紫草素在人表皮共培養體系中對酪氨酸酶活性及黑素生成的影響

解士海 黃榮云

紫草素在人表皮共培養體系中對酪氨酸酶活性及黑素生成的影響

解士海 黃榮云

目的 探討紫草素在人表皮共培養體系中對酪氨酸酶活性及黑素生成的影響。方法在共培養體系中測定紫草素對酪氨酸酶活性和黑素生成的影響。結果0.25 μmol/L、0.5 μmol/L和1 μmol/L紫草素對于人表皮共培養細胞增殖無影響, 0.25 μmol/L、0.5 μmol/L和1 μmol/L紫草素對于表皮共培養細胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有較強的劑量相關性激活作用, 0.5 μmol/L及 1 μmol/L紫草素與對照組相比差異具有統計學意義(P＜0.01)。結論紫草素對于人表皮共培養體系中酪氨酸酶活性和黑素生成有一定促進作用。

紫草素；表皮共培養體系；酪氨酸酶；黑素生成

色素紊亂性皮膚病一般比較難治, 其中白癜風更為不易治療。我國中醫中藥治療白癜風有數千年歷史, 其中成方達幾十種之多。紫草素高頻率的出現在許多治療白癜風的方劑中, 作者前期研究了紫草素在黑素瘤細胞中對黑素合成的影響［1］, 本研究進一步研究其在人表皮共培養體系中對酪氨酸酶活性及黑素生成的影響。

1 材料與方法

1. 1材料 紫草素購自英國FLUOROCHEM(分析純) , 配制成1 mmol/L的貯存液, -80℃冰箱保存, 使用前稀釋至工作濃度。8-MOP(甲氧沙林)溶于二甲基亞砜, 配成10 ml。

8-MOP、中性酶、胰酶、二甲基亞砜(DMSO)、四甲基偶氮唑藍(MTT)均購自Sigma公司, 小牛血清購自杭州四季青公司；高通量多功能微板測試系統(德國BMG), 圖像信號采集與分析系統(德國LEICA公司), 倒置顯微鏡, 無菌工作臺等。

1. 2方法

1. 2. 1人表皮黑素細胞與角質形成細胞共培養體系的建立參考文獻［2］。

1. 2. 2紫草素對人共培養細胞增殖的影響： MTT法檢測。

1. 2. 3酪氨酸酶活性測定實驗［3］參考文獻, 根據MTT實驗結果選取3個濃度(0.25 μmol/L、0.5 μmol/L、1 μmol/L)的紫草素, 測定其對酪氨酸酶活性的影響。

1. 2. 4黑素含量的測定［4］參考文獻, 測定 0.25 μmol/L、0.5 μmol/L及1 μmol/L的紫草素對黑素生成的影響。

1. 3統計學方法 全部數據采用SPSS統計軟件進行兩因素方差分析檢驗, 計量資料以均數±標準差( x-±s)表示, 行t檢驗, P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1紫草素對細胞增殖的影響 MTT實驗結果顯示紫草素濃度在(0.25～1 μmol/L)對人表皮共培養細胞無生長抑制作用。

2. 2紫草素對人表皮共培養體系中酪氨酸酶活性及黑素生成的影響 結果表明(見表1), 紫草素對于人表皮共培養體系中酪氨酸酶活性及黑素生成呈劑量依賴性激活作用, 紫草素組與對照組比較, 0.5 μmol/L及1 μmol/L紫草素對人表皮共培養體系中氨酸酶活性激活及黑素生成均差異具有統計學意義(P＜0.01), 8-MOP 為陽性對照, 1 μmol/L紫草素作用優于8-MOP(P＜0.01)。

表1 紫草素對共培養體系中酪氨酸酶活性和黑素生成的影響(n=3, x-±s, %)

3 討論

中醫中藥的研究對于白癜風未來的治療越來越重要, 作者系統研究了許多中藥對于黑素生成的影響。紫草素不僅在黑素瘤細胞中可以劑量依賴地促進黑素生成, 本研究發現紫草素在模擬人體的共培養體系中同樣具有促進黑素生成和酪氨酸酶活性的作用, 為進一步研究開發紫草素打下基礎。

［1］ 解士海, 黃榮云, 趙衛華, 等.紫草素對人黑素瘤細胞增殖及黑素合成的影響.臨床合理用藥雜志, 2010, 3(9):10-12.

［2］ 解士海, 陳志強, 馬鵬程, 等.人表皮黑素細胞與角質形成細胞共培養體外模型中黑素小體轉運的觀察.臨床皮膚科雜志, 2006, 35(5):286-288.

［3］ Chen X, Oppenheim J, Howard OM, et al. Shikonin, a component of antiinflammatory Chinese herbal medicine, selectively blocks chemokine binding to CC chemokine receptor-1, Int Immunopharmacol, 2001(1): 229-236.

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