種雞脾轉(zhuǎn)移因子配合禽流感H5亞型滅活疫苗免疫最佳應(yīng)用時(shí)機(jī)探索

張 恒 王海兵 宣大蔚 （山東信得科技股份有限公司 山東 諸城 262200）

種雞脾轉(zhuǎn)移因子配合禽流感H5亞型滅活疫苗免疫最佳應(yīng)用時(shí)機(jī)探索

張 恒 王海兵 宣大蔚 （山東信得科技股份有限公司 山東 諸城 262200）

本研究通過種雞脾轉(zhuǎn)移因子配合H5油苗免疫試驗(yàn)，驗(yàn)證了種雞脾臟轉(zhuǎn)移因子提高體液免疫活性，同時(shí)比較了免疫H5油苗不同時(shí)間段應(yīng)用種雞轉(zhuǎn)移因子產(chǎn)生的體液免疫效果，其中在油苗免疫后3d應(yīng)用轉(zhuǎn)移因子作用效果最好。

轉(zhuǎn)移因子 種雞 信必妥 H5

轉(zhuǎn)移因子(TF)是機(jī)體內(nèi)具有免疫活性的 T 淋巴細(xì)胞所釋放的一種能夠轉(zhuǎn)移免疫致敏信息的因子，它能夠特異地將供體某一細(xì)胞免疫的功能轉(zhuǎn)移給受體，非特異性地增強(qiáng)受體免疫功能，是一種新型免疫激發(fā)劑[1]。它能將

供體細(xì)胞免疫功能轉(zhuǎn)移給受體,增強(qiáng)受體免疫功能,而且可以通過T細(xì)胞來調(diào)節(jié)B細(xì)胞，改善其體液免疫功能,從而增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力[2]。近年來動物轉(zhuǎn)移因子的研究與應(yīng)用引起了人們的重視，取得了明顯成就。

本研究驗(yàn)證種雞脾轉(zhuǎn)移因子對禽流感H5亞型二價(jià)滅火免疫的免疫增強(qiáng)作用，同時(shí)比較了種雞脾轉(zhuǎn)移因子在疫苗免疫不同時(shí)間段應(yīng)用對疫苗的免疫增強(qiáng)作用，為轉(zhuǎn)移因子在臨床更好的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動物 30日齡蛋雛雞購自諸城某養(yǎng)殖場，飼養(yǎng)于干凈衛(wèi)生的環(huán)境中，自由采食；SPF公雞購自濟(jì)南斯派福禽業(yè)科技有限公司，飼養(yǎng)于負(fù)壓隔離器中，自由采食。

1.1.2 主要試劑 種禽信必妥口服液(主要成分是雞脾臟轉(zhuǎn)移因子)產(chǎn)自山東信得科技有限公司。重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗(H5N1，Re-6株+Re-4株)購自青島易邦生物股份有限公司。H5N1 Re-4檢測抗原購買于青島易邦生物股份有限公司，H5N1 Re-6檢測抗原購買于哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司，飼料若干購買于山東亞太中慧集團(tuán)。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)動物處理及分組 30日齡80只蛋雞飼養(yǎng)至60日齡后平均分成8組，每組10只，具體處理方法見表1。

1.2.2 采樣時(shí)間及處理方式 在進(jìn)行試驗(yàn)開始前一周抽取10只雞進(jìn)行翅靜脈采血分離血清，檢測H5N1的Re-4、Re-6母源抗體效價(jià)；在免疫H5N1油苗后，7、14、21、28d，進(jìn)行翅靜脈采血分離血清，采用HI/HA試驗(yàn)測H5N1的Re-4、Re-6血清型抗體效價(jià)。

表1 試驗(yàn)動物分組及處理情況

1.2.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS18.0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 母源抗體效價(jià)檢測結(jié)果

通過血凝抑制試驗(yàn)HI測定10只抽樣雞只的抗體效價(jià)為：血清學(xué)Re-4株抗體效價(jià)為0；血清學(xué)Re-6株抗體效價(jià)為0；可以用于后續(xù)疫苗免疫試驗(yàn)，并設(shè)立空白對照，隨時(shí)監(jiān)測空白雞群血清學(xué)Re-4株和Re-6株抗體效價(jià)。

2.2 H5N1 Re-4血清學(xué)抗體效價(jià)

通過血凝抑制試驗(yàn)HI測定每只雞的抗體效價(jià)，使用以下方法計(jì)算每組平均抗體效價(jià)，平均抗體效價(jià)各組血清學(xué)Re-4株平均抗體效價(jià)見表2、圖1。

由表2可以看出，免疫重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗后3d，應(yīng)用種雞脾轉(zhuǎn)移因子，在免疫疫苗后14、21、28d血清學(xué)Re-4株抗體效價(jià)最高。在免疫后14d，免疫后3d組(3組)與只免疫苗組(6組)和免疫前3d組(1組)比較差異顯著(P＜0.05)；在免疫后21d，與1組和5組比較差異極顯著(P＜0.01)，與6組比較差異顯著(P＜0.05)；在免疫后28d，與6組和1組比較差異顯著(P＜0.05)。

表2 Re-4血清型抗體效價(jià)檢測結(jié)果 (log2)

圖1 Re-4血清型抗體滴度變化曲線

2.3 H5N1 Re-4血清學(xué)抗體效價(jià)

各組血清學(xué)Re-6株平均抗體效價(jià)見表3、圖2。由表1可以看出，免疫重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗后3d，應(yīng)用種雞脾轉(zhuǎn)移因子，在免疫疫苗后14、21、28d血清學(xué)Re-6株抗體效價(jià)最高。在免疫后14d，免疫后3d組(3組)與只免疫苗組(6組)、免疫后9d組(5組)和免疫前3d組(1組)比較差異顯著；在免疫后21d，與1組、4組、5組和6組比較差異顯著；在免疫后28d，與1組比較差異顯著。

表3 Re-6血清型抗體效價(jià)檢測結(jié)果 (log2)

圖2 Re-6血清型抗體滴度變化曲線

3 討論

近幾年來雞脾轉(zhuǎn)移因子在臨床上應(yīng)用越來越廣泛，其配合疫苗免疫可以顯著提高免疫后的抗體效價(jià)。張恒，李文鵬等(2012年)研究發(fā)現(xiàn)給SPF雛雞口服后可以顯著提高免疫疫苗的抗體滴度，說明轉(zhuǎn)移因子可以增強(qiáng)體液免疫反應(yīng)，增強(qiáng)疫苗的保護(hù)效果[3]。趙支國，李相安等

(2004年)研究發(fā)現(xiàn)TF具有良好的生物活性,可促進(jìn)機(jī)體產(chǎn)生良好的免疫效果,增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能[4]。筆者針對雞脾轉(zhuǎn)移因子配合疫苗免疫應(yīng)用時(shí)機(jī)進(jìn)行了試驗(yàn)，為雞脾轉(zhuǎn)移因子進(jìn)一步更好的應(yīng)用于臨床提供依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)雞脾轉(zhuǎn)移因子在二價(jià)滅火疫苗免疫后3d應(yīng)用，疫苗免疫產(chǎn)生的抗體效價(jià)最好；禽流感H5亞型的兩個(gè)血清型Re-4和Re-6的抗體效價(jià)均是免疫后3d應(yīng)用種雞脾轉(zhuǎn)移因子組最好。并且進(jìn)行了重復(fù)試驗(yàn)，得出一致的結(jié)論，這更好的驗(yàn)證了本試驗(yàn)結(jié)果。

雞脾轉(zhuǎn)移因子同時(shí)因其效果明顯，無毒性，來源廣泛，無抗原性，因此筆者認(rèn)為雞脾轉(zhuǎn)移因子具有很好的應(yīng)用前景和較大的發(fā)展?jié)摿Γ狙芯堪l(fā)現(xiàn)進(jìn)一步促進(jìn)了雞脾轉(zhuǎn)移因子臨床上的應(yīng)用。

[1] 喬彥良. 動物轉(zhuǎn)移因子研究與在畜禽疫病防治中的應(yīng)用[J]. 中國禽業(yè)導(dǎo)刊, 2002, 19 (23): 45-47.

[2] 江青艷, 戴遠(yuǎn)威. 脾臟轉(zhuǎn)移因子對粵黃雞免疫功能的影響[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志, 1996, 7(15): 6-8.

[3] 張恒, 李文鵬, 吳慶海等. 雞轉(zhuǎn)移因子(信必妥)活性檢測[J]. 山東畜牧獸醫(yī), 2012, 6(10): 8-9.

[4] 趙支國, 趙洪娟, 李相安等. TF對雞體液免疫效果的影響試驗(yàn)[J].山東畜牧獸醫(yī), 2004, 4(5): 4.

S851.33

A

1007-1733(2014)01-0010-02

2013–10–31）