漢中麻鴨腸道定殖菌的生活狀態和分布

王進+陳文強+鄧百萬+彭浩+解修超+孔亞男+劉兆迪+趙娜娜

摘要：采用梯度稀釋和組織培養方法，分別用LB、玫瑰紅鈉及MRS固體培養基對漢中麻鴨腸道定殖菌進行培養并計數，結果表明：漢中麻鴨腸道中定殖有芽孢菌、酵母菌和乳酸菌；芽孢菌在漢中麻鴨小腸后段達到最大值，菌體數達6.3×104 CFU/mL；酵母菌在盲腸達到最大值，菌體數達7.6×104 CFU/mL；乳酸菌在十二指腸后段達到最大值，菌體數達8.6×104 CFU/mL。

關鍵詞：麻鴨；腸道；定殖菌；芽孢菌；酵母菌；乳酸菌；生活狀態；分布

中圖分類號： S834+.835文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）02-0176-02

收稿日期：2013-06-17

作者簡介：王進（1988—），男，陜西禮泉人，碩士，從事微生物資源開發利用研究。

通信作者：陳文強（1956—），男，陜西洋縣人，教授，碩士生導師，主要從事微生物資源保護與利用研究。Email：wenqiangc@126.com。麻鴨為觀賞及肉用兼用型鴨種，在全國各地廣泛分布，紹興麻鴨、高郵麻鴨、吳川麻鴨、微山麻鴨、漢中麻鴨等都是我國麻鴨的優良品種。麻鴨體型較小，羽毛緊湊；毛色麻褐色居多，體軀及背部土黃色并有黑褐色斑點[1]；頭清秀，喙呈橙黃色，脛、蹼多為橘紅色，少數為烏色；初生重為38.7 g，300日齡體重公鴨為1 172 g、母鴨為1 157 g，成年公鴨體重為1 kg、母鴨為1.4 kg；160～180日齡開始產蛋，年產蛋220枚，平均蛋重為68 g/枚，蛋殼顏色以白色為主，還有青色。

芽孢菌（Bacilus）是一種廣泛分布于土壤、水、空氣及動物腸道等處的細菌，對外界有害因子抵抗力強，作為益生菌中的一種，它能分泌高活性胞外產物，其中包含蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等水解酶和一些分解飼料中非淀粉多糖的酶類[2]。酵母菌（Saccharomyces）僅零星存在于動物腸道內，是動物腸道內寄生的一類正常有益菌。酵母細胞富含蛋白質、核酸、維生素和多種酶，具有增加飼料適口性、促進動物對飼料消化吸收能力等功能，并可提高動物對磷的利用率[3]。乳酸菌是動物微生態制劑中研究報道最多、可以分解糖類產生乳酸的革蘭氏陽性菌，厭氧或兼性厭氧生長。乳酸菌在pH值為3.0～4.5時可生長，對胃中酸性環境有一定耐受性[4]。研究表明，乳酸菌能夠調節機體胃腸道正常菌群，保持微生態平衡，提高食物消化率和生物價，降低血清膽固醇，控制內毒素，抑制腸道內腐敗菌生長繁殖和腐敗產物的產生，制造營養物質，刺激組織發育，從而對機體的營養狀態、生理功能、細胞感染、藥物效應、毒性反應、免疫反應、腫瘤發生、衰老過程和突然的應激反應等產生作用；乳酸菌亦可通過調節腸道pH值，以激活胃蛋白酶，促進胃腸蠕動，減輕漲氣和促進肝臟功能[5]。

為了使各類芽孢益生菌劑、酵母制劑及乳酸菌劑在我國畜牧養殖業中得到更好的應用[6-7]，全國不同地區對麻鴨腸道各個部位定殖菌數量和菌體萌發數量進行了檢測分析，以推斷定殖菌在麻鴨腸道中的萌發和生活狀態；但是，陜西漢中麻鴨腸道內芽孢菌、酵母菌及乳酸菌數量及分布尚未見研究報道。為此，以陜西漢中麻鴨為試驗材料，通過對其腸道定殖菌生活狀態和分布進行研究，為各類益生菌在漢中麻鴨養殖中更好的應用提供理論依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗麻鴨購自陜西漢中漢臺區豐輝貿易市場。

1.1.2培養基LB培養基：胰蛋白胨10.0 g、酵母提取物 5.0 g、瓊脂15.0 g、氯化鈉10.0 g、H2O 1 L；玫瑰紅鈉培養基：蛋白胨5.0 g、瓊脂14.0 g、葡萄糖10.0 g、玫瑰紅鈉0013 3 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、K2HPO4 1.0 g、H2O 1 L；MRS改良固體培養基：蛋白胨10.0 g、瓊脂20.0 g、葡萄糖20.0 g、牛肉膏10.0 g、酵母膏5.0 g、檸檬酸二胺2.0 g、乙酸鈉 5.0 g、吐溫80 1.0 mL、MgSO4·7H2O 0.58 g、K2HPO4 2.0 g、MnSO4·4H2O 0.25 g、CaCO3 2.0 g、H2O 1 L，pH值6.8。

1.1.3主要儀器與設備ZHWY-210 2C型恒溫振蕩器，上海智誠分析儀器制造有限公司生產；SW-CJ-1F型超凈工作臺，蘇州安泰空氣技術有限公司生產；BJ100M型電子天平，上海精科天美科學儀器有限公司生產；LS-B50L型立式圓形壓力蒸氣滅菌器，上海醫用核子儀器廠生產；LRH-800-GS型人工氣候箱，韶關市明天環保儀器有限公司生產；DZKW-S-4型恒溫水浴鍋，惠州市新旭實業有限公司生產。

1.2試驗方法

1.2.1麻鴨腸道的處理將購買的麻鴨空腹處理3 d，宰殺并解剖，取出腸道，用75%乙醇清洗腸道表面，待用。

1.2.2芽孢菌、酵母菌、乳酸菌的數量測定將麻鴨待用腸道分為7段，其中包括十二指腸2段、小腸4段、盲腸1段；無菌手術刀剖開各段腸道，將腸道內容物分別溶于100 mL已滅菌的生理鹽水中，攪拌均勻，為待測樣品[8]。取待測樣品 1.0 mL 分別于2支試管中，其中1支試管樣品經75 ℃熱處理 20 min，另1支試管樣品不經熱處理。用生理鹽水梯度稀釋10、100、1 000倍，各濃度取100 μL涂布于LB培養基、玫瑰紅鈉培養基、MRS固體培養基上，并做3個平行皿。芽孢菌于 37 ℃ 恒溫培養36 h，酵母菌于28 ℃恒溫培養48～ 72 h，乳酸菌于 37 ℃ 恒溫培養48～72 h，分別統計菌落數和計算菌體總數[9-10]。

1.2.3樣品活性菌體數量統計1 mL菌液中活性菌體數量的計算公式為：樣品活性菌體數量=（未熱處理樣品菌落數-熱處理樣品菌落數）×稀釋倍數×10。

2結果與分析endprint

2.1漢中麻鴨不同腸道區段定殖菌活性菌體數量

2.1.1芽孢菌在不同腸道區段活性菌體數量由表1可見，芽孢菌在漢中麻鴨腸道內可以定殖，少數芽孢菌滯留在麻鴨十二指腸處，進入小腸后開始萌發，并進行生長繁殖，在小腸后段達到最大值，菌體數達6.3×104 CFU/mL，而后重新轉入休眠體的芽孢狀態，完成一個生活周期。小腸后段即盲腸附近是芽孢菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.1.2酵母菌在不同腸道區段活性菌體數量由表2可見，酵母菌在漢中麻鴨腸道內雖可定殖，但菌體數量較少，分布范圍較窄，在小腸后段才開始萌發、繁殖；在盲腸處菌體數量達到最大值，為7.6×104 CFU/mL。盲腸附近是酵母菌生長繁殖和滯留的場所。

2.1.3乳酸菌在不同腸道區段活性菌體數量由表3可見，乳酸菌在漢中麻鴨腸道內可以定殖，十二指腸前段即可見乳酸菌菌落；十二指腸后段乳酸菌菌體數達到最大，為 8.6×104 CFU/mL；至小腸中段時乳酸菌落幾乎不能檢出。十二指腸后段及小腸前段附近是乳酸菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.2漢中麻鴨腸道中定殖菌的分布

以漢中麻鴨腸道中芽孢菌、酵母菌、乳酸菌菌體數量為縱坐標，以活性菌體在不同腸道區段的分布部位為橫坐標作圖（圖1）。芽孢菌耐酸堿，生長最適pH值為6.0左右，能分泌高活性的胞外產物，在胃液中仍保持活性，以孢子狀態進入消化道，在小腸內開始萌發，故芽孢菌主要分布和定殖在遠離胃端的小腸中、后段。酵母菌多分布在土壤、水和動植物體表面，僅零星分布在動物腸道內，因其富含蛋白質、核酸、維生素和多種酶，具有促進對飼料的消化吸收功能，在漢中麻鴨中雖有酵母菌菌落檢出，但分布和定殖在小腸后段和盲腸。乳酸菌生長的最適pH值為4.0左右，在動物腸道內能通過生物拮抗，阻止和抑制致病菌侵入腸道，還可提高食物消化率，因此，在與胃部相連的十二指腸即能檢出乳酸菌菌落，乳酸菌主要分布和定殖在十二指腸后段和小腸前段。

3小結與討論

采用梯度稀釋和組織培養方法研究陜西漢中麻鴨腸道中定殖菌的生活狀態和分布，研究結果表明，小腸后段芽孢菌數量達最大值6.3×104 CFU/mL，盲腸酵母菌數量達最大值 7.6×104 CFU/mL，十二指腸后段乳酸菌數量達最大值 8.6×104 CFU/mL。

芽孢菌劑、酵母菌劑及乳酸菌劑作為動物益生菌或腸道競爭抑制劑，除了可以改善、調整腸道菌群外，還可抑制有害細菌在腸道內膜的吸附和定殖，飼喂動物日糧中添加一定比例，可明顯降低料肉比。

芽孢菌、酵母菌及乳酸菌產生多種消化酶，是提高動物生產性能的一個重要體現，它可以幫助動物消化吸收營養物質，具有較強的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同時，還具有降解飼料中復雜碳水化合物的酶，如果膠酶、葡聚糖酶、纖維素酶等，這些酶能夠破壞植物飼料細胞的細胞壁，促使細胞的營養物質釋放出來，并能消除飼料中的抗營養因子，減少抗營養因子對動物消化利用的障礙。

參考文獻：

[1]辭海編輯委員會. 辭海：生物分冊[M]. 上海：上海辭書出版社，1999：524.

[2]姚茹，王智勇，王廣軍，等. 飼料中添加芽孢桿菌對草魚生長和水質的影響[J]. 江蘇農業科學，2013，41（4）：214-216.

[3]Sekirov I. Gut microbiota in health and disease[J]. Physiological Reviews，2010，90（3）：859-904.

[4]Wong S，Rawls J F. Intestinal microbiota composition in fishes is influenced by host ecology and environment[J]. Molecular Ecology，2012，21（13）：3100-3102.

[5]Tam N K，Uyen N Q，Hong H A，et al. The intestinal life cycle of Bacillus subtilis and close relatives[J]. Journal of Bacteriology，2006，188（7）：2692-2700.

[6]陳瓊. 雞源益生菌的分離、篩選、鑒定與特性研究[D]. 廣州：華南理工大學，2004：1-64.

[7]蔡雁，郝勃，喻子牛. 抗動物病原菌芽孢桿菌的篩選、初步鑒定和抗菌活性[J]. 微生物學雜志，2005，25（5）：19-22.

[8]方祥，胡文鋒，張輝華，等. 乳酸菌的分離、鑒定及其生長特性[J]. 中國微生態學雜志，2000，12（5）：262-264.

[9]史懷平. 朱鹮消化道正常菌群的分離鑒定及微生態制劑的研究[D]. 楊凌：西北農林科技大學，2005：1-54.

[10]賴國旗，韋克，張德純，等. 健康動物腸道正常菌群的分離與鑒定[J]. 中國微生態學雜志，1997，9（2）：23-25.endprint

2.1漢中麻鴨不同腸道區段定殖菌活性菌體數量

2.1.1芽孢菌在不同腸道區段活性菌體數量由表1可見，芽孢菌在漢中麻鴨腸道內可以定殖，少數芽孢菌滯留在麻鴨十二指腸處，進入小腸后開始萌發，并進行生長繁殖，在小腸后段達到最大值，菌體數達6.3×104 CFU/mL，而后重新轉入休眠體的芽孢狀態，完成一個生活周期。小腸后段即盲腸附近是芽孢菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.1.2酵母菌在不同腸道區段活性菌體數量由表2可見，酵母菌在漢中麻鴨腸道內雖可定殖，但菌體數量較少，分布范圍較窄，在小腸后段才開始萌發、繁殖；在盲腸處菌體數量達到最大值，為7.6×104 CFU/mL。盲腸附近是酵母菌生長繁殖和滯留的場所。

2.1.3乳酸菌在不同腸道區段活性菌體數量由表3可見，乳酸菌在漢中麻鴨腸道內可以定殖，十二指腸前段即可見乳酸菌菌落；十二指腸后段乳酸菌菌體數達到最大，為 8.6×104 CFU/mL；至小腸中段時乳酸菌落幾乎不能檢出。十二指腸后段及小腸前段附近是乳酸菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.2漢中麻鴨腸道中定殖菌的分布

以漢中麻鴨腸道中芽孢菌、酵母菌、乳酸菌菌體數量為縱坐標，以活性菌體在不同腸道區段的分布部位為橫坐標作圖（圖1）。芽孢菌耐酸堿，生長最適pH值為6.0左右，能分泌高活性的胞外產物，在胃液中仍保持活性，以孢子狀態進入消化道，在小腸內開始萌發，故芽孢菌主要分布和定殖在遠離胃端的小腸中、后段。酵母菌多分布在土壤、水和動植物體表面，僅零星分布在動物腸道內，因其富含蛋白質、核酸、維生素和多種酶，具有促進對飼料的消化吸收功能，在漢中麻鴨中雖有酵母菌菌落檢出，但分布和定殖在小腸后段和盲腸。乳酸菌生長的最適pH值為4.0左右，在動物腸道內能通過生物拮抗，阻止和抑制致病菌侵入腸道，還可提高食物消化率，因此，在與胃部相連的十二指腸即能檢出乳酸菌菌落，乳酸菌主要分布和定殖在十二指腸后段和小腸前段。

3小結與討論

采用梯度稀釋和組織培養方法研究陜西漢中麻鴨腸道中定殖菌的生活狀態和分布，研究結果表明，小腸后段芽孢菌數量達最大值6.3×104 CFU/mL，盲腸酵母菌數量達最大值 7.6×104 CFU/mL，十二指腸后段乳酸菌數量達最大值 8.6×104 CFU/mL。

芽孢菌劑、酵母菌劑及乳酸菌劑作為動物益生菌或腸道競爭抑制劑，除了可以改善、調整腸道菌群外，還可抑制有害細菌在腸道內膜的吸附和定殖，飼喂動物日糧中添加一定比例，可明顯降低料肉比。

芽孢菌、酵母菌及乳酸菌產生多種消化酶，是提高動物生產性能的一個重要體現，它可以幫助動物消化吸收營養物質，具有較強的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同時，還具有降解飼料中復雜碳水化合物的酶，如果膠酶、葡聚糖酶、纖維素酶等，這些酶能夠破壞植物飼料細胞的細胞壁，促使細胞的營養物質釋放出來，并能消除飼料中的抗營養因子，減少抗營養因子對動物消化利用的障礙。

參考文獻：

[1]辭海編輯委員會. 辭海：生物分冊[M]. 上海：上海辭書出版社，1999：524.

[2]姚茹，王智勇，王廣軍，等. 飼料中添加芽孢桿菌對草魚生長和水質的影響[J]. 江蘇農業科學，2013，41（4）：214-216.

[3]Sekirov I. Gut microbiota in health and disease[J]. Physiological Reviews，2010，90（3）：859-904.

[4]Wong S，Rawls J F. Intestinal microbiota composition in fishes is influenced by host ecology and environment[J]. Molecular Ecology，2012，21（13）：3100-3102.

[5]Tam N K，Uyen N Q，Hong H A，et al. The intestinal life cycle of Bacillus subtilis and close relatives[J]. Journal of Bacteriology，2006，188（7）：2692-2700.

[6]陳瓊. 雞源益生菌的分離、篩選、鑒定與特性研究[D]. 廣州：華南理工大學，2004：1-64.

[7]蔡雁，郝勃，喻子牛. 抗動物病原菌芽孢桿菌的篩選、初步鑒定和抗菌活性[J]. 微生物學雜志，2005，25（5）：19-22.

[8]方祥，胡文鋒，張輝華，等. 乳酸菌的分離、鑒定及其生長特性[J]. 中國微生態學雜志，2000，12（5）：262-264.

[9]史懷平. 朱鹮消化道正常菌群的分離鑒定及微生態制劑的研究[D]. 楊凌：西北農林科技大學，2005：1-54.

[10]賴國旗，韋克，張德純，等. 健康動物腸道正常菌群的分離與鑒定[J]. 中國微生態學雜志，1997，9（2）：23-25.endprint

2.1漢中麻鴨不同腸道區段定殖菌活性菌體數量

2.1.1芽孢菌在不同腸道區段活性菌體數量由表1可見，芽孢菌在漢中麻鴨腸道內可以定殖，少數芽孢菌滯留在麻鴨十二指腸處，進入小腸后開始萌發，并進行生長繁殖，在小腸后段達到最大值，菌體數達6.3×104 CFU/mL，而后重新轉入休眠體的芽孢狀態，完成一個生活周期。小腸后段即盲腸附近是芽孢菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.1.2酵母菌在不同腸道區段活性菌體數量由表2可見，酵母菌在漢中麻鴨腸道內雖可定殖，但菌體數量較少，分布范圍較窄，在小腸后段才開始萌發、繁殖；在盲腸處菌體數量達到最大值，為7.6×104 CFU/mL。盲腸附近是酵母菌生長繁殖和滯留的場所。

2.1.3乳酸菌在不同腸道區段活性菌體數量由表3可見，乳酸菌在漢中麻鴨腸道內可以定殖，十二指腸前段即可見乳酸菌菌落；十二指腸后段乳酸菌菌體數達到最大，為 8.6×104 CFU/mL；至小腸中段時乳酸菌落幾乎不能檢出。十二指腸后段及小腸前段附近是乳酸菌主要生長繁殖和滯留的場所。

2.2漢中麻鴨腸道中定殖菌的分布

以漢中麻鴨腸道中芽孢菌、酵母菌、乳酸菌菌體數量為縱坐標，以活性菌體在不同腸道區段的分布部位為橫坐標作圖（圖1）。芽孢菌耐酸堿，生長最適pH值為6.0左右，能分泌高活性的胞外產物，在胃液中仍保持活性，以孢子狀態進入消化道，在小腸內開始萌發，故芽孢菌主要分布和定殖在遠離胃端的小腸中、后段。酵母菌多分布在土壤、水和動植物體表面，僅零星分布在動物腸道內，因其富含蛋白質、核酸、維生素和多種酶，具有促進對飼料的消化吸收功能，在漢中麻鴨中雖有酵母菌菌落檢出，但分布和定殖在小腸后段和盲腸。乳酸菌生長的最適pH值為4.0左右，在動物腸道內能通過生物拮抗，阻止和抑制致病菌侵入腸道，還可提高食物消化率，因此，在與胃部相連的十二指腸即能檢出乳酸菌菌落，乳酸菌主要分布和定殖在十二指腸后段和小腸前段。

3小結與討論

采用梯度稀釋和組織培養方法研究陜西漢中麻鴨腸道中定殖菌的生活狀態和分布，研究結果表明，小腸后段芽孢菌數量達最大值6.3×104 CFU/mL，盲腸酵母菌數量達最大值 7.6×104 CFU/mL，十二指腸后段乳酸菌數量達最大值 8.6×104 CFU/mL。

芽孢菌劑、酵母菌劑及乳酸菌劑作為動物益生菌或腸道競爭抑制劑，除了可以改善、調整腸道菌群外，還可抑制有害細菌在腸道內膜的吸附和定殖，飼喂動物日糧中添加一定比例，可明顯降低料肉比。

芽孢菌、酵母菌及乳酸菌產生多種消化酶，是提高動物生產性能的一個重要體現，它可以幫助動物消化吸收營養物質，具有較強的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，同時，還具有降解飼料中復雜碳水化合物的酶，如果膠酶、葡聚糖酶、纖維素酶等，這些酶能夠破壞植物飼料細胞的細胞壁，促使細胞的營養物質釋放出來，并能消除飼料中的抗營養因子，減少抗營養因子對動物消化利用的障礙。

參考文獻：

[1]辭海編輯委員會. 辭海：生物分冊[M]. 上海：上海辭書出版社，1999：524.

[2]姚茹，王智勇，王廣軍，等. 飼料中添加芽孢桿菌對草魚生長和水質的影響[J]. 江蘇農業科學，2013，41（4）：214-216.

[3]Sekirov I. Gut microbiota in health and disease[J]. Physiological Reviews，2010，90（3）：859-904.

[4]Wong S，Rawls J F. Intestinal microbiota composition in fishes is influenced by host ecology and environment[J]. Molecular Ecology，2012，21（13）：3100-3102.

[5]Tam N K，Uyen N Q，Hong H A，et al. The intestinal life cycle of Bacillus subtilis and close relatives[J]. Journal of Bacteriology，2006，188（7）：2692-2700.

[6]陳瓊. 雞源益生菌的分離、篩選、鑒定與特性研究[D]. 廣州：華南理工大學，2004：1-64.

[7]蔡雁，郝勃，喻子牛. 抗動物病原菌芽孢桿菌的篩選、初步鑒定和抗菌活性[J]. 微生物學雜志，2005，25（5）：19-22.

[8]方祥，胡文鋒，張輝華，等. 乳酸菌的分離、鑒定及其生長特性[J]. 中國微生態學雜志，2000，12（5）：262-264.

[9]史懷平. 朱鹮消化道正常菌群的分離鑒定及微生態制劑的研究[D]. 楊凌：西北農林科技大學，2005：1-54.

[10]賴國旗，韋克，張德純，等. 健康動物腸道正常菌群的分離與鑒定[J]. 中國微生態學雜志，1997，9（2）：23-25.endprint