孔雀石綠在不同品種魚中殘留量的研究與分析

郭楠

DOI:10.3969/j.issn.1004-6755.2014.05.009

摘 要：漁藥殘留超標是水產品質量安全控制的熱點和難點問題，漁藥殘留的評估是進行水產品質量監管的重要依據。孔雀石綠作為水產品養殖中禁用的藥物，具有高毒素、高殘留和致癌、致突變等副作用，殘留在水產品中的孔雀石綠進入人體，可引起各系統部分功能的損害。為了解遼寧省水產品中魚類的孔雀石綠的殘留狀況，采用國家標準GB/T 20361-2006對遼寧省8個城市四個品種魚類的孔雀石綠的殘留量進行了檢測分析，并對水產品中孔雀石綠殘留控制提出了建議。

關鍵詞：漁藥；孔雀石綠；殘留量；水產品；檢測

漁藥是指專門用于漁業方面為確保水生動、植物機體健康成長的藥物。漁藥殘留是指在水生動、植物養殖過程中，為防病、治病而使用的藥物在生物體內產生積累或代謝不完全而殘留的藥物[1]。孔雀石綠(C23H25CN2)又名堿性綠，極易溶于水，水溶液呈藍綠色，由于具有殺菌作用，曾被作為消毒劑普遍用于水產養殖業[2]。我國農業行業標準《無公害食品漁用藥物使用準則》(NY 5071-2002)中已將孔雀石綠列為禁用藥物。但由于孔雀石綠抗菌效果較好，價格低廉，在水產養殖業中仍有應用，因此對孔雀石綠進行監控就顯得格外重要[3]。為全面掌握遼寧省水產品的質量狀況，對不同種類水產品中孔雀石綠的殘留量進行了將近四年的監測分析，以保障居民身體健康和食品安全，為省政府對漁藥的監管和使用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

2010年-2013年，遼寧省內主要檢測地區包括沈陽、遼陽、鐵嶺、本溪、錦州、朝陽、營口、阜新8個城市，包括鯽魚、草魚、鯉魚、鰱魚4個品種，累計檢測樣品數量707個。

抽檢對象包括無公害水產品養殖基地、標準化養殖示范場和小型普通養殖場。抽樣方式是在不同的養殖池內隨機抽取，每個養殖場抽樣數量不得超過2個。樣品當場封樣、編號、冰鎮，并送到檢測實驗室進行檢測。

1.2 儀器和試劑

1100型高效液相色譜儀，美國安捷倫科技公司；T10型均漿機，德國 IKA；TDL-40B型低速離心機，上海飛鴿；LAB-DNACER型旋渦混合器，德國 IKA；N-100IS-WD型旋轉蒸發儀，上海艾朗；CP323S型電子天平，德賽多利斯；KQ-5200DE型超聲波清洗器，昆山；固相萃取裝置：酸性氧化鋁固相萃取柱(500 mg，3 mL)和Varian PRS柱(500 mg，3 mL)，使用前均用5 mL 乙腈活化。

標準品孔雀石綠( MG，純度大于98%，Sigma-Aldrich公司)；乙腈、二氯甲烷為液相色譜純；二甘醇、硼氫化鉀、鹽酸羥胺、對-甲苯磺酸、無水乙酸銨、冰乙酸、氨水、酸性氧化鋁(粒度0071~0.150 mm)均為分析純；實驗用水均符合GB/T 6682一級水的標準，所有試劑均購于國藥集團化學試劑沈陽公司。

1.3 溶液配制

標準貯備液(100 μg/ mL)：準確稱取孔雀石綠標準品10.00 mg，用乙腈溶解于100 mL容量瓶中，放置于4 ℃冰箱中保存(臨用現配)；中間標準使用液(100 ng/ mL)：準確量取標準貯備液01 mL，用乙腈溶解于100 mL容量瓶中，放置于4 ℃冰箱中保存(臨用現配)；標準工作使用液：分別準確量取標準中間使用液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL，置于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至10 mL(臨用現配)。

硼氫化鉀溶液：準確稱取1.08 g硼氫化鉀，加100 mL水溶解，現用現配； 20%鹽酸羥胺溶液：溶解25.0 g鹽酸羥胺于100 mL水中；對-甲苯磺酸溶液：準確稱取1.90 g對-甲苯磺酸，用水稀釋至200 mL；乙酸銨緩沖溶液：準確稱取9645 g無水乙酸銨溶解于1 000 mL水中，冰乙酸調pH到4.5。洗脫液：乙酸乙酯：甲醇：氨水=10:9:1。

1.4 樣品制備、提取和凈化

完整魚去鱗、去皮，取肌肉部分，切成小塊用絞肉機勻質混合。準確稱取肉糜狀樣品5.000 g于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，用勻質機1 200 r/min勻漿提取30 s，加入5 g酸性氧化鋁，勻漿30 s，刀頭分別用三個裝10 mL乙腈的離心管清洗刀頭，裝肉樣的離心管用離心機4 000 r/min離心10 min，上清液轉移至250 mL分液漏斗中，加入2 mL二甘醇，3 mL硼氫化鉀溶液，在分液漏斗萃取儀上萃取振蕩4 min。

洗刀頭的第一個離心管中的10 mL乙腈加入離心后含肉樣的離心管中，蓋好離心管蓋子，把離心管放在渦旋混勻器上振蕩1 min，靜置20 min，在離心機里以4 000 r/min離心10 min，上清液合并加入250 mL分液漏斗中。

在含肉樣的50 mL離心管中依次加入1.5 mL鹽酸羥胺溶液、2.5 mL對-甲苯磺酸溶液、5.0 mL乙酸銨緩沖溶液，每加入一種溶液要與肉樣充分混勻。振蕩搖勻2 min，再加入第二管洗刀頭的10 mL乙腈，繼續振蕩搖勻2 min，4 000 r/min離心10 min，離心后的上清液合并加入250 mL分液漏斗中，重復操作上述步驟一次。

在分液漏斗中加入25 mL二氯甲烷，蓋緊分液漏斗塞輕輕振搖幾下，放氣，在分液漏斗萃取儀上劇烈振搖4 min，隔夜靜置分層，將下層有機相轉移至100 mL茄形瓶中，繼續在分液漏斗中加入5 mL乙腈、10 mL二氯甲烷，分液漏斗萃取儀上劇烈振搖2 min，把全部溶液轉移至50 mL離心管，2 500 r/min離心10 min，下層溶液合并至100 mL茄形瓶，45 ℃旋轉蒸發至近干，用乙腈溶解殘渣3次，每次2 mL。

將安捷倫的酸性氧化鋁固相萃取柱安裝在PRS小柱上，PRS小柱下端安裝在固相萃取裝置上，用5 mL乙腈活化小柱。用乙腈2 mL洗茄形瓶溶解殘渣，提取液轉移到小柱上，每次2 mL，清洗三次，依次過柱。最后一次吹酸性氧化鋁柱近干，棄去。加入2 mL乙腈洗PRS柱子，洗三次，吹PRS小柱近干，在自然狀態下加入3 mL乙酸乙酯、甲醇和氨水（10:9:1）的混合溶液，收集洗脫液，用乙腈定容至3 mL，上機用液相色譜測定。

1.5 色譜條件及參數

色譜條件及參數設置同《GB/T20361-2006水產品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定高效液相色譜熒光檢測法》[4-6]，采用安捷倫高效液相色譜儀1100的熒光檢測器對上述抽檢魚類樣品進行檢測。

1.6 統計分析

采用Excel 2003軟件進行數據統計分析，作圖和誤差分析。

2 檢測結果分析

圖1所示為2010-2013年在遼寧省8個城市抽取的鯉魚、鯽魚、草魚和鰱魚的抽樣總數量的比例示意圖。其中抽取鯉魚樣品總共210個，鯽魚138個，草魚221個，鰱魚138個。

圖1 2010年-2013年抽檢魚類所占比例

如圖2所示為2010-2013年在每個城市抽取的鯉魚、鯽魚、草魚和鰱魚的各自所占的數量比。其中本溪鰱魚抽樣數量為0，是由于地區養殖品種所限制的原因。

圖2 2010年-2013年不同城市抽檢不同種類魚的比例

如圖3所示2010-2013年抽取的鯉魚、鯽魚、草魚和鰱魚所占的比例。

圖3 2010年-2013年不同品種魚的抽樣數量

經過四年對遼寧省8個地區鯉魚、鯽魚、草魚和鰱魚的孔雀石綠殘留量的檢測分析，檢測結果均未超過方法檢出限0.5 μg/kg，檢測結果均未檢出，全部合格。

3 結語

農業部及遼寧省政府高度重視水產品質量安全，連續多年開展水產品質量安全專項整治和抽查工作，不斷強化監管工作，雖然我省水產品質量逐年有新的提高，但仍存在一定的安全隱患，違禁藥物違法使用問題屢禁不止，應引起各級漁業行政主管部門的高度重視。遼寧省水產品質量安全檢驗檢測局連續四年通過農業部能力驗證考試，應用高效液相色譜儀檢測孔雀石綠的檢測技術水平成熟穩定，質控樣品回收率均可達到85%～100%之間。檢測技術水平穩定，檢測結果可靠。

遼寧省內的養殖用戶和水產品經銷商逐漸認識到孔雀石綠的危害性，并且能夠嚴格按照國家相關的規定進行規范化養殖，及時填寫養殖日志，能夠做出科學性選擇和規范性用藥。

孔雀石綠被廣泛用于水產品運輸過程中，主要作用是防止水產品在運輸過程中感染疾病，以免造成嚴重的經濟損失。然而，水產品中孔雀石綠的殘留通常是由于養殖用水中使用孔雀石綠，從而導致其進入機體內。水產品體表是孔雀石綠的主要殘留部位，因此被檢測樣品的取材部位是魚背部的肌肉組織。

水產養殖環境不斷惡化的趨勢不是養殖業者能夠掌控的，所以面對水產養殖動物疾病的發生，養殖業者采用藥物治療的措施而減少經濟損失也是無可厚非的，但是選擇使用科學、合理、安全的藥物是優質水產品的重要保障。

我國對漁藥藥學基礎理論的研究還很薄弱，大部分漁藥都是直接從獸藥、農藥和化工產品轉接過來的，幾乎沒有專業水產養殖疾病防治的藥物，正是由于這些限制因素使養殖業者難以做到規范用藥。因此，加強這方面的研究是漁藥安全使用的基礎，應該請有關部門的專家學者了解相關環境因素和致病菌等，盡快研制出水產養殖行業的專用藥。

參考文獻：

[1] 李兆新, 冷凱良, 李健, 等. 我國漁藥質量狀況及水產品中漁藥殘留監控[J]. 海洋水產研究, 2001, 22(2): 76-77

[2] 張曉輝, 孔蕾, 滕鴻云, 等. 養殖水體中孔雀石綠的快速檢測技術[J]. 水利漁業, 2006, 26(6): 101-102

[3] 張莉, 文紅, 王紅. 高效液相色譜法測定魚類產品中孔雀石綠及無色孔雀石綠的殘留[J]. 中國衛生檢驗雜志, 2005, 15(12): 1483-1485

[4] GB/T 19857-2005. 水產品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定[S].北京：中國標準出版社，2005

[5] GB/T 20361-2006. 水產品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定高效液相色譜熒光檢測法[S].北京：中國標準出版社，2006

[6] 郭德華, 葉長淋, 李波, 等. 高效液相色譜-質譜法測定水產品中孔雀石綠及其代謝物[J]. 分析測試學報, 2004, 23(S1): 206-208

（收稿日期：2014-03-31；修回日期：2014-04-08）

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《河北漁業》編輯部

圖2 2010年-2013年不同城市抽檢不同種類魚的比例

如圖3所示2010-2013年抽取的鯉魚、鯽魚、草魚和鰱魚所占的比例。

圖3 2010年-2013年不同品種魚的抽樣數量

經過四年對遼寧省8個地區鯉魚、鯽魚、草魚和鰱魚的孔雀石綠殘留量的檢測分析，檢測結果均未超過方法檢出限0.5 μg/kg，檢測結果均未檢出，全部合格。

3 結語

農業部及遼寧省政府高度重視水產品質量安全，連續多年開展水產品質量安全專項整治和抽查工作，不斷強化監管工作，雖然我省水產品質量逐年有新的提高，但仍存在一定的安全隱患，違禁藥物違法使用問題屢禁不止，應引起各級漁業行政主管部門的高度重視。遼寧省水產品質量安全檢驗檢測局連續四年通過農業部能力驗證考試，應用高效液相色譜儀檢測孔雀石綠的檢測技術水平成熟穩定，質控樣品回收率均可達到85%～100%之間。檢測技術水平穩定，檢測結果可靠。

遼寧省內的養殖用戶和水產品經銷商逐漸認識到孔雀石綠的危害性，并且能夠嚴格按照國家相關的規定進行規范化養殖，及時填寫養殖日志，能夠做出科學性選擇和規范性用藥。

孔雀石綠被廣泛用于水產品運輸過程中，主要作用是防止水產品在運輸過程中感染疾病，以免造成嚴重的經濟損失。然而，水產品中孔雀石綠的殘留通常是由于養殖用水中使用孔雀石綠，從而導致其進入機體內。水產品體表是孔雀石綠的主要殘留部位，因此被檢測樣品的取材部位是魚背部的肌肉組織。

水產養殖環境不斷惡化的趨勢不是養殖業者能夠掌控的，所以面對水產養殖動物疾病的發生，養殖業者采用藥物治療的措施而減少經濟損失也是無可厚非的，但是選擇使用科學、合理、安全的藥物是優質水產品的重要保障。

我國對漁藥藥學基礎理論的研究還很薄弱，大部分漁藥都是直接從獸藥、農藥和化工產品轉接過來的，幾乎沒有專業水產養殖疾病防治的藥物，正是由于這些限制因素使養殖業者難以做到規范用藥。因此，加強這方面的研究是漁藥安全使用的基礎，應該請有關部門的專家學者了解相關環境因素和致病菌等，盡快研制出水產養殖行業的專用藥。

參考文獻：

[1] 李兆新, 冷凱良, 李健, 等. 我國漁藥質量狀況及水產品中漁藥殘留監控[J]. 海洋水產研究, 2001, 22(2): 76-77

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[5] GB/T 20361-2006. 水產品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定高效液相色譜熒光檢測法[S].北京：中國標準出版社，2006

[6] 郭德華, 葉長淋, 李波, 等. 高效液相色譜-質譜法測定水產品中孔雀石綠及其代謝物[J]. 分析測試學報, 2004, 23(S1): 206-208

（收稿日期：2014-03-31；修回日期：2014-04-08）

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圖2 2010年-2013年不同城市抽檢不同種類魚的比例

如圖3所示2010-2013年抽取的鯉魚、鯽魚、草魚和鰱魚所占的比例。

圖3 2010年-2013年不同品種魚的抽樣數量

經過四年對遼寧省8個地區鯉魚、鯽魚、草魚和鰱魚的孔雀石綠殘留量的檢測分析，檢測結果均未超過方法檢出限0.5 μg/kg，檢測結果均未檢出，全部合格。

3 結語

農業部及遼寧省政府高度重視水產品質量安全，連續多年開展水產品質量安全專項整治和抽查工作，不斷強化監管工作，雖然我省水產品質量逐年有新的提高，但仍存在一定的安全隱患，違禁藥物違法使用問題屢禁不止，應引起各級漁業行政主管部門的高度重視。遼寧省水產品質量安全檢驗檢測局連續四年通過農業部能力驗證考試，應用高效液相色譜儀檢測孔雀石綠的檢測技術水平成熟穩定，質控樣品回收率均可達到85%～100%之間。檢測技術水平穩定，檢測結果可靠。

遼寧省內的養殖用戶和水產品經銷商逐漸認識到孔雀石綠的危害性，并且能夠嚴格按照國家相關的規定進行規范化養殖，及時填寫養殖日志，能夠做出科學性選擇和規范性用藥。

孔雀石綠被廣泛用于水產品運輸過程中，主要作用是防止水產品在運輸過程中感染疾病，以免造成嚴重的經濟損失。然而，水產品中孔雀石綠的殘留通常是由于養殖用水中使用孔雀石綠，從而導致其進入機體內。水產品體表是孔雀石綠的主要殘留部位，因此被檢測樣品的取材部位是魚背部的肌肉組織。

水產養殖環境不斷惡化的趨勢不是養殖業者能夠掌控的，所以面對水產養殖動物疾病的發生，養殖業者采用藥物治療的措施而減少經濟損失也是無可厚非的，但是選擇使用科學、合理、安全的藥物是優質水產品的重要保障。

我國對漁藥藥學基礎理論的研究還很薄弱，大部分漁藥都是直接從獸藥、農藥和化工產品轉接過來的，幾乎沒有專業水產養殖疾病防治的藥物，正是由于這些限制因素使養殖業者難以做到規范用藥。因此，加強這方面的研究是漁藥安全使用的基礎，應該請有關部門的專家學者了解相關環境因素和致病菌等，盡快研制出水產養殖行業的專用藥。

參考文獻：

[1] 李兆新, 冷凱良, 李健, 等. 我國漁藥質量狀況及水產品中漁藥殘留監控[J]. 海洋水產研究, 2001, 22(2): 76-77

[2] 張曉輝, 孔蕾, 滕鴻云, 等. 養殖水體中孔雀石綠的快速檢測技術[J]. 水利漁業, 2006, 26(6): 101-102

[3] 張莉, 文紅, 王紅. 高效液相色譜法測定魚類產品中孔雀石綠及無色孔雀石綠的殘留[J]. 中國衛生檢驗雜志, 2005, 15(12): 1483-1485

[4] GB/T 19857-2005. 水產品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定[S].北京：中國標準出版社，2005

[5] GB/T 20361-2006. 水產品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定高效液相色譜熒光檢測法[S].北京：中國標準出版社，2006

[6] 郭德華, 葉長淋, 李波, 等. 高效液相色譜-質譜法測定水產品中孔雀石綠及其代謝物[J]. 分析測試學報, 2004, 23(S1): 206-208

（收稿日期：2014-03-31；修回日期：2014-04-08）

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《河北漁業》編輯部