植物提取物對食源性致病菌的抑菌活性

孫立春+吳璐璐+許劍鋒

摘要：用濾紙片法評價14種植物的水提物和醇提物對單增李斯特菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、大腸桿菌5種食源性致病菌的抑菌效果。抑菌圈大小表明：植物醇提物的抑菌效果較植物水提物好，其中五倍子的醇提物和石榴皮的醇提物對5種食源性致病菌具有廣譜抑制作用，并且它們的抑制作用強于同濃度的山梨酸鉀；此外丁香醇提物、甘草水提物、黃芩醇提物、五倍子水提物、拳參醇提物等都對5種致病菌具有較好的抑制作用。

關鍵詞：植物提取物；致病菌；抑菌作用；抑菌圈

中圖分類號： TS205文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）02-0275-03

收稿日期：2013-06-24

基金項目：上海市科委工程中心建設項目（編號：11DZ2280300）。

作者簡介：孫立春（1965—），男，山東蓬萊人，碩士，工程師，研究方向為海洋生物制藥和食品化學。E-mail：lcsun@shou.edu.cn。

通信作者：許劍鋒，男，博士，副教授，研究方向為海洋藥物和天然產物化學。Tel：（021）61900388；E-mail：jfxu@shou.edu.cn。近年來，由食源性致病菌引起的食物中毒事件屢見不鮮，輕則會引起食用者的不適，重則會導致食物中毒，甚至造成死亡。評定食品防腐劑抑菌活性的重要指標是看它們是否對食品中常見的致病菌具有抑制作用。在抑菌活性的檢測方法中，濾紙片抑菌試驗法是評價物質是否具有抑菌活性的常用方法。從天然植物中提取抑菌成分具有來源廣泛、種類繁多、抗菌效果好、抑菌范圍廣、毒性相對低的特點[1-5]。本研究選擇5種常見的食源性致病菌，初步判定和比較14種天然植物水提物和醇提物的抑菌活性，為研究天然植物提取物對食品腐敗菌的抑菌作用提供一定的理論基礎。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗菌種單增李斯特菌（Listeria monocytogenes，ATCC19115）；大腸桿菌（Escherichia coli，ATCC25922）；金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，ATCC25923）；副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，ATCC17802）；蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus，實驗室分離）

1.1.2植物材料本研究以14種天然植物作為研究對象：白芍、拳參、大黃、黃連、黃芩、甘草、菊花、丁香、五倍子、烏梅、金銀花、香附、肉桂、石榴皮。

1.1.3培養基TSB培養基：15 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆胨，5 g/L氯化鈉。TSA培養基：15 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆胨，5 g/L氯化鈉，13 g/L瓊脂。

1.1.4試驗試劑氯化鈉（分析純）、95%乙醇均購自國藥集團化學試劑有限公司；去離子水（上海海洋大學公共實驗樓提供）。

1.1.5試驗儀器RE-52A旋轉蒸發儀，上海青浦滬西儀器廠生產；DRT-TW（調溫）電熱套，鞏義市予華儀器有限責任公司生產；HH-S11.6數顯恒溫水浴鍋，上海博迅實業有限公司生產；Esco垂直流超凈工作臺，新加坡Esco公司生產；MLS-3750全自動高壓蒸汽滅菌鍋，日本三洋公司生產；DHG-9053A電熱恒溫鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司生產；GNP9080隔水式培養箱，上海精宏實驗設備有限公司生產。

1.2試驗方法

1.2.114種天然植物水提物和醇提物的制備分別稱取200 g白芍、拳參、大黃、黃芩等14種天然植物材料，粉碎后分別放入500 mL回流瓶中；分別在500 mL回流瓶中加入 200 mL 95%乙醇，于80 ℃回流煮沸5 h；倒出提取液后，再分別向各個回流瓶中加入200 mL 95%乙醇，回流煮沸5 h后合并提取液。將合并后的粗提取液進行減壓抽濾后倒入旋轉蒸發瓶中，在65 ℃條件下進行減壓旋轉蒸發，除去溶劑后即得到提取的膏狀物質。植物水提法與醇提法相同，但溶劑為200 mL去離子水。得到水提物和醇提物后，分別配置14種濃度為0.001 g/mL的植物醇提物和植物水提物，待用。以山梨酸鉀為對照，濃度為0.01 g/mL。

1.2.2試驗準備活化菌種：挑取斜面上的菌種，置于 5 mL TSB無菌試管中，在搖床上于180 r/min條件下培養18～22 h（革蘭氏陽性菌的培養溫度為37 ℃，革蘭氏陰性菌的培養溫度為30 ℃），活化2～3代后備用。

無菌濾紙片的制備：先用打孔器制作直徑為6 mm的濾紙片，121 ℃高壓滅菌20 min，烘干3～4 h后備用。

平板的制備：取30 g TSA培養基并加熱溶解于1 L水中，121 ℃高壓滅菌20 min后，冷卻至50 ℃左右時倒入無菌培養皿中，每個培養皿中約15～20 mL，置于無菌環境中備用。

1.2.3天然植物水提物和醇提物的抗菌活性測定抑菌圈直徑參照Ali等的方法[6-9]，并略有改動。將均勻涂菌（菌濃度為107 個/mL）后的平板置于37 ℃或30 ℃恒溫培養箱中 5 min，使表面干燥；用無菌鑷子將濾紙片貼在培養基表面，輕壓紙片以確保接觸良好，然后吸取10 μL 0.001 g/mL的樣品溶液于濾紙表面并作標記；37 ℃或30 ℃恒溫倒置培養18～22 h，觀察抑菌圈大小并測定提取物與溶劑的抑菌圈的凈直徑。濾紙片試驗重復3次，取平均值。

2結果與分析

3討論

由研究結果可知：五倍子、石榴皮的醇提物對5種食源性致病菌具有廣譜的抑制作用，并且其抑制作用大都強于同濃度的山梨酸鉀；丁香醇提物、甘草水提物、黃芩醇提物、五倍子水提物、拳參醇提物等都對5種致病菌具有較好的抑制作用。天然的植物提取物對食源性致病菌具有廣泛的抑制作用，可能的原因是植物提取物中抑菌活性成分多樣且復雜，許多食endprint

源性致病菌未對這些活性物質產生抗性，因此天然的植物提取物是篩選食品防腐劑的重要來源。

整體看來，14種天然的植物水提物對金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用，對其他致病菌沒有較好的抑制作用；植物醇提物對單增李斯特菌的抑制作用較弱，而對大腸桿菌、副溶

血性弧菌和蠟樣芽孢桿菌具有較好的抑制作用。整體看來，植物醇提物的抑菌效果強于植物水提物，其可能的原因是植物醇提物中的抑菌活性成分較水提物多，在后續的關于從天然食品中提取食品防腐菌的試驗中，可選擇植物醇提物作為主要的試驗對象。

天然植物醇提物對5種食源性致病菌的抑菌效果優于水提物，其中五倍子醇提物、石榴皮醇提物、丁香醇提物、黃芩醇提物、拳參醇提物等具有相對較廣的抑菌范圍。

參考文獻：

[1]陳冬梅，唐春紅. 國外天然食品防腐劑的研究進展[J]. 中國食品添加劑，2008（2）：73-77.

[2]Masoodi M H，Ahmed B，Zargar I M，et al. Antibacterial activity of whole plant extract of Marrubium vulgare[J]. African Journal of Biotechnology，2008，7（2）：86-87.

[3]齊莉莉，王進波. 姜黃提取物的抗氧化及抗菌活性研究[J]. 中國調味品，2008（2）：72-73，83.

[4]楊國峰，周建新，汪海峰，等. 花生殼提取物的制備及其抗氧化與抗菌活性的研究進展[J]. 食品與發酵工業，2007，33（2）：97-101.

[5]吳傳萬，杜小鳳，王偉中，等. 植物源抑菌活性成分研究進展[J]. 淮陰工學院學報，2004，13（3）：28-35.

[6]Ali S M，Khan A A，Ahmed I，et al. Antimicrobial activities of eugenol and cinnamaldehyde against the human gastric pathogen Helicobacter pylori[J]. Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials，2005（4）：20.

[7]張發明，李應超，董寶明，等. 烏梅中化合物V對雞大腸桿菌的體內和體外殺滅作用研究[J]. 科技導報，2008，26（22）：71-74.

[8]趙全民，于錄，鄧旭明，等. 中藥單體化合物光甘草定的體外抗菌活性研究[J]. 中國預防獸醫學報，2010，32（3）：225-227.

[9]張英，李娜，張桂臻，等. 中藥益母草中黃酮抑菌作用的微量量熱法研究[J]. 臨沂師范學院學報，2006，28（3）：56-57，61.endprint

源性致病菌未對這些活性物質產生抗性，因此天然的植物提取物是篩選食品防腐劑的重要來源。

整體看來，14種天然的植物水提物對金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用，對其他致病菌沒有較好的抑制作用；植物醇提物對單增李斯特菌的抑制作用較弱，而對大腸桿菌、副溶

血性弧菌和蠟樣芽孢桿菌具有較好的抑制作用。整體看來，植物醇提物的抑菌效果強于植物水提物，其可能的原因是植物醇提物中的抑菌活性成分較水提物多，在后續的關于從天然食品中提取食品防腐菌的試驗中，可選擇植物醇提物作為主要的試驗對象。

天然植物醇提物對5種食源性致病菌的抑菌效果優于水提物，其中五倍子醇提物、石榴皮醇提物、丁香醇提物、黃芩醇提物、拳參醇提物等具有相對較廣的抑菌范圍。

參考文獻：

[1]陳冬梅，唐春紅. 國外天然食品防腐劑的研究進展[J]. 中國食品添加劑，2008（2）：73-77.

[2]Masoodi M H，Ahmed B，Zargar I M，et al. Antibacterial activity of whole plant extract of Marrubium vulgare[J]. African Journal of Biotechnology，2008，7（2）：86-87.

[3]齊莉莉，王進波. 姜黃提取物的抗氧化及抗菌活性研究[J]. 中國調味品，2008（2）：72-73，83.

[4]楊國峰，周建新，汪海峰，等. 花生殼提取物的制備及其抗氧化與抗菌活性的研究進展[J]. 食品與發酵工業，2007，33（2）：97-101.

[5]吳傳萬，杜小鳳，王偉中，等. 植物源抑菌活性成分研究進展[J]. 淮陰工學院學報，2004，13（3）：28-35.

[6]Ali S M，Khan A A，Ahmed I，et al. Antimicrobial activities of eugenol and cinnamaldehyde against the human gastric pathogen Helicobacter pylori[J]. Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials，2005（4）：20.

[7]張發明，李應超，董寶明，等. 烏梅中化合物V對雞大腸桿菌的體內和體外殺滅作用研究[J]. 科技導報，2008，26（22）：71-74.

[8]趙全民，于錄，鄧旭明，等. 中藥單體化合物光甘草定的體外抗菌活性研究[J]. 中國預防獸醫學報，2010，32（3）：225-227.

[9]張英，李娜，張桂臻，等. 中藥益母草中黃酮抑菌作用的微量量熱法研究[J]. 臨沂師范學院學報，2006，28（3）：56-57，61.endprint

源性致病菌未對這些活性物質產生抗性，因此天然的植物提取物是篩選食品防腐劑的重要來源。

整體看來，14種天然的植物水提物對金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用，對其他致病菌沒有較好的抑制作用；植物醇提物對單增李斯特菌的抑制作用較弱，而對大腸桿菌、副溶

血性弧菌和蠟樣芽孢桿菌具有較好的抑制作用。整體看來，植物醇提物的抑菌效果強于植物水提物，其可能的原因是植物醇提物中的抑菌活性成分較水提物多，在后續的關于從天然食品中提取食品防腐菌的試驗中，可選擇植物醇提物作為主要的試驗對象。

天然植物醇提物對5種食源性致病菌的抑菌效果優于水提物，其中五倍子醇提物、石榴皮醇提物、丁香醇提物、黃芩醇提物、拳參醇提物等具有相對較廣的抑菌范圍。

參考文獻：

[1]陳冬梅，唐春紅. 國外天然食品防腐劑的研究進展[J]. 中國食品添加劑，2008（2）：73-77.

[2]Masoodi M H，Ahmed B，Zargar I M，et al. Antibacterial activity of whole plant extract of Marrubium vulgare[J]. African Journal of Biotechnology，2008，7（2）：86-87.

[3]齊莉莉，王進波. 姜黃提取物的抗氧化及抗菌活性研究[J]. 中國調味品，2008（2）：72-73，83.

[4]楊國峰，周建新，汪海峰，等. 花生殼提取物的制備及其抗氧化與抗菌活性的研究進展[J]. 食品與發酵工業，2007，33（2）：97-101.

[5]吳傳萬，杜小鳳，王偉中，等. 植物源抑菌活性成分研究進展[J]. 淮陰工學院學報，2004，13（3）：28-35.

[6]Ali S M，Khan A A，Ahmed I，et al. Antimicrobial activities of eugenol and cinnamaldehyde against the human gastric pathogen Helicobacter pylori[J]. Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials，2005（4）：20.

[7]張發明，李應超，董寶明，等. 烏梅中化合物V對雞大腸桿菌的體內和體外殺滅作用研究[J]. 科技導報，2008，26（22）：71-74.

[8]趙全民，于錄，鄧旭明，等. 中藥單體化合物光甘草定的體外抗菌活性研究[J]. 中國預防獸醫學報，2010，32（3）：225-227.

[9]張英，李娜，張桂臻，等. 中藥益母草中黃酮抑菌作用的微量量熱法研究[J]. 臨沂師范學院學報，2006，28（3）：56-57，61.endprint