高危HPV結合分型檢測與宮頸癌生物學的相關性研究

黃光豪

摘要：目的：探討高危HPV結合分型檢測與宮頸癌生物的相關性。方法：選擇2010年5月～2013年5月為我院收治的宮頸癌患者279例，采用HC II技術以及HybriMax技術檢測HPV DNA病毒載量以及病毒分型，分析高危型HPV分型與宮頸癌生物學的相關性。結果：本組279例患者中，其中檢出高危HPV DNA陽性患者258例，檢出陽性率為92.47%；在HPV DNA基因型多重感染上，I-II期患者檢出陽性率為13.27%、III-IV期患者檢出陽性率為23.53%，二者比較，差異具有統計學意義（p<0.05）；在HPV 18基因型上，鱗癌患者檢出陽性率為6.8%、非鱗癌患者檢出陽性率為18.75%，二者比較，差異具有統計學意義（p<0.05）；在各HPV DNA基因型上，不同組織分化患者檢出陽性率之間差異均不具有統計學意義（p>0.05）。結論：：宮頸癌患者病情越嚴重其多重感染的檢出率越高，且不同高危HPV分型與宮頸癌生物學行為具有著一定的相關性。

關鍵詞：高危HPV；宮頸癌；相關性Abstract：Objective： To investigate the correlation of HPV with high risk genotypes and cervical cancer biology. Methods： in 2010 May ～2013 year in May 279 cases with cervical cancer patients， using the HC II technology and HybriMax technology in detection of HPV DNA viral load and virus types， analysis of the correlation between high-risk HPV subtypes and cervical cancer biology. Results： This group of 279 patients， including 258 cases of high-risk HPV detection of DNA positive patients， the positive rate was 92.47%； in the HPV genotype DNA infected patients with multiple， I-II positive rate was 13.27%， III-IV positive rate was 23.53% in patients， a comparison of the two， the difference was statistically significant （p<0.05）； HPV genotype in 18 patients with squamous cell carcinoma， the positive rate was 6.8%， the positive rate in patients with non squamous cell carcinoma was 18.75% two， comparison， the difference was statistically significant （p<0.05）； in the HPV genotype of DNA gene， the difference between different tissue differentiation in patients with positive rate were not statistically significant （p>0.05）. Conclusion： the patients with cervical cancer disease severity of the multiple infection rate is higher， and different high risk type of HPV and the biological behavior of cervical cancer have a certain correlation.

Key words：High risk HPV； Cervical cancer； Correlation

【中圖分類號】R453【文獻標識碼】 A【文章編號】1002-3763（2014）09-0053-02宮頸癌是僅次于乳腺癌的全球第二常見的婦女癌癥。現代研究已經公認了人乳頭狀瘤病毒（HPV）的感染是造成宮頸癌的一個主要病因[1]。由于高危型人乳頭狀瘤病毒的持續感染能夠造成子宮癌前期病變以及宮頸癌的發生[2]。而HPV其具有著多種基因型，但是不同基因分型與宮頸癌生物學之間的相關性仍然未能獲得研究者的共識。本研究探討高危HPV結合分型檢測與宮頸癌生物學行為之間的相關性，現報告如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2010年5月～2013年5月為我院收治的宮頸癌患者279例，患者年齡在24～68歲之間，平均年齡為41.49歲，79例入組患者均經過病理學診斷確診為宮頸癌。按照國際婦產科聯盟標準臨床分期[3]，其中I期患者97例、II期患者114例、III期患者67例、IV期患者1例；按照WHO組織學類型標準[4]，其中鱗癌患者247例、非鱗癌患者32例；按照WHO組織分化標準[5]，其中高分化患者19例、中分化患者185例、低分化患者75例。

1.2 儀器與試劑

ABI7700熒光定量PCR儀、凱普HybriMax雜交儀；DNA提取試劑盒（德國QIAGEN）、PCR擴增試劑盒（購于新朝陽生物有限公司）、雜交試劑盒（購于新朝陽生物有限公司）。

1.3 研究方法

1.3.1 標本采集

在非月經期進行采樣，患者才進行采樣的淺3天之內不能夠使用陰道栓劑、采用的前一天禁止性生活。采樣時由醫生使用窺器將患者子宮頸暴露，將其宮頸分泌物擦去后用專用GPV采用刷與宮頸口順時針旋轉5周后停留10秒鐘，將其立即放入專用試管中（內含細胞保存劑），封蓋后將其置于4℃冰箱內保存待檢測，需在2周之內完成檢測。

1.3.2 病毒載量檢測

采用HC II 檢測患者HPV DNA載量，共檢測13種高危型HPV，他們是：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行，當RLU/陽性對照RLU在1.0以上時則作為HPV DNA 陽性。

1.3.3 病毒分型檢測

采用HybriMax技術檢測患者HPV DNA分型，共檢測21種亞型，其中低危亞型6種，分別是：6、11、42、43、44、HPVcp8340；高危亞型15種，分別為：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68。

1.4 統計學處理

采用統計學軟件SPSS 19.0對數據進行統計分析，結果采用X2檢驗，以p<0.05作為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 高危型HPV DNA陽性率

本組279例患者中，其中檢出高危HPV DNA陽性患者258例，檢出陽性率為92.47%。

2.2 不同臨床分期患者HPV DNA分型分別情況

不同臨床分期患者HPV DNA分型分布情況見表1， 在HPV DNA基因型多重感染上，I-II期患者檢出陽性率為13.27%、III-IV期患者檢出陽性率為23.53%，二者比較，差異具有統計學意義（p<0.05）；而在其他HPV DNA基因型上，不同臨床分期患者之間陽性率不具有統計學差異（p>0.05）。

表1 不同臨床分期患者HPV DNA分型情況 [n（%）]

HPV基因型臨床分期I-II期（n=211）III-IV期（n=68）X2P值16109（51.66）32（47.06）0.4350.0591816（7.58）8（11.76）1.1440.2855812（5.69）4（5.82）0.0040.9525211（5.21）3（4.41）0.0690.792337（3.32）2（2.94）0.0230.879其他8（3.79）2（4.41）0.1080.743多重感染28（13.27）16（23.53）4.0750.0442.3 不同組織學類型患者HPV DNA 分型分布情況：不同組織學類型患者HPV DNA分型分布見表2，在HPV 18基因型上，鱗癌患者檢出陽性率為6.8%、非鱗癌患者檢出陽性率為18.75%，二者比較，差異具有統計學意義（p<0.05）；在其他各HPV DNA基因型上，不同組織學類型患者檢出陽性率不具有統計學顯著性差異（p>0.05）。

表2 不同組織學類型患者HPV DNA 分型分布 [n（%）]

HPV DNA分型不同組織學類型鱗癌（n=247）非鱗癌（n=32）X2P值16129（52.22）14（43.75）0.8150.3671816（6.8）6（18.75）5.8740.0155815（6.73）2（6.25）0.0020.9695213（5.26）2（6.25）0.0520.820337（2.83）1（3.13）0.0090.926其他17（6.88）2（6.25）0.0180.894多重感染31（12.96）3（9.38）0.2670.6052.3 不同組織分化患者HPV DNA分型：不同組織分化患者HPV DNA分型分布情況見表3，在各HPV DNA基因型上，不同組織分化患者檢出陽性率之間差異均不具有統計學意義（p>0.05）。

表3 不同組織分化患者HPV DNA分型分布 [n（%）]

HPV DNA分型不同組織分化高/中分化（n=204）低分化（n=75）X2P值16103（50.49）36（48.00）0.1360.7121812（5.88）6（8.00）0.4070.5235811（5.39）3（4.00）0.2230.6375213（6.37）6（8.00）0.0460.830336（2.94）3（4.00）0.1970.657其他14（6.86）4（5.33）0.2130.645多重感染29（14.21）12（16.00）0.1390.7093 討論

現代醫學研究表明，發生宮頸癌及其癌前的病變其中一個必要條件為高危型HPV的持續感染，此觀點已經獲得全球婦科學者之間的共識[6]。通過高危型HPV DNA的檢測，能夠從病因學的水平將即將發生或者已經發生的宮頸癌病變篩選出來[7]。而近些年以來，我國研究者運用分子生物學的技術對高危型HPV DNA 進行篩查，其中HC II便是其中發展較為迅速且運用簡單、可靠的一種分子生物學技術[8-9]。在本研究中，運用HC II技術對我院宮頸癌患者279例進行篩查，結果顯示，我院279例患者中，高危型HPV檢出陽性率為92.47%。該陽性率略低于文獻報道數據[10-11]，究其原因可能為：①采用HC II僅針對的是13種特定的HPV高危分型，但是對于某些高危分型卻未包括；②可能由于臨床醫生在取樣時存在操作上的差異，可能對樣本中獲取的宮頸脫落細胞數目造成影響，從而使得檢測結果有所差異；③由于患者組織細胞缺氧所造成的組織細胞壞死可能導致HPV DNA發生丟失。

現已確定的發生宮頸癌最為主要的原因為高危型HPV持續性的感染以及反復感染，而不同的HPV基因亞型其編碼外殼蛋白的基因具有著較大的差異，而在不同HPV基因亞型之間沒有具有交叉保護抗體，因此患者發生不同高危型HPV的多重感染以及交叉感染[12]。國外研究者報道稱[13]，感染單一的HPV患宮頸癌的風險較常人增加19.9倍，而若感染多重HPV則使得患宮頸癌的風險較常人增加31.8倍；但是同時也有研究者表示[14-15]，HPV多重感染并不會使得宮頸癌的患病率有所增加。在本研究中，不同臨床分期患者在多重感染上存在差異，III-IV期患者其多重感染檢出率顯著高于I-II期患者，表明了病情越嚴重的患者其多重感染的檢出率越高。此外研究顯示，在HPV 18基因型上，鱗癌患者檢出陽性率為6.8%、非鱗癌患者檢出陽性率為18.75%，二者比較，差異具有統計學意義（p<0.05）。表明了不同高危HPV分型與宮頸癌生物學行為具有著一定的相關性，而二者之間明確的關系還有待進一步大樣本研究結果。

綜上所述，宮頸癌患者病情越嚴重其多重感染的檢出率越高，且不同高危HPV分型與宮頸癌生物學行為具有著一定的相關性。

參考文獻

[1]楊雪， 附艦， 康艷霞， 等. 調強適形放射治療聯合每周紫杉醇+ 卡鉑方案在宮頸癌術前同步放化療的臨床觀察[J]. 中國腫瘤臨床與康復， 2013 （9）： 1027-1028.