新疆產(chǎn)平菇中多糖和氨基酸的含量分析

楊紅澎，班立桐，黃亮，王玉，童應(yīng)凱

（天津農(nóng)學(xué)院，天津300384）

平菇（Pleurotus ostreatus）在真菌分類上屬于擔(dān)子菌門，傘目，側(cè)耳科，側(cè)耳屬，又名側(cè)耳、糙皮側(cè)耳、蠔菇、黑牡丹菇，是我國目前栽培最多的4種主要的食用菌（蘑菇、香菇、草菇、平菇）之一[1]。平菇不僅營養(yǎng)價值高，而且具有一定的食療價值。中醫(yī)認(rèn)為平菇性溫、味甘。具有追風(fēng)散寒、舒筋活絡(luò)的功效。用于治腰腿疼痛、手足麻木、筋絡(luò)不通等病癥。平菇中的蛋白、多糖對癌細(xì)胞有很強(qiáng)的抑制作用，能增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。平菇子實體能夠降低血脂和膽固醇，其多糖有抗腫瘤活性，平菇還有清除羥基自由基的活性。另外平菇還能調(diào)節(jié)植物神經(jīng)功能，對更年期綜合癥有明顯的調(diào)節(jié)作用[2]。氨基酸及多糖是菌類食品不可缺少的重要成分。本實驗對新疆產(chǎn)平菇的氨基酸和多糖含量進(jìn)行了分析測定，為平菇化學(xué)成分的全面研究和營養(yǎng)價值利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1.1 材料

新疆產(chǎn)平菇：天津市金三農(nóng)農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司新疆種植基地。

1.1.2 主要儀器

AEZ00電子天平：瑞士METTLER公司；L-8800型全自動氨基酸分析儀：日立公司；真空干燥箱：上海博迅；紫外分光光度計：北京普析TU-1901；超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)：寧波新芝生物科技。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理

樣品去除子實體的帶泥部45℃烘干至重量沒有變化后，用植物粉碎機(jī)粉碎，過60目篩備用。

1.2.2 多糖測定方法及條件

本研究采用苯酚-硫酸法檢測樣品子實體多糖。

1.2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

1）在電子天平上準(zhǔn)確稱取葡萄糖0.1 g，用100 mL的容量瓶定容配成1.0 mg/mL的葡萄糖溶液。并分別稀釋成 0、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1 mg/mL濃度梯度的葡萄糖作為基準(zhǔn)物。

2）每種濃度的葡萄糖溶液取2 mL分別加入1 mL 5%苯酚和5 mL硫酸混勻，然后于25℃水中加熱20 min，流水冷卻后于紫外分光光度計485 nm處測光密度值。

3）以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，光密度值為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2.2 樣品的提取

采用超聲波輔助熱水提取技術(shù)提取樣品子實體中的多糖。準(zhǔn)確稱取樣品子實體粉末（60目）1 g放入50 mL的離心管中，按一定料液比向離心管中加入蒸餾水，在恒溫水浴鍋中加熱5 min，然后放入超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)中超聲提取。為了在超聲波處理過程中維持料液的溫度，所以每隔5 min對料液進(jìn)行一次加熱。本實驗采用提取時間35 min、功率150 W、溫度70℃、料液比1∶20、二級提取，合并兩次上清液，用于多糖測定。

1.2.3 氨基酸測試方法及條件

樣品用6 mol/L HCl于110℃水解24 h，提取蛋白水解氨基酸；用水溶液提取游離氨基酸。合并提取液，在氨基酸分析儀上測定氨基酸含量。

顯色劑：茚三酮。泵1壓力：6.90 kPa～7.90 kPa，流速：4.0 mL/min。泵 2 壓力：0.89 kPa～1.00 kPa，流速：3.5 mL/min分離柱柱溫：57℃。反應(yīng)柱柱溫：134℃。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線測定結(jié)果

將所測數(shù)據(jù)以吸光度對葡萄糖濃度求算線性回歸方程，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為y=10.758x-0.001 2（R2=0.999 1）。實驗表明，葡萄糖在0 mg/mL～0.1 mg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。結(jié)果見圖1。

圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Result of standard curve

2.2 子實體中多糖含量測定結(jié)果

經(jīng)檢測，新疆產(chǎn)平菇子實體中多糖含量為6.30%，見表1。

表1 2013年新疆產(chǎn)平菇多糖含量測定結(jié)果Table 1 Polysaccharides content of Pleurotus ostreatus from Xinjiang

2.3 子實體中氨基酸測定結(jié)果

經(jīng)檢測，在平菇子實體中含有17種氨基酸（見表1），子實體中氨基酸總含量為26.49%。其中谷氨酸（5.50%）含量最高，其次含量高于1%的為天門冬氨酸（2.59%）、蘇氨酸（1.38%）、絲氨酸（1.45%）、甘氨酸（1.21%）、丙氨酸（1.67%）、纈氨酸（1.26%）、亮氨酸（1.75%）、酪氨酸（1.02%）、苯丙氨酸（1.39%）、賴氨酸（1.71%）、精氨酸（1.84%），結(jié)果見表2。

表2 2013年新疆產(chǎn)平菇子實體氨基酸含量Table 2 The content of amino acids in Pleurotus ostreatus from Xinjiang

圖2 新疆產(chǎn)平菇子實體氨基酸色譜圖Fig.2 The chromatogram of amino acids in Pleurotus ostreatus from Xinjiang

3 結(jié)論

近年來，真菌多糖的研究已成為糖生物學(xué)研究的一個熱點，其生物活性也是保健食品功能因子的研究熱點。分子量大小是多糖具備生物活性的必要條件，這可能與多糖分子形成的高級構(gòu)型有關(guān)。多糖發(fā)揮生物學(xué)活性通常需要其分子質(zhì)量在一定范圍內(nèi)：多糖分子量越大，分子體積越大，不利于多糖跨越多重細(xì)胞膜障礙進(jìn)入生物體內(nèi)發(fā)揮生物學(xué)活性；但分子量過低，無法形成產(chǎn)生活性的聚合結(jié)構(gòu)。多糖對免疫系統(tǒng)有重要的調(diào)節(jié)作用，免疫系統(tǒng)與機(jī)體的衰老有密切的關(guān)系，隨年齡增大，免疫功能下降或紊亂，結(jié)果胸腺萎縮，T細(xì)胞損耗，從而導(dǎo)致機(jī)體衰老，壽命縮短。多糖能從整體上提高機(jī)體免疫功能，從一定程度上延緩衰老，防治老年病[3]。平菇多糖含量與香菇、雙孢菇等相比差異不大[4-5]，但其生物活性及構(gòu)效關(guān)系還需進(jìn)一步研究。

上述結(jié)果表明，平菇子實體中谷氨酸含量最高，其次為天門冬氨酸（2.59%）、精氨酸（1.84%）、亮氨酸（1.75%）、賴氨酸（1.71%）。谷氨酸學(xué)名2-氨基-5-羧基戊酸。研究表明谷氨酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸之一，雖然它不是人體必須的氨基酸，但它可作為碳氮營養(yǎng)與機(jī)體代謝，有較高的營養(yǎng)價值[6]。天冬氨酸又稱天門冬氨酸，是一種α-氨基酸，天冬氨酸的L-異構(gòu)物是20種蛋白胺基酸之一，即蛋白質(zhì)的構(gòu)造單位。它的密碼子是GAU和GAC。它與谷氨酸同為酸性氨基酸。天冬氨酸普遍存在于生物合成作用中。它是生物體內(nèi)賴氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸等氨基酸及嘌呤、嘧啶堿基的合成前體。它可作為K+、Mg+離子的載體向心肌輸送電解質(zhì)，從而改善心肌收縮功能，同時降低氧消耗，在冠狀動脈循環(huán)障礙缺氧時，對心肌有保護(hù)作用。它參與鳥氨酸循環(huán)，促進(jìn)氧和二氧化碳生成尿素，降低血液中氮和二氧化碳的量，增強(qiáng)肝臟功能，消除疲勞[7]。

本研究中所測平菇子實體中總氨基酸含量為26.49%，與文獻(xiàn)報道國內(nèi)內(nèi)地平菇子實體中總氨基酸含量23.74%和15.75%[8-9]相比，新疆產(chǎn)平菇總氨基酸較高。這可能與新疆當(dāng)?shù)貧夂颉⒑０巍夭钣忻芮嘘P(guān)系，其機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

目前尚無文獻(xiàn)報道新疆產(chǎn)平菇氨基酸和多糖含量分析，本研究結(jié)果可為人們進(jìn)一步研究不同產(chǎn)地平菇提供依據(jù)。

[1]圖力古爾,李玉.我國側(cè)耳屬真菌的種類資源及其生態(tài)地理分布[J].中國食用菌,2001(20):8-10

[2]王建化,孫高飛,李友杰.平菇價值及其深加工產(chǎn)品[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2012,274(3):140-141

[3]郭天力,嚴(yán)曉娟,胡先望,等.真菌多糖研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2013,13(18):3578-3583

[4]呂國英,范雷法,張作法,等.香菇多糖研究進(jìn)展[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報,2009,21(2):183-188

[5]高振鵬,袁亞宏,岳田利,等.超聲波輔助提取雙孢菇多糖的研究[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2012(7):223-228

[6]蘇允愛,司天梅.神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸及其抗精神病藥物研究進(jìn)展[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2004,20(3):224-227

[7]馮志彬,殷曰彩,米陽,等.天冬氨酸生產(chǎn)工藝的研究進(jìn)展[J].發(fā)酵科技通訊,2012,41(2):38-41

[8]王靜萍.大口徑毛細(xì)管氣相色譜法測定食用菌中的氨基酸[J].山西職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2001,11(2):4-6

[9]饒毅萍,陳潔輝,張冰娜,等.平菇菌絲體與子實體營養(yǎng)成分的分析比較[J].生物學(xué)雜志,2011,28(3):94-96