反相高效液相色譜法測定保嬰鎮驚丸中甘草苷含量

鞏長芹，李學紅，周利章

（山東省臨沂市藥品檢驗所，山東 臨沂 276001）

保嬰鎮驚丸收載于部頒標準第八冊，由大黃、甘草、朱砂組方，原質量標準中只有性狀和檢查項目而無含量測定，不能有效地控制該產品的質量。方中甘草是常用藥，甘草苷為甘草的主要活性成分。因此，選擇測定甘草藥材中甘草苷的含量作為本品質量控制定量指標，并建立了準確、簡便、可靠的甘草苷分析方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，包括四元泵、在線脫氣機、柱溫箱、自動進樣器、G1315D 1260DAD VL檢測器（美國Agilent公司）；XS205DU型電子分析天平（梅特勒－托利多公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫療儀器廠）。甘草苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號為111610－201106，含量以93．7%計）；保嬰鎮驚丸（濟南宏濟堂制藥有限責任公司，批號分別為 1012001，1012002，1012003）；乙腈為色譜純，水為純化水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2．1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm），填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：乙腈－0．2%磷酸溶液（14∶86）；流速：1．0 mL ／min；柱溫：40 ℃；檢測波長：276 nm。理論板數按甘草苷峰計算應不低于3 000。在此條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

精密稱取甘草苷對照品5．19 mg，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。參考2010年版《中國藥典（一部）》中快胃片的含量測定方法[1]。取本品，剪碎，取約0．7 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 mL，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，用50%甲醇補足減失的質量，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2．3 方法學考察

陰性干擾試驗：按保嬰鎮驚丸中處方比例精密稱取全方中除甘草外的其他藥材，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照品溶液。照樣品測定方法測定，結果在主成分出峰處無干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：分別精密吸取對照品溶液 1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10．0 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積。以對照品進樣量（X）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程Y＝1 609．09X＋4．850 7，r＝0．999 6（n＝6），結果表明，甘草苷進樣量在 0．097 3～0．973 0 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：取甘草苷對照品溶液5 μL，分別進樣6次，按擬訂色譜條件測定，以峰面積計算。結果的RSD為0．24%（n＝6），表明儀器的精密度良好。

重復性試驗：取同一樣品（1012002）6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件分別進樣測定，計算含量。結果甘草苷含量的RSD為1．26%（n＝6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取同一份供試品溶液（1012002），分別于0，1，2，4，8，12，24 h 時進樣測定。結果甘草苷含量的RSD為 1．37%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內穩定。

加樣回收試驗：取6份已知含量的樣品（1012002，甘草苷的含量為3．12 mg／g），精密稱定，共取6份，每份中精密加入甘草苷對照品溶液，依法制備成供試品溶液，按擬訂色譜條件測定。結果見表1。

表1 甘草苷加樣回收試驗結果（n＝6）

2．4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件測定，記錄峰面積，按外標法計算含量。結果批號分別為1012001，1012002，1012003 的樣品中甘草苷含量分別為 3．13，3．12，3．21 mg ／g。

3 討論

對甘草苷進行進行紫外吸收光譜掃描，結果在276 nm波長處有最大吸收，因此選擇276 nm為檢測波長。

在對流動相進行選擇時，參考2010年版《中國藥典（一部）》中快胃片含量測定的流動相[1]，通過調整比例，結果表明，以乙腈－0．2%磷酸溶液（14∶86）為流動相，所得色譜峰峰形較好，陰性無干擾，測定結果準確。

通過線性范圍、精密度、穩定性、重復性、回收率的試驗考察，證明本方法快速、結果準確可靠，能有效控制本制劑的質量，可作為保嬰鎮驚丸中甘草的質量控制方法。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：769 －770．