決明子茶中游離蒽醌含量及抗氧化能力的研究

田大年，黃宇

（1.寧夏醫科大學公共衛生學院，寧夏銀川750004；2.寧夏醫科大學藥學院，寧夏銀川750004）

決明子為豆科植物決明（Cassia obtusifolia L.）或小決明（Cassia tora L.）的干燥成熟種子，為常用中藥。決明子入藥最早記載于《神農本草經》，列為上品，以明目之功而名，性味甘、苦、咸、微寒、無毒，歸肝、腎、大腸經。具有清肝明目、潤腸通便的作用[1]，現代藥理學研究表明，決明子有降血壓，降血脂，保肝抑菌等活性[2-3]，被廣泛應用。另外，決明子又是可以作為藥食兩用的中藥，是保健飲料的良好原料。近年來又發現決明子提取物具有清除自由基、抵抗氧化的作用[4-6]，因此決明子作為一種保健食品的原料越來越引起重視，極具開發應用價值。決明子茶是在決明子的基礎上進行炒制后所得的產品，具有潤腸通便功效，也是減肥佳品。蒽醌類為決明子的主要藥效成分，呈游離或與糖結合成苷狀態，苷類所連接的糖主要是葡萄糖。決明子中蒽醌類化合物因其結構的不同，溶解特性差異也不同。因此應根據其極性和水溶性的大小選擇合適的溶劑提取。提取方法有水熱浸提法、有機溶劑提取法、超臨界萃取技術、微波萃取技術。本文以不同比例的醇/水溶液作為溶劑提取決明子茶中的有效成分，采用醋酸鎂-甲醇法顯色[7]，再利用紫外可見光度法[8]研究提取物中游離蒽醌的含量，采用FRAP法[9-10]研究提取物抗氧化活性。旨在為決明子的保健食品的研究及資源開發上提供理論依據及檢測手段。

1 材料與儀器

1.1 儀器

UV-2550紫外分光光度計：日本島津；RE-3000旋轉蒸發儀：上海亞榮生化儀器廠。

1.2 試劑及材料

決明子茶：銀川市雅麗茶食品有限公司，保健型80 g裝；二氯甲烷；1，8-二羥基蒽醌；醋酸鎂甲醇乙醇硫酸亞鐵三水合醋酸鈉；TPTZ （2，4，6－三吡啶基－S－三嗪）；鹽酸；冰醋酸；鐵粉；三氯化鐵均為分析純。

2 方法

2.1 試劑的配制

2.1.1 標準液的配制

精密稱取1，8-二羥基蒽醌0.010 g，量取二氯甲烷100 mL。配制成0.1 mg/mL的1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷的標準液置于100 mL量瓶中。

2.1.2 醋酸鎂-甲醇液的配置

精密稱取1.25 g醋酸鎂，量取250 mL甲醇。配制成0.5%的醋酸鎂-甲醇液，置于250 mL容量瓶中。

2.1.3 10 mmol/lTPTZ溶液的配制

準確稱取0.159 4 g TPTZ于50 mL容量瓶中，加40 mmol/L鹽酸溶液定容。搖勻備用。

2.1.4 20 mmol/L FeCl3溶液配制

準確稱取FeCl3粉末0.162 2 g于50 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻備用。

2.1.5 醋酸鹽緩沖溶液（PH3.6）

0.775 g三水合醋酸鈉+4 mL冰醋酸，然后用純化水定容至250 mL。搖勻備用

2.2 最大波長的選擇

以1，8-二羥基蒽醌為標準品，于105℃烘2 h后置干燥器內使用。精密量取1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷的標準液（0.1 mg/mL）1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，水浴蒸發二氯甲烷至干。殘渣加入0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解并稀釋至刻度，搖勻，測定其吸收特征。

2.3 標準曲線的繪制

分別精密量取1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷的標準液（0.1 mg/mL）0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分別置 10 mL量瓶中，在水浴上揮去二氯甲烷，殘渣加0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解并稀釋至刻度，搖勻，于511 nm處測定其吸收度，以0.5%醋酸鎂-甲醇液作空白對照。

2.4 樣品的提取

取樣品決明子茶10 g，粉碎后，過40目篩，裝瓶標號待用。

2.4.1 樣品的超聲提取

稱取粉碎后的茶1 g，分別置于100 mL錐形瓶中，加入55%（乙醇/水為95%）乙醇各40 mL，置于超聲波清洗器中，溫度為45℃，功率為80 W，超聲處理30 min，靜置冷卻至室溫后抽濾到100 mL容量瓶中，重復提取兩次，合并濾液，用55%的乙醇定容至100mL，既得提取液。

2.4.2 樣品的回流提取

稱取粉碎后的茶1 g，于100 mL圓底燒瓶中加入55%（乙醇/水為95%）乙醇各30 mL分別回流1 h，再各加入25 mL溶劑重復兩次，抽濾，洗滌濾渣后合并溶液，于100 mL容量瓶中定容至刻度備用。

2.5 樣品的含量測定

精密稱取樣品適量，在水浴上揮去溶劑，用適量0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解，并轉移至10 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，于511 nm處測定吸收度。以0.5%醋酸鎂-甲醇液作空白對照。

2.6 鐵還原抗氧化能力分析

2.6.1 配制FRAP試劑（現配現用）

10 mmol/L TPTZ 溶液：20 mmol/L FeCl3溶液：醋酸鹽緩沖溶液（pH3.6）=1∶1∶10的體積比混勻現用。

2.6.2 標準曲線的繪制

稱取硫酸亞鐵結晶0.695 g置于50 mL容量瓶中，加少許鐵粉防止氧化，作為母液，取此母液2.5 mL稀釋至25 mL，此稀釋液作為硫酸亞鐵標準液。分別取硫酸亞鐵標準液 0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120 μL于5 mL容量瓶中，用FRAP試劑定容，混勻后在37℃下反應10 min，在593 nm處測吸光度。以硫酸亞鐵的摩爾濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準的曲線。

2.6.3 樣品的分析

分別取樣品提取液20 μL，置于5 mL容量瓶中，用FRAP試劑定容，混勻后在37℃下反應10 min，在593 nm處測吸光度。平行測3次。樣品中總抗氧化能力在標準曲線中查出相應的值，樣品的抗氧化能力以（mmol/L）/g表示。

3 結果分析

3.1 最大吸收波長測定

按照實驗2.2的方法處理，在紫外分光光度計下測定器最大吸收波長結果見圖1。

圖1 最大吸收波長Fig.1 The maximum absorption wavelength

可以發現醋酸鎂-甲醇法的最大吸收波長為511 nm。

3.2 標準曲線

在511nm處以1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷標準液質量濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準其曲線，曲線如圖2。

圖2 1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷液標準曲線Fig.2 1，8-two hydroxyanthraquinone methylene chloride solution standard curve

可知在0.005 mg/mL～0.03 mg/mL的濃度范圍內線性良好，相關祥光系數R2=0.999 8，所得回歸方程為y=44.67x+0.027 2。

3.3 不同提取物中游離蒽醌的含量

不同提取物中游離蒽醌的含量，見表1。

表1 決明子中游離蒽醌的含量Table 1 The content of free anthraquinone in semen cassiae

由表1可看出樣品游離蒽醌百分含量：水回流0.08%；55%乙醇回流0.64%；95%醇回流0.35%；水超聲0.18%；55%醇超聲0.67%；95%醇超聲0.24%。55%醇提取游離蒽醌效果較好。

3.4 FRAP標準曲線

以硫酸亞鐵的摩爾濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制出標準曲線，如圖3。

圖3 FRAP標準曲線Fig.3 FRAP standard curve

在10 μmol/L～120 μmol/L 線性范圍良好，相關系數為R2=0.999 7，所得回歸方程為y=0.020 6x+0.040。

3.5 樣品鐵還原抗氧化力

樣品鐵還原抗氧化力見表2。

表2 樣品鐵還原抗氧化力測定Table 2 Samples ferric reducing antioxidant power

由表2可看出樣品的鐵還原抗氧化力為：水回流1.63 mmol/g；55%醇回流 2.14 mmol/g；95%醇回流1.51mmol/g；水超聲1.08mmol/g；55%醇超聲2.14mmol/g；95%醇超聲1.16 mmol/g。

4 討論

本實驗提取決明子茶中有效成分，對游離蒽醌進行了含量測定，并對提取物的抗氧化活性進行了研究。由實驗結果可知，決明子茶提取物中均含有一定量的游離蒽醌，因此決明子茶不管是用水或者是酒沖泡飲用，均有一定的潤腸通便功效。可能由于潤腸通便作用較緩和，蒽醌含量較為適中，含量過多則易導致腹瀉等癥狀。本實驗結果為決明子茶具潤腸通便功效提供了理論依據。

決明子茶提取物能夠有效還原Fe3+，從抗氧化能力來看，用55%乙醇提取樣品明顯強于用95%乙醇和水提取的樣品，但因提取液的成分復雜，抗氧化作用的發揮并不是單靠某一種成分的作用，其具體原因有待進一步深入研究。

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