愈骨膠囊的薄層色譜鑒別

何騰龍，譚亞亞，孫艷霞

(1. 楊凌生物醫藥科技有限公司，陜西 西安 712100; 2. 西安正大制藥有限公司，陜西 西安 710043)

愈骨膠囊是中醫骨傷驗方，由血竭、骨碎補、續斷、牛膝、紅花、元胡等組方。方中血竭活血化瘀、消腫止痛，為君藥;骨碎補、續斷、牛膝補肝腎、接骨續筋，為臣藥;紅花、元胡等活血化瘀、止痛，為佐使藥[1]。口服愈骨膠囊治療骨痹，療效明顯[2]，但缺乏質量標準研究。為有效控制該制劑的質量，現對處方中的血竭、大黃、三七、骨碎補、沒藥采用薄層色譜(TLC)法進行定性鑒別，為其質量標準的制訂提供依據，現報道如下。

1 儀器與試藥

KQ-500DE 型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);Sartorius BS224S 型分析天平。血竭對照藥材(批號為120906 -200609)、大黃對照藥材(批號為120902-200408)、大黃素對照品(批號為110756-200110)、三七對照藥材(批號為120941 -200807)、三七皂苷R1對照品(批號為110745 -200617)、柚皮苷對照品(批號為110722 -200309)、天然沒藥對照藥材(批號為120967-200903)，均由中國藥品生物制品檢定所提供;愈骨膠囊(批號分別為110409，110410，110411)、陰性對照品，均由楊凌生物醫藥科技有限公司提供;硅膠G(青島海洋化工廠);羧甲基纖維素鈉(國藥集團化學試劑有限公司);其他試劑均為分析純，購自西安市化學試劑廠。

2 方法與結果

2.1 血竭

取本品內容物3 g，加乙醚50 mL，加熱回流提取2 次，每次30 min，濾過，合并2 次濾液，揮干溶劑，加甲醇10 mL 使溶解，加在中性氧化鋁柱(100 ～200 目，2 g，內徑為1 cm)上，收集流出液，濃縮至約2 mL，作為供試品溶液。取按處方比例和工藝制備不含血竭的陰性對照品3 g，同法制成陰性對照品溶液。另取血竭對照藥材0.1 g，加乙醚10 mL，密塞，振搖，放置10 min，濾過，濾液作為對照藥材溶液。照2010 年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB 中薄層色譜法試驗，吸取上述3 種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(95∶5)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的主斑點，而陰性對照品溶液色譜則無此斑點。見圖1A。

2.2 大黃

取本品內容物5 g，加甲醇50 mL，鹽酸5 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液蒸至近干，殘渣加水20 mL 使溶散，用乙醚提取2 次，每次20 mL，合并乙醚液，揮干溶劑，殘渣加甲醇1 mL，作為供試品溶液。取按處方比例和工藝制備不含大黃的陰性對照品3 g，同法制成陰性對照品溶液。另取大黃對照藥材0.03 g，同法制成對照藥材溶液;再取大黃素對照品，加乙醇制成每1 mL 含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。照2010 年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB中薄層色譜法試驗，吸取上述4 種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚(30 ～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(15 ∶5 ∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外線燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液和對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，置氨蒸氣中熏后日光下檢視，斑點變為紅色，而陰性對照品溶液色譜則無此斑點。見圖1 B1和圖1 B2。

2.3 三七

取本品內容物5 g，加甲醇100 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水30 mL 使溶散，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液;用氨試液20 mL，洗滌1 次，棄去水層，再用水洗滌2 次，每次20 mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇2 mL 使溶解，作為供試品溶液。取按處方比例和工藝制備不含三七的陰性對照品5 g，同法制成陰性對照品溶液。取三七對照藥材0.5 g，加水5 滴，攪勻，加水飽和的正丁醇5 mL，密塞，振搖10 min，放置2 h，離心，取上清液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL 使溶解，作為對照藥材溶液;另取三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。照2010 年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB 中薄層色譜法試驗，吸取上述4 種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15 ∶40 ∶22 ∶10)10 ℃以下放置的下層溶液展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與三七對照藥材和三七皂苷R1對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的主斑點，而陰性對照品溶液則無此斑點。見圖1 C。

2.4 骨碎補

取本品內容物10 g，加甲醇100 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL 使溶散，用乙酸乙酯提取2 次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL 使溶解，作為供試品溶液。另取按處方比例和工藝制備不含骨碎補的陰性對照品10 g，同法制成陰性對照品溶液。取柚皮苷對照品，加甲醇制成每1 mL 含0.2 mg 的溶液，作為對照品溶液。照2010 年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB 中薄層色譜法試驗，吸取上述3 種溶液各1 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，在70 ℃加熱4 min，置紫外線燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，而陰性對照品溶液色譜則無此斑點。見圖1 D。

2.5 沒藥

取本品內容物2.5 g，加乙醚50 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液揮至近干，殘渣加甲醇2 mL 使溶解，作為供試品溶液。取天然沒藥對照藥材0.5 g，同法制成對照藥材溶液。再取按處方比例和工藝制備不含沒藥的陰性對照品2.5 g，同法制成陰性對照品溶液。照2010 年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB 中薄層色譜法試驗，吸取上述3 種溶液各5 ～10 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以環己烷-乙醚(4 ∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，立即噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。置紫外線燈 (254 nm)下檢視，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的主斑點，而陰性對照品溶液色譜則無此斑點。見圖1 E。

圖1 薄層色譜圖

3 討論

薄層色譜法是鑒別中藥最常用的方法，專屬性強，可比性、靈敏度好，是藥品檢驗中應用最廣泛的鑒別手段之一[3]。本處方中血竭為君藥，且是貴重藥品，藥典中有較成熟的質量控制方法，考慮檢測方法的通用、成熟、可行及本品種的劑型特點，認為薄層色譜法比較合理，故采用薄層色譜法鑒別處方中的血竭及大黃、三七、骨碎補、沒藥的特征色譜斑點，結果方法重現性好，專屬性強，陰性對照品溶液無干擾，可以定性地控制該制劑的質量。

對于沒藥，經過多次試驗，發現用乙醚提取效果較好，可除去脂溶性成分，有效地排除背景色帶的干擾現象，其斑點分離清晰。

曾對方中的續斷、牛膝、紅花、元胡采用不同的提取方法和展開劑進行薄層色譜試驗，但因薄層板效果不佳，專屬性不強，故未列入正文。

[1] 王 琴，邢 茂，易美彤，等. 愈骨膠囊鎮痛和抗炎活性的實驗研究[J]. 中國藥房，2011，22(27)∶2 506.

[2] 姜麗芳，王吉明，都洪敏. 愈骨膠囊治療骨痹的臨床觀察[J]. 齊魯藥事，2012，31(8)∶479 -482.

[3] 趙希賢，尤麗華，楊秉呼，等. 中藥薄層色譜鑒別檢驗常見問題探討[J]. 中國藥業，2013，22(6)∶2 -3.