保健食品葛根素提取物中葛根素的含量測定

楊靜 陳茂邦

保健食品葛根素提取物中葛根素的含量測定

楊靜 陳茂邦

目的保健品葛根素軟膠囊產品的標準高效液相色譜法(HPLC)測葛根素時, 色譜圖基線寬度大、對照品理論塔板數低, 峰形差, 欲對其色譜條件進行改進。方法流動相改為：甲醇-水 (25：75), 檢測改為250 nm; 流速、進樣量不變。結果色譜圖基線寬度變小, 峰形好, 葛根素在4～50 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系, r=0.9999;平均回收率為99.8%, RSD為1.0%(n=5)。結論流動相改變后的方法能更準確測定其含量。

高效液相色譜法；葛根素

葛根素有擴張冠狀動脈和腦血管、抗心率失常、改善微循環、抑制血小板凝集和降血糖等多方面的作用, 是處方中的主要活性成分, 故選擇葛根素含量作為控制本品質量的指標成分。原標準參照有關文獻, 建立HPLC測定本品中葛根素的含量, 但按該標準的試驗方法進行操作, 對照品和樣品的峰形較差, 出現叉峰, 對照品理論塔板較低等方面的問題。為此作者對其流動相進行了改進, 認為效果滿意, 現報告如下。

1 儀器與藥品

1.1實驗儀器 電子分析天平(北京賽多利斯) , Agilent1200高效液相色譜儀(美國安捷倫),C18色譜柱(美國安捷倫)。

1.2實驗試劑與藥品 葛根素對照品(中檢所研究院, 批號：110752-201313),葛根素提取物軟膠囊(榮成百合生物技術有限公司),甲醇(色譜純), 其他試劑均為分析純, 水為超純水。

2 實驗：葛根素軟膠囊中葛根素的含量測定

2.1.含量測定試驗條件的選擇 按文獻［1］的試驗方法進行操作, 在該試驗條件下, 對照品和樣品的峰形較差, 出現叉峰, 對照品理論塔板較低, 為不滿意結果, 為找出更好的試驗條件, 作者參照文獻［2］的方法進行實驗, 得到滿意的結果。文獻［1］的檢測波長為247 nm, 流動相為甲醇-水-36%乙酸(25:72:3), 柱溫25℃;柱子為安捷倫, 流速1.0 ml/min;文獻［2］的檢測波長為250 nm, 流動相為甲醇-水(25:75), 柱溫30℃, 柱子C18柱, 流速1.0 ml/min。

2.2對照品溶液的制備 取葛根素對照品0.0100 g, 分別加70%甲醇(A法)和30%乙醇(B法)溶解至10 ml容量瓶中,超聲萃取, 待溶解后用相應的溶解定容, 均制成每1 毫升含葛根素0.1 mg的標準溶液。

2.3供試液制備 取軟膠囊10粒, 傾出內容物, 混勻。精密稱取0.5 g, A法：加70%甲醇, 超聲提取20 min后定容至10 ml；B法：精密加入30%乙醇50 ml, 稱定重量, 回流30 min, 冷至室溫, 再稱定重量, 補足減失的重量, 搖勻, 再取2 ml, 加30%乙醇稀釋至50 ml, 即得。

2.4兩種方法測定結果 A法：按文獻［1］的色譜條件,對對照品和樣品進行試驗, 結果對照品和供試品的峰形都較差。對照品理論塔板數較低, 方法不適用。B法：按文獻［2］的色譜條件對對照品和樣品進行試驗, 結果, 該方法的出峰時間均在7 min左右, 葛根素能與其他成分很好地分開, 并且峰形較好, 故選擇B方法為該保健品的檢測方法。

2.5標準曲線和線性范圍 分別吸取對照品溶液, 用30%乙醇稀釋并定容的濃度分別為4、10、20、30、40、50 μg/ml的系列標準溶液。按上述色譜條件分別進樣 10 μ, 以峰面積(A)為縱坐標(Y), 進樣量(μl)為橫坐標(X)繪制工作曲線, 得回歸方程為Y=42.0138X+2.1010, r=0.9998, 線性范圍為4～50 μg/ml,葛根素在此范圍內與峰面積呈良好線性關系。見圖1。

2.6方法學考察 精密度試驗:精密吸取葛根素對照品(10 μg/ml)溶液在上述色譜條件下連續進樣5次, 每次進樣10 μl,結果葛根素色譜峰峰面積RSD為0.17%(n=5), 表明:本實驗精密度較好。穩定性試驗:精密吸取葛根素對照品溶液, 于0、2、4、6、8、12 h進樣, 進樣量10 μl, 考察葛根素色譜峰的相對保留時間及相對峰面積在12 h內的穩定性。結果葛根素色譜峰峰面積的RSD為1.42%(n=6), 表明對照品溶液在12 h內基本穩定。加樣回收率試驗精密稱取已知含量同批樣品(批號：20130526) 5份, 每份0.2000 g, 加30%乙醇溶液定量稀釋成50 ml, 每份精密量取2 ml溶液和葛根素對照品溶液(200 μg)2 ml, 置同一50 ml容量配制, 用30%乙醇稀釋至刻度, 測定葛根素含量, 平均回收率為99.80%, RSD為1.0%(n=5)。

圖1 葛根素標準曲線

2.7供試品中葛根素含量測定 按上述色譜條件測定,以標準曲線計算供試品中葛根素含量, 測定結果：含量為5.30%(g/100 g), RSD為0.79%。

3 討論

3.1測定波長的選擇 取葛根素對照品溶液, 按照紫外分光光度法(《中國藥典》2010年版(一部)附錄Ⅴ), 在200～300 nm范圍內繪制紫外吸收光譜, 葛根素在250 nm處有最大吸收,結合藥典方法故選擇250 nm為檢測波長。

3.2提取方法的確定 分別采取A法和B法進行樣品的提取, A法用超聲方式提取,含量低, 峰形差, 采用B法用回流方式, 所得效果為滿意, 故選擇回流提取為供試品制備的條件。葛根提取物軟膠囊中葛根素的含量, 采用改變色譜條件后的HPLC進行測定, 方法學研究表明, 方法精密度、重現性好, 分離度符合規定, 方法穩定；同時經對樣品檢測數據的考察, 確定該含量測定方法具有可應用性, 能夠更有效地控制改保健品的質量。

［1］ 劉泰然, 趙珊, 張楠, 等.反相液相色譜法測定保健食品中葛根素.中國衛生檢驗雜志, 2005(2):147-148.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).北京：化學工業出版社, 2010:313.

2014-06-25］

678400 云南德宏州食品藥品檢驗所