XRCC1基因多態性與宮頸鱗癌放療敏感性的關系*

樊曉妹 李魁秀 牛書懷 房朝輝 金 鴿

XRCC1基因多態性與宮頸鱗癌放療敏感性的關系*

樊曉妹 李魁秀△牛書懷 房朝輝 金 鴿

目的 探討XRCC1基因Arg194Trp、Arg399Gln單核苷酸多態性(SNP)與外生型宮頸鱗狀細胞癌放療敏感性的關系。方法選擇經組織病理學確診的外生型宮頸鱗狀細胞癌患者73例。其中臨床分期Ⅰ期4例，Ⅱ期36例，Ⅲ期30例，Ⅳ期3例。腫瘤直徑≤4 cm 30例，腫瘤直徑＞4 cm 43例；A點劑量≤80 Gy者36例，A點劑量＞80 Gy者37例。近期療效為完全緩解者(CR組)47例，部分緩解者(PR組)26例。采用錯配擴增聚合酶鏈式反應檢測患者血液標本的XRCC1 Arg194Trp、Arg399Gln SNP的基因型頻率分布，分析其與宮頸癌放療敏感性的關系。結果XRCC1基因Arg194Trp分型中，攜帶Arg/Arg、Arg/Trp、TrP/Trp分別有31例（42.5%）、37例（50.7%）、5例（6.8%）；Arg399Gln分型中，攜帶Arg/Arg、Arg/Gln、Gln/Gln分別有26例（35.6%）、39例（53.4%）、8例（11.0%）。CR組與PR組Arg194Trp、Arg399Gln基因型分布差異均無統計學意義。影響放療敏感性的多因素Logistic回歸分析結果顯示，臨床分期晚為PR的危險因素。結論XRCC1基因Arg194TrpSNP、Arg399Gln SNP與外生型宮頸鱗狀細胞癌放療敏感性無相關性。臨床分期越晚放療敏感性越差。

宮頸腫瘤；癌,鱗狀細胞；X-射線交錯互補修復基因1；單核苷酸多態性；放療敏感性

在我國，宮頸癌仍是最常見的女性生殖道惡性腫瘤，且呈現年輕化趨勢，嚴重危及女性的生命與健康[1]。目前宮頸癌根治術和同步放化療是宮頸癌患者的主要治療方法。然而，在臨床治療中卻發現，同樣的病例給予同等劑量的放療及化療方案，不同個體對治療反應不同，腫瘤對放化療敏感性也有一定差別。因此尋找影響患者療效的內在因素極為重要。有報道顯示，XRCC1基因多態性與多種腫瘤的放化療敏感性相關，如頭頸部腫瘤、肺癌、乳腺癌等[2-4]，但與宮頸癌放化療療效關系的研究較少。本研究旨在探討XRCC1基因Arg194Trp、Arg399Gln單核苷酸多態性(SNP)與宮頸癌放療敏感性的關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2008年6月—2009年5月于我院婦瘤科住院初治，并均經組織病理學確診的外生型宮頸鱗狀細胞癌患者73例。臨床分期采用國際婦產科聯盟（FIGO）標準，其中Ⅰ期4例，Ⅱ期36例，Ⅲ期30例，Ⅳ期3例。腫瘤直徑≤4 cm者30例，腫瘤直徑＞4 cm者43例；A點劑量≤80 Gy者36例，A點劑量＞80 Gy者37例。近期療效為完全緩解(CR)者47例，年齡35～72歲，中位年齡51歲；部分緩解(PR)者26例，年齡34～78歲，中位年齡52歲。標本采集均由本人知情同意。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 取患者靜脈血5 mL，經枸櫞酸鈉抗凝，4℃冰箱保存。采血1周內以蛋白酶K消化-飽和氯化鈉鹽析法提取外周血白細胞DNA。

1.2.2 基因多態性檢測 根據錯配擴增聚合酶鏈式反應(MAMA-PCR)工作原理，每個SNP的檢測均設計3條引物，包括2條上游引物和1條下游引物，其中2條上游引物均在3′端的末位根據不同的SNP堿基給予不同的錯配，共用下游引物。根據NCBI網站上公布的DNA全序列信息，在Primer Designer 3.0.0.1版軟件輔助下，自行設計引物，由北京賽百盛基因技術有限公司合成。XRCC1 Arg194Trp上游引物為5′-GGGGGCTCTCTTCTTCAGGC-3′,5′-GGGGGCTCTCTTCTTC AGGT-3′，下游引物為5′-CGCTGGCTGTGACTATGAAG-3′。XRCC1 Arg399Gln上游引物為5′-CGTCGGCGGCTGCCCTCCTG-3′，5′-CGTCGGCGGCTGCCCTCCTA-3′,下游引物為5′-TTACAGGCGTGAGCCACTGC-3′。MAMA-PCR反應體系：滅菌去離子水18.0 μL，1×PCR緩沖液2.5 μL，PCR染料2.0 μL，上、下游引物各0.4 μL，dNTPs 0.5 μL，Taq酶0.2 μL，模板DNA1.0 μL。反應條件：94℃預變性5 min。以后按94℃變性45 s，62℃（Arg194Trp）、69℃（Arg399Gln）退火45 s，72℃延伸45 s，35個循環后。72℃延伸10 min后4℃結束。擴增產物經2%瓊脂糖電泳溴化乙錠（EB染色），紫外燈下觀察結果。

1.3 統計學方法 應用SPSS 13.0軟件進行統計分析。計數資料以例（%）表示，2組間比較采用χ2檢驗。影響放療敏感性的危險因素分析行Logistic多因素回歸分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Arg194Trp SNP與外生型宮頸鱗狀細胞癌放療敏感性的關系 73例外生型宮頸鱗狀細胞癌中XRCC1基因Arg194Trp分型中，攜帶Arg/Arg、Arg/ Trp、TrP/Trp分別有31例（42.5%）、37例（50.7%）、5例（6.8%）。CR組與PR組間分布差異無統計學意義，見表1。

Table1 Association between Arg194Trp/Arg399G SNP and radiotherapy response in squamous cell carcinoma of cervix表1 Arg194TrpSNP與外生型宮頸鱗狀細胞癌放療敏感性的關系 例（%）

2.2 Arg399Gln SNP與外生型宮頸鱗狀細胞癌放療敏感性的關系 73例外生型宮頸鱗狀細胞癌中XRCC1基因Arg399Gln分型中，攜帶Arg/Arg、Arg/ Gln、Gln/Gln分別有26例（35.6%）、39例（53.4%）、8例（11.0%）。CR組與PR組間分布差異無統計學意義，見表2。

Table 2 Association between Arg399Gln SNP and radiotherapy response in squamous cell carcinoma of cervix表2 Arg399GlnSNP與外生型宮頸鱗狀細胞癌放療敏感性的關系 例（%）

2.3 影響放療敏感性的危險因素分析 見表3。以放療結局為因變量（CR=0，PR=1），以年齡、臨床分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分別賦值0、1、2、3）、腫瘤大小（腫瘤直徑≤4 cm=0，＞4 cm=1）、A點劑量（≤80 Gy= 0，＞80 Gy=1）、Arg194Trp基因型、Arg399Gln基因型為自變量，進行多因素Logistic回歸分析，結果顯示臨床分期晚是PR的危險因素。

Table 3 Logistic regression analysis of factors of radiotherapy sensitivity表3 影響放療敏感性的多因素Logistic回歸分析結果

3 討論

目前針對XRCC1基因多態性與多種腫瘤放化療敏感性關系的研究結果不盡一致。Cheng等[5]對70例局部晚期宮頸癌患者行鉑類為基礎新輔助化療，分析其外周血白細胞中XRCC1基因，結果顯示，XRCC1Arg194Trp基因型分布在化療有效組及無效組間差異無統計學意義，Arg399Gln基因型分布在化療有效組及無效組間差異有統計學意義，攜帶至少1個Gln等位基因患者化療失敗風險明顯高于攜帶Arg/Arg基因型者，提示XRCC1基因Arg399Gln SNP可能影響宮頸癌患者以鉑類為基礎的新輔助化療療效。王中華等[2]對105例接受以鉑類為基礎藥物化療的非小細胞肺癌患者研究發現，攜帶至少1個194Trp等位基因者化療有效率（43.1%）高于攜帶Arg/Arg基因型者（20.3%），攜帶399Arg/Arg基因型者化療有效率（41.5%）高于攜帶至少1個Gln等位基因者（21.2%）。本研究結果顯示，XRCC1基因Arg194Trp、Arg399Gln基因型分布在CR組與PR組間差異均無統計學意義，提示Arg194TrpSNP、Arg399Gln SNP不能作為預測外生型宮頸鱗癌放療敏感性的指標。與相關文獻結果不同可能是由于宮頸癌的發生是多因素、多階段和多基因的過程，是由于環境危險因素、行為因素和個體遺傳因素交互作用的結果，僅對某一兩個基因或位點進行分析具有一定的局限性[3]，另外本研究樣本量較少，突變型基因頻率低，不足以說明其SNP與外生型宮頸鱗狀細胞癌放療敏感性的關系。

關于臨床分期對放療敏感性的影響尚存在爭議。戴鈺輝等[6]研究結果顯示，隨著臨床分期加重，腫瘤的放療抗拒增大。國外也有研究顯示，ⅣA期宮頸癌放療局控率差，因此為提高局控率和無病間隔期可加大A點劑量[7]。而張欣欣等[8]研究認為臨床分期與放療敏感性關系不大。本研究結果顯示，臨床分期越晚，放療敏感性越差。結果存在差異的原因可能是實驗樣本較少，可能不具備代表性，另外治療方式不同也可直接影響治療結果。故需進一步深入研究，為今后的個體化治療方案提供依據。

[1]李雪,孔為民,韓超,等.首都醫科大學附屬北京婦產醫院1992-2011年間宮頸癌發病趨勢分析[J].中華婦幼臨床醫學雜志, 2013,9(3):310-314.

[2]王中華,繆小平,譚文,等.單核苷酸多態與晚期非小細胞肺癌對鉑類藥物化療敏感性的相關性[J].癌癥,2004,23(8):865.

[3]彭小波,張軍寧.XRCC1單核苷酸多態性與含鉑類藥物化療對肝腎功能影響相關性分析[J].實用癌癥雜志,2011,26(2):147.

[4]Przybylowska-Sygut K,Stanczyk M,Kusinska R,et al.Association of the Arg194Trp and the Arg399Gln polymorphisms of the XRCC1 gene with risk occurrence and the response to adjuvant therapy among Polish women with breast cancer[J].Clin Breast Cancer, 2013,13(1):61-68.doi:10.1016/j.clbc.2012.09.019.

[5]Cheng XD,Lu WG,Ye F,et al.The association of XRCC1 gene single nucleotide polymorphisms with response to neoadjuvant chemotherapy in locally advanced cervical carcinoma[J].J EXP Clin Cancer Res,2009,28(1):91.doi:10.1186/1756-9966-28-91.

[6]戴鈺輝,李小娟.宮頸癌不同臨床分期放療抗拒與缺氧誘導血管新生的關系[J].河北醫藥,2011,33(16):3416-3418.

[7] Páez D,Salazar J,Paré L,et al.Pharmacogenetic study in rectal cancer patients treated with preoperative chemoradiotherapy:polymorphisms in thymidylate synthase,epidermal growth factor receptor,GSTP1,and DNA repair genes[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys, 2011,81(5):1319-1327.doi:10.1016/j.ijrobp.2011.01.025.

[8]張欣欣,盛修貴,燕玉鳳.影響宮頸癌放療敏感性的臨床病理因素分析[J].中華腫瘤防治雜志,2011,18(15):1204-1207.

（2013-11-04收稿 2014-03-13修回）

（本文編輯 陳麗潔）

Correlation of XRCC1 Polymorphism with Radiotherapy Response in Squamous Cell Carcinoma of Cervix

FAN Xiaomei,LI Kuixiu,NIU Shuhuai,FANG Zhaohui,JIN Ge
Department of Gynecologic Oncology,Hebei Medical University Fourth Hospital,Shijiazhuang Hebei 050011,China

ObjectiveTo investigate the correlation of XRCC1 Arg194Trp Arg399Gln Single nucleotide polymorphism(SNP)with radiotherapy response of squamous cell carcinoma of cervix.MethodsPatients with exogenous type cervical squamous cell carcinoma confirmed by histopathology were selected for our study.These include:patients in stageⅠ(4 cases),patients in stageⅡ(36 cases),patients in stageⅢ(30 cases),patients in stageⅣ (3 cases).There are 30 patients with tumor diameter less than 4 cm and 43 patients with tumor diameter over 4 cm in our test.There are 36 cases with dose point A less than 80 Gy and 37 cases with dose point A over 80 Gy.Radiotherapy outcomes showed 47 cases of complete remission and 26 cases of part remission.Polymorphisms Arg194Trp,Arg399Gln of XRCC1 gene in 73 cervical cancer patients were analyzed by mismatch amplification polymerase chain reaction(MAMA-PCR).ResultsArg/Arg,Arg/Trp,TrP/ Trp of Arg194Trp genotype distribution were 31(42.5%),37(50.7%),5(6.8%)respectively.Arg/Arg,Arg/Gln,Gln/Gln of Arg399Gln distribution were 6(35.6%),39(53.4%),8(11.0%)respectively.The response to radiotherapy was not statistically significant in three genotypes,Arg/Arg,Arg/Trp,TrP/Trp of XRCC1 at codon 194(P＞0.05).Neither was XRCC1 at codon 399.Multivariate analysis showed that late clinical stage was a risk factor of part remission.ConclusionSNP of XRCC1 gene at codon 194 and codon 399 could not predict clinical response of patients with squamous cell carcinoma of cervix to radiotherapy.The patients with advanced cervical cancer had poor response to radiotherapy.

uterine cervical neoplasms;carcinoma,squamous cell;X-ray repair cross-complementing gene 1；single nucleotide polymorphism；radiotherapy sensitivity

R737.33

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.06.022

*河北省科技計劃項目（項目編號：12277767）

河北醫科大學第四醫院婦瘤科(郵編050011)

△通訊作者 E-mail：lkxdr@sina.com