腺苷及其受體激動劑對不穩定型心絞痛患者IL-18的影響

李永輝 邢曉春 張 寰

藥物臨床觀察

腺苷及其受體激動劑對不穩定型心絞痛患者IL-18的影響

李永輝 邢曉春 張 寰△

目的 觀察腺苷及腺苷受體激動劑對不穩定型心絞痛（UAP）患者白介素（IL）-18的影響，探討腺苷受體的作用機制。方法選取15例UAP患者（UAP組）及15例健康志愿者（對照組），采用腺苷及腺苷受體激動劑干預全血標本,雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（ELISA）檢測IL-18。結果低濃度腺苷(1～100 μmol/L)對UAP組IL-18表達有增強效應，高濃度(1 mmol/L)有抑制效應。腺苷A1受體激動劑與A3受體激動劑對IL-18表達有增強效應，而腺苷A2a受體激動劑對IL-18表達有抑制效應，腺苷A2b受體激動劑對IL-18表達未見明顯效應。結論腺苷在低濃度時對UAP患者IL-18的表達有促進作用，可能通過腺苷A1和A3受體發揮效應；高濃度時有抑制作用，可能通過腺苷A2a受體發揮作用。

心絞痛,不穩定型；白細胞介素18；腺苷；受體,腺苷A1；受體,腺苷A2；受體,腺苷A3

腺苷是一種內源性嘌呤核苷酸，機體遭受炎癥或組織缺血缺氧時，腺苷局部濃度能增至生理濃度的100倍[1]，腺苷可通過其受體對機體損傷或組織缺氧等做出適應性反應，不同腺苷受體可發揮獨特甚或重疊效應[2]。白介素（IL）-18是一種免疫調節因子，研究發現腺苷對急性冠脈綜合征患者外周血IL-18表達具有雙向作用[3]，具體受體機制鮮見報道。本研究擬通過腺苷受體激動劑模擬腺苷觀察其對不穩定型心絞痛患者IL-18表達的影響，探討其具體的受體機制。

1 對象與方法

1.1 研究對象 病例來源于我院2009年6月—2010年6月住院患者。本研究共入選不穩定型心絞痛（UAP組）及健康受試者（對照組）各15例。UAP組入選標準：UAP，典型心絞痛癥狀，心絞痛發作時，心電圖出現暫時性ST段缺血性壓低大于1 mm或ST段抬高大于3 mm，發作緩解后正常或接近正常；心肌酶正常；距末次發作12 h以內；梗死后心絞痛排除在外。排除標準：患有肝、腎功能障礙，惡性疾病，感染性疾病，風濕性、自身免疫疾病，營養不良性疾病，心肌病，心肌炎，心內膜炎，近期有手術史，有炎癥、腫瘤、發熱、貧血史者等情況均不入選。對照組、UAP組年齡（歲）比較（61.46± 4.42 vs 61.60±4.11，t=0.085，P=0.933）、性別（男/女）比較（8/7 vs 9/6，P=1.0）差異均無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 試劑及儀器 腺苷、腺苷A1受體激動劑（CPA）、腺苷A2a受體激動劑（CGS-21680）、腺苷A2b受體激動劑（NECA）、腺苷A3受體激動劑（IB-MECA）、HEPES、RPMI1640、二甲基亞砜（DMSO）均購自Sigma公司；人IL-18診斷試劑盒購自上海森雄科技實業有限公司。ELX-800型酶標儀為美國BIO-TCK公司產品，CO2孵箱（型號HF-90）為日本三洋科學儀器有限公司產品。

1.2.2 標本采集 UAP組患者在疼痛發生后12 h以內抽取肘正中靜脈血，對照組于清晨空腹抽取肘正中靜脈血3 mL置于肝素抗凝試管中混勻，室溫下保存＜2 h。將患者外周全血分裝于EP管中，每個管中加入100 μL全血，再加入100 μL RPMI1640（含有20 mmol/L HEPES使pH維持在7.3）混勻。

1.2.3 藥物干預裝 有稀釋血液的EP管分為5組：分別加入腺苷、CPA、CGS-21680、NECA、IB-MECA，使其終濃度各分別為0、1、10、100 μmol/L及1mmol/L；將處理后血樣本置于CO2孵箱（37℃，5％CO2）孵育12 h。然后取出待測樣本，700 r/min離心10 min，取上清保存在-20℃冰箱待檢測。待測血漿中無紅細胞裂解。

1.2.4 檢測方法 IL-18檢測采用雙抗體夾心ABC-ELISA法，以標準品1 000、500、250、125、62.5、32、16、0 ng/L的OD值在半對數紙上做圖，畫出標準曲線。根據樣本OD值在該曲線圖上查出相應人IL-18水平。

1.3 統計學方法 采用SPSS 16.0統計軟件包進行分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，2組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，多重比較用LSD法；計數資料采用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 不同濃度腺苷對IL-18的影響 當腺苷濃度0 μmol/L時，UAP組與對照組IL-18表達比較差異有統計學意義（t=14.382，P＜0.001）。對照組中，不同濃度腺苷對IL-18的表達未見明顯差異；UAP組中，腺苷低濃度時（1～100 μmol/L）可增強IL-18的表達，達到一定峰值濃度（1 mmol/L）則抑制IL-18表達,見表1。

2.2 不同受體激動劑對IL-18的影響 腺苷A1受體激動劑及腺苷A3受體激動劑隨濃度升高促進IL-18表達的效應增強；而A2a受體激動劑隨濃度升高則抑制IL-18表達的效應增強；A2b受體激動劑對IL-18的表達未見明顯作用，見表2。

3 討論

腺苷受體親和力的差異導致其發揮不同的生理效應[4]，臨床研究發現腺苷及腺苷擬似物在高濃度時可縮小梗死面積，提高心肌梗死患者的遠期生存率，但在濃度較低時未見明顯作用[5-6]。筆者前期研究發現腺苷對急性冠脈綜合征患者外周血IL-18表達具有雙向作用，高濃度腺苷對IL-18呈抑制作用，進一步探討腺苷對IL-18的具體受體機制可能為治療UAP提供新的思路[3]。IL-18是一種多效能炎癥因子，能導致動脈粥硬化斑塊增大，與動脈粥樣硬化斑塊脆性有關，敲除小鼠的IL-18基因可延緩動脈粥樣硬化的進程[7]。Li等[8]研究發現：IL-18與急性冠脈綜合征發生密切相關，Bouki等[9]采用光學相干斷層成像（OCT）對急性冠脈綜合征（ACS）患者的斑塊進行分析，發現IL-18與冠脈粥樣硬化斑塊不穩定性密切相關。其機制可能是通過誘導干擾素（IFN）-γ的產生及提高基質金屬蛋白酶的活性使膠原蛋白降解增多等多個途徑，促使斑塊的不穩定[10]。大量研究證實IL-18可預測冠脈事件的發生，可能是穩定動脈粥樣硬化斑塊的治療靶點[11]。

Tab.1 Effects of different concentrations of adenosine on the expression of IL-18 in UAP group and control group表1 不同濃度腺苷對UAP和正常人IL-18的影響 (ng/L，±s)

Tab.1 Effects of different concentrations of adenosine on the expression of IL-18 in UAP group and control group表1 不同濃度腺苷對UAP和正常人IL-18的影響 (ng/L，±s)

＊＊P＜0.01；a與0 μmol/L組比較，b與1 μmol/L組比較，c與10 μmol/L組比較，d與100 μmol/L組比較，P＜0.05；表2同

組別對照組UAP組0 μmol/L 3.74±0.87 18.96±4.01 1 μmol/L 3.81±0.66 24.47±3.81a10 μmol/L 4.16±0.55 35.11±4.16ab100 μmol/L 4.31±0.71 46.04±4.31abc1 mmol/L 3.87±0.62 18.96±3.87bcdF 1.871 101.364＊＊

Tab.2 Effects of different concentrations of adenosine receptor agonists on the expression of IL-18 in UAP group表2 不同濃度腺苷受體激動劑對UA患者IL-18的影響(ng/L，±s)

Tab.2 Effects of different concentrations of adenosine receptor agonists on the expression of IL-18 in UAP group表2 不同濃度腺苷受體激動劑對UA患者IL-18的影響(ng/L，±s)

組別0 μmol/L 1 μmol/L 10 μmol/L 100 μmol/L 1 mmol/L F CPA 18.961±3.869 20.711±4.209 26.136±3.481ab36.513±3.955abc36.909±3.518abc69.696＊＊CGS-21680 18.961±3.869 15.130±2.007a12.180±1.997ab9.839±1.608abc6.827±1.316abcd56.381＊＊NECA 18.961±3.869 18.269±1.849 18.874±1.628 18.106±1.798 18.227±2.063 0.100 IB-MECA 18.961±3.869 21.844±3.711 27.669±4.095ab36.980±4.008abc38.843±3.731abc72.842＊＊

本研究發現，UAP組IL-18表達明顯高于對照組，提示炎癥和免疫學機制可能參與了動脈粥樣斑塊破裂的病理生理學過程。腺苷對正常對照組外周血IL-18表達未見明顯影響，而對UAP組發揮明顯作用，提示斑塊破裂時患者單核細胞活化，從而增強IL-18的表達，進而加劇疾病進程。采用不同濃度腺苷對UAP患者外周血進行干預后發現，腺苷可對IL-18表達發揮雙向作用，在腺苷濃度100 μmol/L以內，隨濃度增高而表達增加，而腺苷濃度達到一定峰值（1 mmol/L）后，IL-18表達降低，提示腺苷在臨床治療時，應采用較大濃度。這與AMISTAD-Ⅱ研究結果一致[6]。腺苷A1受體、A3受體激動劑可促使UAP患者IL-18表達增加，而腺苷A2a受體激動劑可促使IL-18表達降低，腺苷在低濃度對IL-18表達的增強效應可能是通過腺苷A1及A3受體發揮作用，而高濃度時對IL-18表達的抑制效應可能是通過腺苷A2a受體發揮作用，而腺苷A2b受體與此無關。腺苷A2a受體在改善心肌缺血、穩定易損斑塊、改善預后方面發揮重要作用，可能為臨床治療提供新的思路。

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（2014-02-09收稿 2014-07-07修回）

（本文編輯 李國琪）

Effects of Adenosine and the Selective Adenosine Receptor Agonist on the Expression of Interleukin-18 in Patient with Unstable Angina

LI Yonghui,XING Xiaochun,ZHANG Huan△
Department of Cardiology,Fourth Central Hospital of Tianjin,Tianjin 300140,China
△

E-mail:huan_cn@126.com

ObjectiveTo observe the effects of adenosine and adenosine receptor agonist on the expression of interleukin-18(IL-18)in patients with unstable angina(UAP),and the mechanism of adenosine receptor agonists thereof.MethodsFifteen UAP and 15 healthy volunteers were included in this study.The effects of adenosine and the selective adenosine receptor agonists on the expression of IL-18 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).ResultsThe lower concentration of adenosine(1-100 μmol/L)increased the expression of IL-18 in UAP group;whereas the higher concentration of adenosine(1 mmol/L)inhibited the expression of IL-18.The adenosine A1receptor agonist and A3receptor agonist increased the expression of IL-18,while the adenosine A2areceptor agonist inhibited the expression of IL-18.There was no significant effect for A2breceptor agonist on the expression of IL-18.ConclusionThe lower concentrations of adenosine can enhance the expression of IL-18 through adenosine A1and A3receptors in UAP.The higher concentrations of adenosine can inhibit the expression of IL-18 through adenosine A2areceptors.Adenosine can promote IL-18 expression in lower concentrations.

angina,unstable;interleukin-18;adenosine;receptor,adenosine A1;receptor,adenosine A2;receptor, adenosine A3

R541.42

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.11.024

天津市衛生局科技基金資助項目（09KZ21）

天津市第四中心醫院心內科CCU（郵編300140）△

E-mail:huan_cn@126.com