參麥注射液對荷H22小鼠免疫功能的影響

薛 瑞，章 激，張玉潔，李 燦

（湖北文理學院附屬襄陽市中心醫院，湖北 襄陽 441021）

參麥注射液對荷H22小鼠免疫功能的影響

薛 瑞，章 激，張玉潔，李 燦

（湖北文理學院附屬襄陽市中心醫院，湖北 襄陽 441021）

目的 研究參麥注射液對荷瘤小鼠免疫功能的影響。方法 建立 H22細胞小鼠移植瘤模型，將荷瘤小鼠隨機分為模型組（荷瘤空白組），參麥注射液三個劑量組，另設空白參考組，每日灌胃給藥，通過測定對白細胞總數及分類，sIL-2R、IL-2、IL-4含量，脾淋巴細胞增殖及遲發超敏反應能力的影響，探討參麥注射液的免疫調節作用。結果 參麥注射液可提高荷瘤小鼠白細胞總數；降低荷瘤小鼠血清 sIL-2R的含量，提高 IL-2，IL-4水平，改善小鼠脾淋巴細胞增殖和遲發型超敏反應能力。結論

參麥注射液具有增強機體免疫功能的作用。

參麥注射液；H22；白細胞；sIL-2R；IL-2；IL-4；脾淋巴細胞增殖；遲發超敏反應

惡性腫瘤是嚴重危害人類健康的疾病之一，其發病率逐年上升。目前治療腫瘤的常用有效手段為放療及化療，但由于其細胞毒作用，常引起機體免疫能力下降［1-2］。因此尋找安全有效的抗腫瘤藥物具有重要意義。參麥注射液具有益氣固精，養陰生津等功效。方中人參益氣、固脫生津、養心；麥冬定肺氣、安五臟，兩藥配伍益氣固脫，養陰生津［3］。臨床上參麥注射液與化療藥物聯用可扶正培本，改善氣陰兩虛和脾胃失和證候等。本實驗擬觀察參麥注射液對荷H22小鼠外周白細胞總數、sIL-2R、IL-2，IL-4含量，脾淋巴細胞增殖及遲發超敏反應能力的影響來探討其對小鼠免疫功能的影響。

1 材料

1.1 動物與儀器 ICR小鼠 60只，SPF級，體重18～20 g，雌雄兼用，由襄陽醫學院動物實驗中心提供。合格證號：襄醫動字第2001001號。雅培血細胞分析儀，美國雅培 -1700；電子天平AY-120，日本島津；Model 550型酶聯免疫檢測儀，美國 BIO-RAD公司。

1.2 瘤株 H22細胞株，華中科技大學同濟醫學院提供。

1.3 藥物與試劑 參麥注射液（正大青春寶藥業有限公司，批號：1206235）；RPMI 1640培養基（Gbico公司）；美洲商陸（PMW）、刀豆蛋白A和MTT（Sigma公司）；可溶性白介素-2受體（sIL-2R）定量 EIA試劑盒（上海森雄科技實業有限公司）；IL-2和IL-4酶聯免疫檢測試劑盒（GDB公司）；超純水為自制；其余試劑均為國產分析純。

2 方法

2.1 荷 H22移植瘤小鼠模型的建立 傳代：取武漢同濟大學相關科研組已建的H22腹水瘤模型小鼠（已傳代至第8天）數只，頸椎脫臼處死，抽取腹水，滅菌 NS調瘤細胞數至 1×107·mL-1，計數活細胞數為98%以上可用，取0.2 mL瘤細胞懸液接種于小鼠腹腔。按照此法體內傳代 3次。接種：將接種6～8 d后腹水生長良好的小鼠頸椎脫臼處死，抽取腹水，用 NS稀釋。取 ICR小鼠 45只，雌雄兼用，（20±2）g。除空白參考組外，每鼠接種0.2 mL瘤細胞懸液于右腋窩皮下。

2.2 分組及給藥 分組：接種24 h后，取初步觀測認定建模成功的小鼠 40只（后續試驗中將給以檢驗認定），隨機分為以下4組，每組10只：

A1：模型組（荷瘤模型對照組）；A2：參麥20組（給參麥注射液20 mL·kg-1）；A3：參麥 40組（給參麥注射液40 mL·kg-1）；A4：參麥80組（給參麥注射液80 mL·kg-1）。

此外，建立A0：空白參考組，即未建立H22移植瘤模型的空白鼠 4只。

給藥：空白參考組和模型組均灌胃生理鹽水0.2 mL·d-1，連續灌胃7d；A2、A3及 A4等三個給藥組分別按照 20、40和 80 mL·kg-1·d-1灌胃。連續給藥7 d。

此外，取4只空白鼠作為A0：空白參考組。2.3 檢測小鼠血常規 末次給藥后 24 h，眶靜脈叢采血，檢測血常規中白細胞（WBC）、淋巴細胞（LY）、中性粒細胞（NEUT）、單核細胞（MONO）、嗜酸性粒細胞（EO）及嗜堿性粒細胞（BASO）的濃度。

2.4 檢測血清 sIL-2R的含量 末次給藥后 24 h，眶靜脈叢采血，收集血清，按試劑盒說明書用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定 sIL-2R的含量。

2.5 檢測血清 IL-2，IL-4的含量 末次給藥后24 h，眶靜脈叢采血，收集血清，按試劑盒說明書采用 ELISA法測定 IL-2，IL-4的含量。

2.6 脾淋巴細胞增殖實驗 采血后，頸椎脫臼處死小鼠，無菌分離小鼠的脾臟，常規制備脾淋巴細胞，RPMI 1640，體積分數為 0.1的 FBS，5×10-5mol·L-12-巰基乙醇培養液重懸細胞，調整細胞濃度至2×109·L-1，接種于96孔板，加入終濃度為5 mg·L-1的PWM，常規培養70 h后，MTT法檢測各孔活細胞總數的情況，由以下公式計算刺激指數：

2.7 遲發型超敏反應實驗 給藥 d 2小鼠背部剃毛，在1×1 cm2范圍內涂抹20 μL丙酮致敏，給藥d 5，各組小鼠右耳用0.08 mol·L-1DNFB丙酮20 μL進行攻擊，48 h后頸椎脫臼處死小鼠，剪下雙耳，打孔稱重，以左右耳重量之差作為耳廓腫脹度。

2.8 統計分析 采用SPSS16.0軟件進行統計學分析，計量資料以±s表示，均通過正態性檢驗。多組間的比較為單因素方差分析，各組間兩兩比較（多重比較）為 HSD-q檢驗。顯著性水準 α＝0.05。

3 結果

3.1 對免疫抑制小鼠血常規的影響 數據見表1。與空白參考組相比，模型組WBC總數明顯降低，分類結果顯示比例失調；與模型組相比，參麥三個劑量組的白細胞（WBC）、淋巴細胞（LY）均明顯增高（P＜0.05）；中性粒細胞（NEUT）絕對數（總數×比例）明顯較低（P＜0.05），符合外周血WBC等組成特點。各指標具體的統計比較結果見表 1，不再逐一評價。

3.2 對荷瘤小鼠血清sIL-2R含量的影響 數據列示于表2。與空白參考組相比，荷瘤小鼠血清中sIL-2R含量明顯升高；參麥三個劑量組均可降低荷瘤小鼠血清中 sIL-2R含量。統計分析如下：

A1～A4等四個組整體比較（單因素方差分析）為有顯著性差異（P＜0.05）；各組兩兩多重比較（HSD-q檢驗）：參麥各組與模型組相比，差異均為顯著（P＜0.05）；參麥各組間比較，也多有顯著性意義（P＜0.05）。

表 1 參麥對荷瘤小鼠外周血白細胞的影響（Mean±Sd，n＝10）

表 2 參麥對荷瘤小鼠血清 sIL-2R、IL-2，IL-4含量的影響（Mean±Sd，n＝10）

3.3 對荷瘤小鼠血清 IL-2，IL-4含量的影響 數據仍見表2。總的變化趨勢和前述 sIL-2R相反：即荷瘤小鼠血清IL-2，IL-4明顯低于空白參考組；參麥各劑量組尤其是高、中劑量組，其血清 IL-2，IL-4水平均明顯高于模型組。統計分析如下：

IL-2，IL-4這二指標，A1～A4等四個組整體比較，差異均有顯著性意義（P＜0.05）；各組兩兩比較：參麥各組與模型組相比，參麥各組間比較，差異也多為顯著（P＜0.05）；詳見表2。

3.4 對荷瘤小鼠系統免疫功能的影響 數據見表3。由數據看出：與空白參考組相比，荷瘤小鼠脾臟淋巴細胞的體外增殖及其遲發型超敏反應能力明顯降低；與模型組比較，參麥對PWM刺激的小鼠脾淋巴細胞增殖和遲發型超敏反應能力有明顯改善作用。統計分析如下：

刺激指數及耳廓腫脹度這兩指標，A1～A4等四個組整體比較，差異均有顯著性意義（P＜0.05）；各組兩兩比較：參麥各組與模型組相比，差異均為顯著；參麥各組間比較，部分為差異顯著（P＜0.05）；詳見表3。

表3 參麥對荷瘤小鼠脾淋巴細胞增殖和遲發超敏反應的影響（Mean±Sd，n＝6）

4 討論

機體的免疫功能狀態與腫瘤的發生和發展有著密切的關系，當宿主免疫功能低下或者受到抑制時，腫瘤的發生率明顯增高，在腫瘤進行性生長時腫瘤患者的免疫功能也受到抑制［4-5］。外周白細胞為機體重要的免疫細胞；可溶性白細胞介素2受體（Solvable Interleukin-2 Receptor，sIL-2R）是一種重要的免疫抑制物［6］；IL-2是參與免疫應答的重要細胞因子，具有調節機體免疫作用［7］，sIL-2R可與 IL-2R競爭性結合 IL-2，從而抑制后者的抗腫瘤等生物學活性；IL-4是 B細胞活化的啟動因子，可促進 B細胞增殖、成熟及分化產生 IgE，從而促進體液免疫應答。IL-4的免疫作用機制復雜，但它與其他白介素在體內的含量比率應趨于平衡狀態，過高或過低都提示免疫系統可能受到損傷［8-9］。

本實驗觀察到參麥注射液可顯著升高荷瘤小鼠的白細胞總數，降低荷瘤小鼠血清sIL-2R的含量，顯著提高血清 IL-2，IL-4的水平，提示參麥注射液對荷 H22小鼠的免疫功能具有一定的改善和調節作用。

小鼠遲發型超敏反應是因 DNFB與小鼠腹壁皮膚蛋白結合可形成一種完全蛋白，并由此刺激 T淋巴細胞增殖成致敏淋巴細胞，再用DNFB進行抗原攻擊，致使局部腫脹，其腫脹的程度可以反應遲發型超敏反應程度，屬細胞特異性免疫能力［10］。參麥注射液對 PWM刺激的小鼠脾淋巴細胞增殖和遲發型超敏反應能力有明顯改善作用。綜上提示參麥注射液對荷瘤小鼠的系統免疫狀態有改善和調節作用，這對惡性腫瘤等疾病的防治具有重要意義。

［1］ 王曉慧，嚴玲微.惡性腫瘤放化療后白細胞下降致醫院感染調查與護理對策［J］.中華醫院感染學雜志，2012，22（1）：91-92.

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［3］ 沈培強，徐玲杰，白 洋，等.參麥注射液對小鼠血常規的影響及其臟器保護作用［J］.中國新藥雜志，2012，21（13）：1532-1535.

［4］ 王春花，胡 冰.CIK免疫治療對腫瘤患者生活質量影響的觀察［J］.安徽醫藥，2013，17（3）：406-408.

［5］ Hobeika AC，Morse MA，Osada T，et a1.Depletion of Human Regu1atory T Cells［J］.Methods Mol Biol，2011，707：219-231.

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［9］ 張繼成，呂文利.銀杏葉提取物對雙酚 A活化RBL-2H3細胞株表達IL-4和TNF-α的影響［J］.現代免疫學，2013，33（2）：119-122.

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Immunomodulatory effect of shenmai injection on mice with H22

XUE Rui，ZHANG Ji，ZHANG Yu-jie，et al
（Xiangyang Central Hospital Affiliated to Hubei University of Arts and Science，Xiangyang Hubei 441021，China）

Objective To study the immunomodulatory effect of shenmai injection on mice with H22.Methods After subcutaneous implantation of the H22 cells，the tumor-bearing mice were randomized into control group，three shenmai doses groups and normal control group.Those mice were given the different doses of shenmai.Immunity function of Shenmai was explored by determining its influence on leukocytes and classification，the serum content of sIL-2R，IL-2，IL-4，the spleen lymphocyte proliferation and delayed hypersensitivity thymus index.Results Shenmai injection significantly increased the white blood cells，IL-2 and IL-4，decreased the content of sIL-2R，promoted spleen lymphocyte proliferation and delayed hypersensitivity.Conclusion Shenmai injection modulates the immunity function on mice with H22.

shenmai injection；H22；leukocyte；sIL-2R；IL-2；IL-4；splenic lymphocyte proliferation；delayed hypersensitivity

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.05.008

2013-10-05，

2014-01-08）

章 激，男，副主任藥師，研究方向：腫瘤藥理，E-mail：22751520＠qq.com