黃芩苷減輕奧沙利鉑導(dǎo)致熱痛覺過敏的脊髓機(jī)制

宋超+趙靜+嵇紹干

【摘要】 目的 研究黃芩苷對(duì)奧沙利鉑導(dǎo)致熱痛覺過敏的脊髓機(jī)制。方法 建立奧沙利鉑導(dǎo)致疼痛的大鼠動(dòng)物模型， 將大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組， 黃芩苷治療組， nNOS抑制劑（7-NI）對(duì)照組和空白對(duì)照組。比較各組大鼠在接受奧沙利鉑沖擊和/或黃芩苷治療之后熱刺激縮足閾值的大小。結(jié)果 奧沙利鉑可以導(dǎo)致大鼠熱學(xué)反射縮足閾值顯著縮短， 而黃芩苷治療組可模擬7-NI的作用， 顯著提高熱刺激縮足閾值（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論 黃芩苷對(duì)于奧沙利鉑導(dǎo)致的熱痛覺過敏具有顯著的抑制作用， 其作用機(jī)制可能與抑制脊髓部位的nNOS合成有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 黃芩苷；奧沙利鉑；化療后外周神經(jīng)病變；nNOS抑制劑

Spinal mechanism of baicalin on oxaliplatin induced thermal hyperalgesia SONG Chao， ZHAO Jing， JI Shao-gan. Department of Oncology. Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College， Xuzhou 221000， China

【Abstract】 Objective To investigate the spinal mechanism of baicalin on oxaliplatin induced thermal hyperalgesia. Methods Oxaliplatin induced neuropathic pain was established in rats， and the rats were randomly divided into model group， baicalin group， 7-NI group and naive group. The behavioral test of thermal hyperalgesia was used to confirm the role of baicalin and 7-NI. Results Compared with model group， baicalin treatment could mimic the role of 7-NI and significantly increase thermal paw withdrawal latency induced by oxaliplatin. Conclusion Baicalin reduces oxaliplatin induced neuropathic pain and the mechanism may be related to inhibition of nNOS expression in spinal cord.

【Key words】 Baicalin； Oxaliplatin； Chemotherapy-induced peripheral neuropathy； nNOS inhibitor目前， 奧沙利鉑仍是推薦應(yīng)用的一線胃腸道腫瘤化療藥物， 但是， 奧沙利鉑可導(dǎo)致嚴(yán)重的外周神經(jīng)病變和痛覺過敏現(xiàn)象， 在很大程度上限制了鉑類化療藥的應(yīng)用[1]。遺憾的是， 目前鎮(zhèn)痛藥物并不能有效緩解化療藥物導(dǎo)致的疼痛性神經(jīng)病變[2]。本文旨在尋找能安全有效緩解化療后疼痛的藥物。在前期篩選中， 作者發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)中藥黃芩的活性提取物黃芩苷可能有效。黃芩苷具有抗炎、抗氧化、鎮(zhèn)靜以及抗腦損傷等多種有益的作用[3， 4]， 并且還能顯著緩解神經(jīng)損傷導(dǎo)致的難治性神經(jīng)病理性疼痛[5]。黃芩苷能否緩解奧沙利鉑導(dǎo)致的痛覺過敏？將在下文中詳細(xì)探討。

1 材料與方法

1. 1 材料 成年健康雄性SD大鼠（徐州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心）， 體重180～220 g， 清潔級(jí)， 12 h明暗交替飼養(yǎng)， 自由進(jìn)食進(jìn)水。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前， 至少適應(yīng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)條件1周。

1. 2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器來源 奧沙利鉑購自南京制藥廠有限公司（批號(hào)20100703）；黃芩苷， 純度95%， 購自南京澤朗植提技術(shù)有限公司；7-NI購自美國sigma公司；熱敏測痛儀購自美國harvard公司。

1. 3 奧沙利鉑誘導(dǎo)的疼痛模型建立 參考國外學(xué)者的實(shí)驗(yàn)方法[6]， 奧沙利鉑溶解于5%的葡萄糖水中， 現(xiàn)用現(xiàn)配。給大鼠奧沙利鉑4 mg·kg-1腹腔注射， 每周連續(xù)注射2 d， 間隔5 d， 共3個(gè)周期。建立化療藥物誘導(dǎo)的疼痛模型。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為四組， 模型對(duì)照組（奧沙利鉑， 腹腔注射4.0 mg·kg-1）， 黃芩苷治療組（在注射奧沙利鉑前， 鞘內(nèi)注射黃芩苷40 μg ·10 μl-1）， 7-NI治療組（在注射奧沙利鉑前， 鞘內(nèi)注射7-NI 40 μg·10 μl-1）和空白對(duì)照組（僅接受與注射奧沙利鉑同等體積的5%葡萄糖水）。

1. 4 熱痛覺過敏測定 按照文獻(xiàn)方法測定各組大鼠熱刺激縮足反射閾值（thermal withdrawal threshold， TWT）[7]。各組大鼠在接受奧沙利鉑和/或黃芪苷等處理后的第7、14、21天時(shí)， 用熱敏儀刺激大鼠后足， 記錄后足抬起時(shí)的讀數(shù)值， 每只大鼠接受刺激5次， 每次間隔>10 min， 記錄后4次測定的平均值。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 利用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析， 計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)， 組間差異比較采用單因素方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 黃芩苷可以模擬nNOS抑制劑7-NI的作用 顯著減輕奧沙利鉑誘導(dǎo)的熱痛覺過敏行為學(xué)顯示， 與注射奧沙利鉑之前相比， 奧沙利鉑注射后第7、14、21天， 大鼠對(duì)于熱刺激縮足的反應(yīng)閾值顯著縮短（P<0.01）， 說明長期應(yīng)用奧沙利鉑， 可以誘發(fā)大鼠熱痛覺過敏的現(xiàn)象。黃芩苷治療組與相應(yīng)天數(shù)的模型對(duì)照組比較， 熱痛覺過敏的現(xiàn)象顯著減輕（P<0.01或P<0.05）， 并且與7-NI的治療作用相類似， 見表1。endprint

3 討論

鉑類化療藥物導(dǎo)致痛覺過敏的現(xiàn)象是其臨床常見的副作用之一， 患者通常痛苦不堪。本文發(fā)現(xiàn)， 黃芩苷能夠抑制奧沙利鉑導(dǎo)致的熱痛覺過敏， 提示黃芪苷可能對(duì)于奧沙利鉑導(dǎo)致的CIPN具有很好的治療作用。作者仍想知道的是黃芩苷抑制奧沙利鉑導(dǎo)致的熱學(xué)痛覺過敏的機(jī)制。

研究發(fā)現(xiàn)， 化療藥物導(dǎo)致脊髓水平一氧化氮水平升高， nNOS和cGMP蛋白水平升高， 可能是導(dǎo)致痛覺過敏產(chǎn)生的重要因素[8]， 并且在疼痛信號(hào)的初級(jí)整合中心——脊髓部位給予nNOS的抑制劑7-NI， 可以減輕長春新堿誘導(dǎo)的外周神經(jīng)疼痛的癥狀[9]。這說明， 脊髓NO可能促進(jìn)了化療藥物神經(jīng)病理性疼痛的產(chǎn)生。本文發(fā)現(xiàn)， 黃芩苷可模擬7-NI的作用， 抑制奧沙利鉑導(dǎo)致的熱痛覺過敏。這說明， 黃芩苷可能通過抑制脊髓NO的合成從而減輕了CIPN的程度。鑒于黃芩苷的安全性和有效性， 這一研究成果可能對(duì)于臨床緩解鉑類化療使用患者的痛苦具有一定的臨床實(shí)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] Quasthoff S， Hartung H P. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy. J Neurol， 2002，249（1）：9-17.

[2] Windebank A J， Grisold W. Chemotherapy-induced neuropathy. J Peripher Nerv Syst， 2008，13（1）：27-46.

[3] Chen CJ， Raung SL， Liao SL， et al. Inhibition of inducible nitric oxide synthase expression by baicalein in endotoxin/cytokine-stimulated microglia. Biochem Pharmacol， 2004，67（5）：957-965.

[4] 陳群，曾因明，王建國.黃芩苷的腦保護(hù)作用和對(duì)微管運(yùn)動(dòng)蛋白免疫活性的影響.中國藥理學(xué)通報(bào)， 2001，17（01）：117-118.

[5] 冀潔，宋華園，戴文玲，等.黃芩苷對(duì)神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠機(jī)械性痛覺超敏的影響.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用， 2013，7（19）：238-240.

[6] Ling B， Authier N， Balayssac D， et al. Behavioral and pharmacological description of oxaliplatin-induced painful neuropathy in rat. Pain， 2007，128（3）：225-234.

[7] Liu S， Liu WT， Liu YP， et al. Blocking EphB1 receptor forward signaling in spinal cord relieves bone cancer pain and rescues analgesic effect of morphine treatment in rodents.Cancer Res， 2011， 71（13）： 4392-4402.

[8] Jaggi AS， Singh N. Mechanisms in cancer-chemotherapeutic drugs-induced peripheral neuropathy. Toxicology， 2012，291（1-3）：1-9.

[9] Zhang H， Yoon SY， Zhang H， et al. Evidence that spinal astrocytes but not microglia contribute to the pathogenesis of Paclitaxel-induced painful neuropathy. J Pain， 2012，13（3）：293-303.

[收稿日期：2014-03-25]endprint

3 討論

鉑類化療藥物導(dǎo)致痛覺過敏的現(xiàn)象是其臨床常見的副作用之一， 患者通常痛苦不堪。本文發(fā)現(xiàn)， 黃芩苷能夠抑制奧沙利鉑導(dǎo)致的熱痛覺過敏， 提示黃芪苷可能對(duì)于奧沙利鉑導(dǎo)致的CIPN具有很好的治療作用。作者仍想知道的是黃芩苷抑制奧沙利鉑導(dǎo)致的熱學(xué)痛覺過敏的機(jī)制。

研究發(fā)現(xiàn)， 化療藥物導(dǎo)致脊髓水平一氧化氮水平升高， nNOS和cGMP蛋白水平升高， 可能是導(dǎo)致痛覺過敏產(chǎn)生的重要因素[8]， 并且在疼痛信號(hào)的初級(jí)整合中心——脊髓部位給予nNOS的抑制劑7-NI， 可以減輕長春新堿誘導(dǎo)的外周神經(jīng)疼痛的癥狀[9]。這說明， 脊髓NO可能促進(jìn)了化療藥物神經(jīng)病理性疼痛的產(chǎn)生。本文發(fā)現(xiàn)， 黃芩苷可模擬7-NI的作用， 抑制奧沙利鉑導(dǎo)致的熱痛覺過敏。這說明， 黃芩苷可能通過抑制脊髓NO的合成從而減輕了CIPN的程度。鑒于黃芩苷的安全性和有效性， 這一研究成果可能對(duì)于臨床緩解鉑類化療使用患者的痛苦具有一定的臨床實(shí)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] Quasthoff S， Hartung H P. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy. J Neurol， 2002，249（1）：9-17.

[2] Windebank A J， Grisold W. Chemotherapy-induced neuropathy. J Peripher Nerv Syst， 2008，13（1）：27-46.

[3] Chen CJ， Raung SL， Liao SL， et al. Inhibition of inducible nitric oxide synthase expression by baicalein in endotoxin/cytokine-stimulated microglia. Biochem Pharmacol， 2004，67（5）：957-965.

[4] 陳群，曾因明，王建國.黃芩苷的腦保護(hù)作用和對(duì)微管運(yùn)動(dòng)蛋白免疫活性的影響.中國藥理學(xué)通報(bào)， 2001，17（01）：117-118.

[5] 冀潔，宋華園，戴文玲，等.黃芩苷對(duì)神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠機(jī)械性痛覺超敏的影響.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用， 2013，7（19）：238-240.

[6] Ling B， Authier N， Balayssac D， et al. Behavioral and pharmacological description of oxaliplatin-induced painful neuropathy in rat. Pain， 2007，128（3）：225-234.

[7] Liu S， Liu WT， Liu YP， et al. Blocking EphB1 receptor forward signaling in spinal cord relieves bone cancer pain and rescues analgesic effect of morphine treatment in rodents.Cancer Res， 2011， 71（13）： 4392-4402.

[8] Jaggi AS， Singh N. Mechanisms in cancer-chemotherapeutic drugs-induced peripheral neuropathy. Toxicology， 2012，291（1-3）：1-9.

[9] Zhang H， Yoon SY， Zhang H， et al. Evidence that spinal astrocytes but not microglia contribute to the pathogenesis of Paclitaxel-induced painful neuropathy. J Pain， 2012，13（3）：293-303.

[收稿日期：2014-03-25]endprint

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鉑類化療藥物導(dǎo)致痛覺過敏的現(xiàn)象是其臨床常見的副作用之一， 患者通常痛苦不堪。本文發(fā)現(xiàn)， 黃芩苷能夠抑制奧沙利鉑導(dǎo)致的熱痛覺過敏， 提示黃芪苷可能對(duì)于奧沙利鉑導(dǎo)致的CIPN具有很好的治療作用。作者仍想知道的是黃芩苷抑制奧沙利鉑導(dǎo)致的熱學(xué)痛覺過敏的機(jī)制。

研究發(fā)現(xiàn)， 化療藥物導(dǎo)致脊髓水平一氧化氮水平升高， nNOS和cGMP蛋白水平升高， 可能是導(dǎo)致痛覺過敏產(chǎn)生的重要因素[8]， 并且在疼痛信號(hào)的初級(jí)整合中心——脊髓部位給予nNOS的抑制劑7-NI， 可以減輕長春新堿誘導(dǎo)的外周神經(jīng)疼痛的癥狀[9]。這說明， 脊髓NO可能促進(jìn)了化療藥物神經(jīng)病理性疼痛的產(chǎn)生。本文發(fā)現(xiàn)， 黃芩苷可模擬7-NI的作用， 抑制奧沙利鉑導(dǎo)致的熱痛覺過敏。這說明， 黃芩苷可能通過抑制脊髓NO的合成從而減輕了CIPN的程度。鑒于黃芩苷的安全性和有效性， 這一研究成果可能對(duì)于臨床緩解鉑類化療使用患者的痛苦具有一定的臨床實(shí)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] Quasthoff S， Hartung H P. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy. J Neurol， 2002，249（1）：9-17.

[2] Windebank A J， Grisold W. Chemotherapy-induced neuropathy. J Peripher Nerv Syst， 2008，13（1）：27-46.

[3] Chen CJ， Raung SL， Liao SL， et al. Inhibition of inducible nitric oxide synthase expression by baicalein in endotoxin/cytokine-stimulated microglia. Biochem Pharmacol， 2004，67（5）：957-965.

[4] 陳群，曾因明，王建國.黃芩苷的腦保護(hù)作用和對(duì)微管運(yùn)動(dòng)蛋白免疫活性的影響.中國藥理學(xué)通報(bào)， 2001，17（01）：117-118.

[5] 冀潔，宋華園，戴文玲，等.黃芩苷對(duì)神經(jīng)病理性疼痛模型大鼠機(jī)械性痛覺超敏的影響.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用， 2013，7（19）：238-240.

[6] Ling B， Authier N， Balayssac D， et al. Behavioral and pharmacological description of oxaliplatin-induced painful neuropathy in rat. Pain， 2007，128（3）：225-234.

[7] Liu S， Liu WT， Liu YP， et al. Blocking EphB1 receptor forward signaling in spinal cord relieves bone cancer pain and rescues analgesic effect of morphine treatment in rodents.Cancer Res， 2011， 71（13）： 4392-4402.

[8] Jaggi AS， Singh N. Mechanisms in cancer-chemotherapeutic drugs-induced peripheral neuropathy. Toxicology， 2012，291（1-3）：1-9.

[9] Zhang H， Yoon SY， Zhang H， et al. Evidence that spinal astrocytes but not microglia contribute to the pathogenesis of Paclitaxel-induced painful neuropathy. J Pain， 2012，13（3）：293-303.

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