種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的HPLC法快速分析

于曉萍+姜業朝+拜鈺

摘要：為了建立對種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙含量的高效液相色譜快速分析方法，使用配備了瑞典Kromasil 100-5-C18不銹鋼色譜柱的美國Angilent 1260高效液相色譜儀，利用高效液相色譜法測定種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量，以甲醇-水溶液為流動相，采用梯度洗脫；流速控制在1.0 mL/min；柱溫：室溫；213 nm 的檢測波長；進樣體積20 μL。結果表明，在10～500 mg/L的范圍內，吡蟲啉、甲霜靈和福美雙線性關系良好，平均回收率為100.18%、99.97%和99.94%，吡蟲啉的相對標準偏差為0.0613%，甲霜靈的相對標準偏差為0.045 1%，福美雙的相對標準偏差為0.051 5%。此方法可快速測定種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量，具有方法新穎、快速、簡便、準確、精密度好等優點。

關鍵詞：種子處理粉劑；吡蟲啉；甲霜靈；福美雙；高效液相色譜法；快速

中圖分類號： O657.7+2文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）02-0255-03

收稿日期：2013-09-25

基金項目：2013年江蘇省高等職業院校國內高級訪問學者計劃（編號：FX001）；江蘇省大學生創新創業訓練計劃（編號：201313754002Y）。

作者簡介：于曉萍（1970—），女，江蘇揚州人，副教授，研究方向為有機合成、儀器分析。E-mail：jsyzyuxp@163.com。吡蟲啉（imidacloprid，CAS：105827-78-9；138261-41-3），是煙堿類超高效殺蟲劑，由德國拜耳公司和日本特殊農藥株式會社共同開發。甲霜靈（英文名稱：metalaxyl，CAS：57837-19-1）是瑞士汽巴-嘉基公司1977年開發出的一種防治藻菌綱病害的新型、高效、低毒、內吸性酰胺類殺菌劑[1]。福美雙（英文名稱：thiram，CAS：137-26-8）是一種廣譜、低毒、保護性有機硫殺菌劑[2]，20世紀60年代初天津市農藥研究所開始生產、推廣使用福美雙，現已成為我國殺菌劑主要品種之一[3]。含有吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的種子處理粉劑是農藥公司新開發的集防病治蟲抗旱等功能于一體的新型種子處理粉劑。新型種子處理粉劑的推廣使用，帶來對其含量分析的要求，這關系到控制殺菌殺蟲效果、質量、生產成本等方面的問題[4-5]。吡蟲啉目前的測定方法是以乙腈-水（體積比1 ∶3）為流動相的高效液相色譜法[6-7]和以甲醇-02%磷酸水溶液（體積比40 ∶60） 為流動相的高效液相色譜法[8-9]；甲霜靈目前的測定方法有氣相色譜法和高效液相色譜法[10-11]；福美雙有高效液相色譜分析方法的報道[12-13]。由于含有吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的種子處理粉劑是新型種子處理粉劑，未有測定方法的報道。本方法以甲醇-水為流動相，在分離過程中設計合理的梯度洗脫過程，實現了高效液相色譜分析法同時測定種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量，具有方法新穎、快速、簡便、準確、精密度好等優點。

1材料與方法

1.1儀器

采用配備了瑞典AKZO NOBEL公司Kromasil 100-5-C18不銹鋼色譜柱，150 mm×4.6 mm，具有可變波長紫外檢測器的Angilent 1260高效液相色譜儀；美國Angilent液相色譜工作站；20 μL的自動進樣器；孔徑為0.45 μm的過濾器；賽多利斯cp225D型十萬分之一電子分析天平。

1.2試劑

吡蟲啉標準對照品（98.6%，上海市農藥研究所檢測中心）；甲霜靈標準對照品（99.2%，上海市農藥研究所檢測中心）；福美雙標準對照品（98.3%，上海市農藥研究所檢測中心）；甲醇：色譜純；新制二次蒸餾水；其余試劑均為分析純。

種子處理粉劑樣品（有效成分：含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙均在10%左右）由江蘇糧滿倉農化有限公司提供。

1.3色譜條件

流動相：甲醇-水溶液在不同時間的體積比為40 ∶60（0 min）、40 ∶60（5 min）、80 ∶20（15 min）、80 ∶20（25 min）、40 ∶60（平衡5 min）；流速控制在1.0 mL/min；柱溫：室溫（要求試驗過程中溫差變化小于2 ℃）；檢測波長：213 nm；進樣體積20 μL。在此條件下樣品與干擾物質完全分離，吡蟲啉保留時間約為2.5 min，甲霜靈保留時間約為10.3 min，福美雙保留時間約為4.3 min，色譜圖見圖1、2、3。種子處理粉劑中吡蟲啉、甲霜靈和福美雙在此色譜條件下能夠完全分離，色譜圖見圖4。

1.4溶液的配制

1.4.1吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準混合溶液的制備稱取吡蟲啉、甲霜靈、福美雙各0.05 g（精確至0.000 02 g），依次放入 50 mL 容量瓶中，加入約40 mL流動相，用超聲波振蕩10 min使其溶解，取出冷卻至室溫后，加入流動相定容至刻度，搖勻備用，其中含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙質量濃度均為1 000.0 mg/L。

1.4.2試樣溶液的制備稱取相當于0.025 g吡蟲啉，或0025 g甲霜靈，或0.025 g福美雙（精確至0.000 02 g），放入25 mL容量瓶中，加入約20 mL流動相，用超聲波振蕩10 min使其溶解，取出冷卻至室溫后，加入流動相定容至刻度，搖勻備用。

2結果與分析

2.1檢測波長的確定

由于吡蟲啉、甲霜靈和福美雙在213 nm處均有較好的吸收，且雜質干擾較少，經過試驗可以得知，在此波長下同時檢測吡蟲啉、甲霜靈和福美雙3個樣品，3個樣品的檢測線性范圍、檢測精密度及回收率都可滿足要求，故選擇此波長處進行檢測。

2.2線性關系考察endprint

利用1 000.0 mg/L的吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準混合溶液，配制含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的質量濃度由低到高依次均為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各質量濃度溶液進樣，記錄色譜圖。以吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品溶液的質量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標作出對應的關系曲線，吡蟲啉的線性回歸方程為y=36 030x-21198，相關系數r=0.999 99；甲霜靈的線性回歸方程為y=34 501x+40.576，相關系數r=0.999 96；福美雙的線性回歸方程為y=59 879x+14.923，相關系數r=1.000 00。由此可見：該方法對于吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量在10～500 mg/L范圍內線性關系良好。

2.3方法精密度、重現性試驗

在前述色譜操作條件下，分別對吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的3批試樣進行5次平行測定，結果吡蟲啉含量的RSD為0061 3%，甲霜靈含量的RSD為0.045 1%，福美雙含量的RSD為0.051 5%（表1）。結果表明：在此條件下進行分析，標準偏差小，精密度高，而且重現性良好。

2.4方法的準確度試驗

精密稱取5份已知含量的樣品，分別精密加入吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品，制成供試品溶液，進行測定，計算回收率，結果見表2。

3結論

參考文獻：

[1]Urrea K，Rupe J C，Rothrock C S. Effect of fungicide seed treatments，cultivars，and soils on soybean stand establishment[J]. Plant Disease，2013，97（6）：807-812.

[2]Srivastava R K，Singh B K，Mani D. Effect of organic matter on adsorption and persistence of thiram fungicide in different soils[J]. Asian Journal of Chemistry，2013，25（1）：292-296.

[3]Morales M，Moratinos H，Gonzalez T. Effect of fungicides on physiology and health characteristics of rice seeds during storage[J]. Revista de la Facultad de Agronomia de la Universidad del Zulia，2012，29（4）：505-524.

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[6]GB/T 23379—2009水果、蔬菜及茶葉中吡蟲啉殘留的測定[S]. 北京：中國標準出版社，2009.

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[8]王丹丹，丁明祥.吡蟲啉母藥的高效液相色譜分析[J]. 農藥，2010，49（8）：576-577，584.

[9]丑靖宇，李超，鞠光秀，等. 29%吡蟲啉·多菌靈·烯肟菌胺懸浮種衣劑的高效液相色譜分析[J]. 農藥，2012，51（4）：275-277.

[10]譚維. 烯酰·甲霜靈30%可濕性粉劑的高效液相色譜分析方法[J]. 農藥科學與管理，2010，31（1）：41-44.

[11]吳學宏，劉鵬飛，韋福金，等. 15%·霜·福懸浮種衣劑的高效液相色譜分析[J]. 農藥，2007，46（2）：112-113.

[12]黃永忠，魏東，楊彩玲.15%福美雙·吡蟲啉·烯唑醇懸浮種衣劑的RP-HPLC分析[J]. 農藥，2008，47（2）：114-115.

[13]董廣新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美雙懸乳劑高效液相色譜分析[J]. 農藥，2005，44（12）：551-552.endprint

利用1 000.0 mg/L的吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準混合溶液，配制含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的質量濃度由低到高依次均為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各質量濃度溶液進樣，記錄色譜圖。以吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品溶液的質量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標作出對應的關系曲線，吡蟲啉的線性回歸方程為y=36 030x-21198，相關系數r=0.999 99；甲霜靈的線性回歸方程為y=34 501x+40.576，相關系數r=0.999 96；福美雙的線性回歸方程為y=59 879x+14.923，相關系數r=1.000 00。由此可見：該方法對于吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量在10～500 mg/L范圍內線性關系良好。

2.3方法精密度、重現性試驗

在前述色譜操作條件下，分別對吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的3批試樣進行5次平行測定，結果吡蟲啉含量的RSD為0061 3%，甲霜靈含量的RSD為0.045 1%，福美雙含量的RSD為0.051 5%（表1）。結果表明：在此條件下進行分析，標準偏差小，精密度高，而且重現性良好。

2.4方法的準確度試驗

精密稱取5份已知含量的樣品，分別精密加入吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品，制成供試品溶液，進行測定，計算回收率，結果見表2。

3結論

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[13]董廣新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美雙懸乳劑高效液相色譜分析[J]. 農藥，2005，44（12）：551-552.endprint

利用1 000.0 mg/L的吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準混合溶液，配制含吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的質量濃度由低到高依次均為10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各質量濃度溶液進樣，記錄色譜圖。以吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品溶液的質量濃度為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標作出對應的關系曲線，吡蟲啉的線性回歸方程為y=36 030x-21198，相關系數r=0.999 99；甲霜靈的線性回歸方程為y=34 501x+40.576，相關系數r=0.999 96；福美雙的線性回歸方程為y=59 879x+14.923，相關系數r=1.000 00。由此可見：該方法對于吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的含量在10～500 mg/L范圍內線性關系良好。

2.3方法精密度、重現性試驗

在前述色譜操作條件下，分別對吡蟲啉、甲霜靈和福美雙的3批試樣進行5次平行測定，結果吡蟲啉含量的RSD為0061 3%，甲霜靈含量的RSD為0.045 1%，福美雙含量的RSD為0.051 5%（表1）。結果表明：在此條件下進行分析，標準偏差小，精密度高，而且重現性良好。

2.4方法的準確度試驗

精密稱取5份已知含量的樣品，分別精密加入吡蟲啉、甲霜靈和福美雙標準品，制成供試品溶液，進行測定，計算回收率，結果見表2。

3結論

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[12]黃永忠，魏東，楊彩玲.15%福美雙·吡蟲啉·烯唑醇懸浮種衣劑的RP-HPLC分析[J]. 農藥，2008，47（2）：114-115.

[13]董廣新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美雙懸乳劑高效液相色譜分析[J]. 農藥，2005，44（12）：551-552.endprint