克隆株Marc 145及HS2H細胞、CL2621細胞等。MA104細胞系的克隆株Marc 145及HS2H細胞、CL2621細胞等是傳代細胞系，培養和傳代過程相對簡單。以Marc 145為例，在接毒后72 h，細胞折光性增強，少數細胞集聚成叢，細胞先膨脹后圓縮，集聚增多，最后崩解脫落。傳代細胞的病變相對明顯，但敏感性上不如豬肺泡巨噬細胞（PAMs），但因其操作和制備簡單、經濟而被廣泛應用[5]。

4.2免疫學方法

PRRSV特異性抗體的診斷方法主要有間接免疫熒光（IFA）、免疫過氧化物酶單層細胞試驗（IPMA）、血清中和試驗（SN）和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。其中IFA、SN和ELISA在美洲診斷實驗室應用較多，而歐洲主要用IPMA檢測PRRSV抗體。血清學試驗的結果受到檢測用分離病毒與感染豬病毒相關性的影響。

4.2.1間接免疫熒光抗體技術（IFA） IFA是由美國農業部國家獸醫實驗室研究建立的一種檢測PRRSV抗體的方法，感染后8 d就能檢測出抗體，目前廣泛應用于北美。但是本法需做細胞培養和熒光顯微鏡觀察，因此對儀器設備要求比較高，并且主觀性較強，所以在一些實驗室應用受到一定的局限。

4.2.2免疫過氧化物酶單層細胞實驗（IMPA） 這是荷蘭中央獸醫研究院最早建立的一種檢測PRRSV抗體的方法，目前仍然廣泛應用于歐洲。但是此種方法需要特殊的實驗條件，在操作和判斷過程中存在較多的人為因素干擾，需要較強的實踐經驗，容易出現假陽性等現象，因此我國尚未廣泛采用此方法。

4.2.3血清中和實驗（SN） 該方法主要用于檢測PRRSV抗體。使用Marc 145細胞，在96孔微量板上進行傳統的SN試驗不能檢測急性感染期的抗體，需用雙份血清。Jusa和akikawa等在血清和病毒混合液中加補體，提高了反應的敏感性，可在PRRSV感染早期作出診斷。這種改良的方法最早在接種后8 d即能檢出PRRSV抗體。該方法在微量細胞培養上存在較大困難，并且技術性較強，不適宜大規模推廣應用。

4.2.4酶聯免疫吸附實驗（ELISA） 該方法主要用于檢測PRRSV抗體。ELISA具有很好的特異性和敏感性，對于早期抗體的檢測比用IPMA更為敏感。ELISA檢測方法有多種：間接ELISA、捕捉ELISA、阻斷ELISA、夾心ELISA等。美國某公司的商品化ELISA試劑盒檢測的特異性能達到98%～99%，現在又推出檢測性能更好的第2代產品。商品化的試劑盒具有高度的一致性，自動化程度高等特點，現已成為國際上血清學檢測的主要標準，許多新建血清學檢測方法都以此為標準檢測符合率。有的可以同時檢測出美洲型和歐洲型，而且快速簡便。

4.3分子生物學方法

4.3.1反轉錄 聚合酶鏈式反應（RT PCR） 該方法特異性強，能夠鑒別診斷其他易混淆的病毒性傳染病，如細小病毒病、偽狂犬病、豬瘟、傳染性胃腸炎和豬流感等。該方法的敏感性和特異性遠遠超過IFA，是目前普遍使用的實驗室檢測方法。

目前應用RT PCR技術診斷PRRSV已取得了很大進展，國內婁高明等[5]根據PRRSV的ORF7序列，設計一套引物并建立了RT PCR方法，試驗結果證明其效果較好，且可從基因水平上區分PRRSV美洲型和歐洲型，而且對國內疑似為PRRS送檢樣進行檢測，確定其毒株為美洲型。總之，RT PCR方法是一種快速、準確、靈敏的診斷方法。

4.3.2基因探針 國外學者用地高辛標記的核酸探針檢測細胞培養和福爾馬林固定組織中的PRRSV獲得成功。該探針174bp，主要針對PRRSV的核衣殼蛋白基因，能特異地檢測組織或細胞中PRRSV的RNA。但由于標記探針的價格高、技術操作復雜等問題，普遍使用尚存在一定困難。

5結論

綜上所述，PRRS給當前養豬業造成了嚴重的危害，通過不同檢測技術對PRRS進行確診及監測是防控該病的重要環節。在臨床應用過程中，有必要充分考慮每種診斷方法的優點及局限性，根據實際生產需要以及試驗條件等綜合情況來選擇確定檢測方法，這樣才能更好地發揮各種診斷技術自身的特點，準確地診斷疾病并制定出合理的預防控制措施。

參考文獻：

[1]劉書亮，王紅寧.PRRS的病原學和免疫學研究進展[J].四川畜牧獸醫，2000，27（7）：79 83.

[2] 郭傳鳳.PRRS的病毒簡介[J].豬與禽，2012（6）：9.

[3]郭寶清，陳章水，劉文興.從疑似PRRS流產胎兒分離PRRSV的研究[J].中國畜禽傳染病，1996，2（2）：l 4.

[4]劉光清，蔡雪暉，仇華吉，等.豬繁殖與呼吸綜合征的研究進展[J].中國預防獸醫學報，2001，23（1）：72 76.

[5]婁高明，杜偉賢，謝明權，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT PCR診斷方法的建立[J].中國獸醫學報，2000，20（2）：141 144.