黃丹膠囊對寒冷刺激小鼠模型黏膜免疫功能的影響

陳 章，歐陽剛，耿延?xùn)|，吳 奎，鄒 鋒

黃丹膠囊對寒冷刺激小鼠模型黏膜免疫功能的影響

陳 章，歐陽剛，耿延?xùn)|，吳 奎，鄒 鋒

目的 觀察黃丹膠囊對寒冷刺激小鼠模型的唾液中分泌型免疫球蛋白A(SIgA)含量和溶菌酶活性的影響。方法 將小鼠隨機分為5組：對照組、模型組、黃丹膠囊高劑量治療組、中劑量治療組、低劑量治療組。除對照組外，所有動物置于-20 ℃寒冷環(huán)境中刺激15 min，1次/d，連續(xù)3 d；黃丹膠囊高劑量、中等劑量、低劑量組3組小鼠于寒冷刺激前1 h，各組分別按1、2、4 g/kg劑量灌胃給予黃丹膠囊。第3 d寒冷刺激后，每只小鼠腹腔注射0.1%毛果蕓香堿注射液后取小鼠唾液，測定唾液中SIgA含量和溶菌酶活性。結(jié)果 經(jīng)寒冷刺激后，小鼠唾液中SIgA水平與溶菌酶活性均顯著下降；黃丹膠囊高劑量組SIgA含量較模型組非常顯著地升高(P<0.01)，中、小劑量組均有所上升但與模型組相比無顯著差異(P>0.05)，與高劑量組比較亦無顯著差異(P>0.05)；黃丹膠囊高、中劑量組溶菌酶活性較模型組顯著升高(P<0.05或P<0.01)，中、高劑量組相比無顯著差異，小劑量組活性有所增加，但與模型組相比無顯著差異(P>0.05)，與中、高劑量組相比亦無顯著差異(P>0.05)。結(jié)論 在寒冷刺激下，小鼠上呼吸道體液免疫受到抑制，而黃丹膠囊能夠提高寒冷刺激小鼠模型上呼吸道黏膜體液免疫功能。

寒冷刺激；上呼吸道黏膜；黃丹膠囊；分泌型免疫球蛋白A；溶菌酶

上呼吸道感染指的是自鼻腔至喉部之間的急性炎癥的總稱，是最常見的感染性疾病。秋冬季節(jié)，天氣寒冷且變化快，是反復(fù)上呼吸道感染等慢性呼吸系統(tǒng)疾病的高發(fā)季節(jié)。反復(fù)的上呼吸道感染容易誘發(fā)心力衰竭、呼吸衰竭、甚至多臟器功能衰竭，嚴(yán)重威脅自身免疫功能低下患者的生命安全，因此，預(yù)防患者反復(fù)上呼吸道感染是臨床急待解決的重要課題。長期反復(fù)使用抗菌藥物雖有一定療效，但不能有效控制反復(fù)發(fā)病，人們自然轉(zhuǎn)向天然藥源的中醫(yī)藥。我院總結(jié)近幾年的臨床經(jīng)驗，自制了“黃丹膠囊”，對預(yù)防患者的反復(fù)上呼吸道感染取得了較好療效。本研究旨在觀察黃丹膠囊對寒冷刺激致小鼠黏膜免疫功能低下模型的影響，為其在臨床的進(jìn)一步運用提供理論和實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑和設(shè)備 黃丹膠囊(由本院藥劑科提供，每粒0.5 g)；硝酸毛果蕓香堿注射液(天津金耀氨基酸有限公司)；小鼠分泌型免疫球蛋白A ELISA試劑盒(上海勁馬生物科技有限公司)；溶菌酶測試盒(上海撫生實業(yè)有限公司)。UV-8000型紫外分光光度計(上海元析儀器有限公司)；ELx800全自動酶標(biāo)儀(美國伯藤儀器有限公司)。

1.2 動物模型的制備與分組 昆明種6 w齡健康小鼠60只，雌雄各半，清潔級，體重18～22 g[由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所提供，合格證號：SCXK(川)2008-25]。隨機分為對照組、模型組、黃丹膠囊高、中、低[1.0、2.0、4.0 g/(kg·d)]3個劑量組，共5組，每組12只。參照文獻(xiàn)[1]方法造模：除對照組外，其余各組小鼠置于-20 ℃寒冷環(huán)境中刺激15 min，1次/d，連續(xù)3 d；每天寒冷刺激前1 h，各黃丹膠囊組灌胃給予相應(yīng)劑量藥物，對照組和模型組灌胃給予同體積的生理鹽水。于第3 d寒冷刺激后，在室溫下適應(yīng)60 min，每只小鼠腹腔注射0.1%毛果蕓香堿注射液0.5 ml；2 min后用移液槍取小鼠唾液，-40 ℃保存。采用雙抗體夾心法測定小鼠唾液中SIgA含量，采用自身對照法測定溶菌酶活性。

2 結(jié)果

與對照組比較，模型組小鼠唾液中SIgA含量、溶菌酶活性均非常顯著地降低(P<0.01)；黃丹膠囊高劑量組SIgA含量較模型組非常顯著地升高(P<0.01)，中低劑量組有升高趨勢，但與對照組比較無顯著差異(P>0.05)；黃丹膠囊高劑量組溶菌酶活性較模型組非常顯著地升高(P<0.01)，中劑量組亦顯著升高(P<0.05)，低劑量組有升高的趨勢但無顯著差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組小鼠唾液中SIgA含量和溶菌酶活性的比較(n=12)

注：與對照組比較，①P<0.01；與模型組比較，②P<0.05；③P<0.01

3 討論

目前,臨床上治療急性上呼吸道感染(acute upper respiratory infections，AURI)大多從解除癥狀著手，包括退熱、消炎，使用抗菌藥和解熱鎮(zhèn)痛藥，卻并沒有從患者的體質(zhì)出發(fā)，解決根本問題，以致體虛者反復(fù)用藥，卻反復(fù)感染，并且不可避免地產(chǎn)生耐藥性，并受到藥物毒副作用的影響。AURI在一年四季均有發(fā)生，常在患者免疫力低下時和冬季多發(fā)，究其原因，一方面，由于冬季干燥，鼻黏膜容易發(fā)生細(xì)小的破裂，易導(dǎo)致細(xì)菌、病毒等人侵。另一方面，機體受到寒冷刺激，致使呼吸道毛細(xì)血管阻力增高，滲透性降低，SIgA明顯減少，溶菌酶的活力降低[2]。SIgA是黏膜免疫系統(tǒng)的主要效應(yīng)分子，主要存在于淚液、唾液、乳汁和呼吸道、消化道及泌尿生殖道等黏膜表面分泌液中[3]。本實驗結(jié)果顯示：模型組動物唾液中的SIgA明顯減少，溶菌酶的活力顯著降低，說明寒冷刺激可以降低上呼吸道的黏膜免疫功能，使得細(xì)菌、病毒等病原體易于侵入，導(dǎo)致上呼吸道感染的發(fā)生，甚至繼而誘導(dǎo)下呼吸道及全身感染的發(fā)生。并且也說明，寒冷刺激小鼠模型復(fù)制成功。

中醫(yī)認(rèn)為，上呼吸道感染可納入外感發(fā)熱、感冒范疇，通常發(fā)生于受涼、淋雨和過度疲勞時，正氣受損，易感外邪。我院總結(jié)近幾年的臨床治療經(jīng)驗，研制出由黃芪、丹參、魚腥草、柴胡、葛根、甘草組成的黃丹膠囊，在臨床上用于治療反復(fù)AURI者獲得較好的療效，既能減輕癥狀，又能減少患者的患病次數(shù)。黃芪是健脾補氣藥的代表，內(nèi)可大補脾肺之氣，外可固表止汗，主要用于治療肌表衛(wèi)氣不固。其具有強心、調(diào)節(jié)血壓，增強免疫、抗菌、抗病毒、保護(hù)腎功能、延緩衰老等作用[4]。丹參味苦、微辛，性微寒，入心、肝經(jīng)。其具有腦組織保護(hù)、改善腎功能、減慢心率、鎮(zhèn)靜、安眠等作用，可調(diào)節(jié)免疫功能、促進(jìn)組織修復(fù)等[5]。魚腥草性辛，味微寒，入肺經(jīng)。其具有較強的抗菌、抗病毒、增強免疫力及清熱解毒作用[6]。柴胡味辛、苦，性微寒，歸肝、膽、肺經(jīng)，具有疏散退熱、疏肝解郁、升舉陽氣的功效。其具有解熱、抗炎、保肝、抗菌、抗病毒、促酶分泌、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等諸多作用[7]。葛根味甘、辛，性平，入脾、胃經(jīng)，發(fā)表解肌，清熱生津。甘草味甘、平，入脾、胃、肺經(jīng)，補脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥。本實驗結(jié)果顯示，黃丹膠囊可升高動物因寒冷刺激而減少的SIgA，同時還能提高其溶菌酶活性，表明黃丹膠囊能夠提高上呼吸道黏膜體液免疫功能，為黃丹膠囊臨床上用于治療體虛反復(fù)AURI者提供了實驗依據(jù)。

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[4] 陳國英.黃芪的藥理作用研究進(jìn)展[J].北方藥學(xué),2013,10(10):53.

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[6] 杜向群,陳敏燕,許穎.魚腥草成分、藥理的研究進(jìn)展[J].江西中醫(yī)藥,2012,43(2):66-68.

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Effect of Huangdan capsule on mucosal immune function of cold stimulated mouse model

Chen Zhang1，Ouyang Gang1，Geng Yandong1，Wu Kui1,Zou Feng2

1.Department of Respiratory Infection,General Hospital of Chengdu Military Command,Chengdu,Sichuan,610083,China;2.Department of Infection Control,the Institution Hospital of Chengdu Military Command,Chengdu,Sichuan,610011,China

Objective To observe the effect of Huangdan capsules on the secretion of secretory immunoglobulin A(SIgA) and lysozyme activity in saliva of the cold stimulated mouse model.Methods Mice were randomly divided into 5 groups:one control group,one cold stimulated model group and three treatment groups(Huangdan capsule at high dose,moderate dose and low dose,respectively);all animals,except those in control group,were stimulated at -20 ℃ cold environment for 15 minutes,once a day,for 3 consecutive days;Huangdan capsules at dose of 1,2,4 g/kg were given to mice in the three treatment groups,respectively by gavage 1 hour before cold stimulation every day;on the 3rd day,after cold stimulation,each mouse was given 0.1% pilocarpine by celiac injection,and then saliva were collected,and the level of SIgA and the activity of lysozyme were detected.Results After cold stimulation for 3 days,the levels of SIgA and activity of lysozyme in the saliva of the mice decreased significantly,the level of SIgA of mice in high dose group were significantly higher than that of mice in model group(P<0.01);the levels of SIgA of mice in moderate dose group and low dose group increased but were not significantly different from that of mice in model group(P>0.05) and from that of mice in high dose group as well(P>0.05);the activity of lysozyme of mice in high dose group and moderate dose group increased with no obvious difference in between but were much higher than that of mice in model group(P<0.05 orP<0.01),and the activity of the mice in low dose group had certain increase but no difference from that of mice in model group(P>0.05),while no difference from those of mice in high dose group and moderate group(P>0.05).Conclusions Huangdan capsule can improve humoral immune function of the upper respiratory tract mucous membrane in cold stimulated mouse model.

cold stimulation;upper respiratory tract mucous membrane;Huangdan capsule;secretory immunoglobulin A;lysozyme

610083 成都,成都軍區(qū)總醫(yī)院感染呼吸科(陳 章，歐陽剛，耿延?xùn)|，吳 奎)；成都軍區(qū)機關(guān)醫(yī)院感控科(鄒 鋒)

鄒 鋒,電話：028-86687837

R 979.5

A

1004-0188(2014)06-0591-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2014.06.005

2014-05-08)