高效液相色譜法測定十味玉泉膠囊中葛根素含量

伍鵬兮

(湖南省邵陽市食品藥品檢驗所，湖南 邵陽 422001)

十味玉泉膠囊由天花粉、葛根、麥冬等10 味中藥組方，具有益氣養(yǎng)陰、清熱生津的功效，用于氣陰兩虛之消渴病。原標準采用無水乙醇提取，薄層色譜展開后刮下斑點，洗脫定容，紫外可見分光光度計測定葛根素含量[1]。該方法不但操作步驟復雜，易造成損失，誤差難以控制，且初步摸索，無水乙醇提取不完全。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，準確測定葛根素含量，筆者改變提取方法，采用高效液相色譜(HPLC)法測定含量，結(jié)果滿意，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 型高效液相色譜儀，包括四元梯度泵、二極管陣列檢測器;TP-150 型超聲波清洗器;AG 135 型電子分析天平。葛根素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110752 -200912，供含量測定用，含量以96.0%計，使用前不用處理);十味玉泉膠囊(河北華茸堂藥業(yè)有限公司);甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[2]

色譜柱:Agilent C18柱(100 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(22 ∶78);檢測波長:250 nm;柱溫:35 ℃;流速:1.0 mL/min。

2.2 溶液配制

精密稱取葛根素對照品0.022 33 g，置50 mL 容量瓶中，加30%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取2 mL，置10 mL 容量瓶中，加30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液(0.085 75 g/L)。取本品適量內(nèi)容物，研細，取約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加30%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用30%乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。按處方比例及生產(chǎn)制備方法，制備不含葛根素的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:分別精密吸取2.2 項下3 種溶液各5 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件進樣測定，結(jié)果見圖1。樣品中葛根素峰與雜質(zhì)峰完全分離，陰性對照品溶液無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液(0.085 75 g/L)2，3，5，7，10 μL 進樣測定，以葛根素進樣量(X，μg)為橫坐標、峰面積積分值( Y)為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程A=4 387.5 C+3.883 5，r =1.000 0。結(jié)果表明，葛根素進樣量在0.171 5 ～0.857 5 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液5 μL，重復進樣5次，測定其峰面積積分值。結(jié)果的RSD=0.11% ( n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:分別精密吸取同一供試品溶液5 μL，于0，1，2，4，8，24 h 時進樣，測定其葛根素峰面積積分值。結(jié)果的RSD=0.26%( n=6)，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復性試驗:取同一批樣品6 份，分別按擬訂色譜條件進樣測定其葛根素含量。結(jié)果葛根素平均含量為每粒7.3 mg，RSD=0.33%( n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量(每粒7.26 mg)的樣品約0.15 g，共6 份，分別加入葛根素對照品溶液(質(zhì)量濃度為0.92 g/L)2.0 mL，依法制備供試品溶液，并測定其含量。結(jié)果見表1。

表1 葛根素加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取不同批號的樣品0.25 g，依法制備供試品溶液，并按擬訂色譜條件進樣測定，以外標法計算樣品中葛根素的含量。結(jié)果批號為100203，101128，110609 的3 批樣品中葛根素的平均含量分別為每粒7.28，6.23，6.87 mg，RSD 分別為1.5%，0.7%，0.7%。

3 討論

樣品提取曾采用了無水乙醇超聲提取、氯仿索氏提取除雜質(zhì)后再用30%乙醇超聲提取、30%乙醇超聲提取3 種方法。其中用后兩種方法提取的樣品，葛根素含量測定結(jié)果無顯著差異，但用第1 種方法提取的樣品含雜質(zhì)峰，且無論是更換色譜柱還是改變流動相比例，雜質(zhì)峰和被測峰都不能很好地分離，并粗略計算其含量，明顯低于用后兩種方法提取的樣品。考慮到精簡步驟，減少污染，以30%乙醇為提取溶劑。采用標準方法與本試驗方法對同一批樣品進行測定，結(jié)果標準方法測得含量不到本方法測得的一半，說明標準方法提取不完全，誤差大。本試驗中所建立的葛根素含量測定方法，樣品處理簡單，色譜分離效果良好，精密度高，準確可靠，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

[1] WS3-213(Z-036) -97(Z)，衛(wèi)生部藥品標準·新藥轉(zhuǎn)正標準(第十五冊)[S].

[2] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:313.